綜合性設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)-3(完整版)
【正文】 而具有不同的泳動(dòng)速度，因此，電泳一定的時(shí)間（ t）就可互相分離。 ? 緩沖液 pH和離子強(qiáng)度： pH值距離其等電點(diǎn)愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過高或過低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強(qiáng)度；強(qiáng)度過低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強(qiáng)度過高，在待分離分子周圍形成較強(qiáng)的帶相反電荷的離子擴(kuò)散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。 2. 加樣：光面用鉛筆標(biāo)注，無光澤面距一端 （不能看見有液滴形成），待血清進(jìn)入膜內(nèi)，移開點(diǎn)樣器。 ? 腎病綜合征時(shí)，白蛋白降低， α2 、 β球蛋白升高。 ? 等電聚焦 (IEF） 電泳就是在凝膠中加入兩性電解質(zhì)從而構(gòu)成從正極到負(fù)極 pH逐漸增加的pH梯度 ， 處在其中的蛋白分子在電場的作用下運(yùn)動(dòng) ， 最后各自停留在其等電點(diǎn)的位置上 ，測出蛋白分子聚焦位置的 pH值 ， 便可以得到它的等電點(diǎn) 。 b. TEMED最后加，注意混勻。加完電極液后，要仔細(xì)檢查凝膠管上下口內(nèi)有無氣泡，如有必需排除，否則影響導(dǎo)電； ? 上槽接正極，下槽接負(fù)極，電壓 50V，預(yù)電泳 30分鐘，然后將電壓維持在 200300V，12小時(shí)； ? 電泳結(jié)束后，取下玻璃管； 3. 剝膠 用帶有針頭的注射器吸入蒸餾水，將針頭插入凝膠與玻璃管壁之間，邊旋轉(zhuǎn)邊注水，使針頭慢慢旋轉(zhuǎn)前進(jìn)。其中雙向電泳 (Two Dimensional Electrophoresis， 2DE) 是蛋白質(zhì)組研究的三大關(guān)鍵核心技術(shù)之一 ( 另兩種是質(zhì)譜技術(shù)和蛋白質(zhì)組信息學(xué) ) 。 。 ? 雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用 SDSPAGE分離，把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開，從而大大提高了分辨率。 4. 測定樣品 pI 方法一：直接用 PH試紙插入所需測定的蛋白區(qū)帶中，此法雖然十分方便，但較為粗略。 c. 將長滴管及時(shí)清洗 試劑 數(shù)量（ ml） 蒸餾水 Acr Bis 2 40% Ampholine 樣品：人 Hb和 CytC混合物 （ 1mg/ml） 4滴 10％過硫酸銨 TEMED 5 181。 ? 在沒有電場時(shí) ,載體兩性電解質(zhì)溶液的 pH值大約是該溶液 pH范圍的平均值 (如 pH310的載體兩性電解質(zhì)溶液，其 pH約為 )。 實(shí)驗(yàn)原理 聚丙烯酰胺凝膠 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳方法。 4. 染色：通電完畢，鑷子取出，浸于氨基黑的染色液中 5分鐘，立即放入盛有漂洗液的培養(yǎng)皿中，反復(fù)漂洗數(shù)次，直至背景漂凈，濾紙吸干，不要太干。 電泳的影
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