綜合性設(shè)計性實驗-3-資料下載頁
2024-09-01 08:06本頁面
【導讀】蛋白質(zhì)翻譯后修飾位點預測。醋酸纖維薄膜電泳聚丙烯酰胺等電聚焦電泳分離。目標蛋白的2D電泳分離分析及其生物質(zhì)譜鑒定。泛素化對于細胞分化與凋亡、DNA修復、免疫應(yīng)答和應(yīng)激反應(yīng)等生理過程起。磷酸化涉及細胞信號轉(zhuǎn)導、神經(jīng)活動、肌肉收縮以及細胞的增殖、發(fā)育和分。脂基化對于生物體內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導過程起著非常關(guān)鍵的作用；它使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更為復雜，功能更為完善，調(diào)節(jié)更為精細，作用更為專一。帶電的膠?；虼蠓肿釉谕饧与妶鲋?，向帶相反電荷的電極作定向移動的現(xiàn)象稱為電泳。當需要增大電場強度以縮短電泳時。掌握醋酸纖維膜電泳的基本原理及其臨床意義。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。急性肝炎：發(fā)病早期蛋白質(zhì)電泳無變化，發(fā)病兩周后白蛋白、α2及β球蛋白減少，γ球蛋。聚丙烯酰胺凝膠兼有電泳和分子篩的雙重作用，分辨率高。
【正文】 水，將針頭插入凝膠與玻璃管壁之間，邊旋轉(zhuǎn)邊注水，使針頭慢慢旋轉(zhuǎn)前進?？克鲏毫蜐櫥饔脤⒉ＡЧ軆?nèi)壁與凝膠分開，最后可用洗耳球在玻璃管的一端輕輕加壓，就可將凝膠從玻璃管內(nèi)壓出，凝膠盛于培養(yǎng)皿中。 4. 測定樣品 pI 方法一：直接用 PH試紙插入所需測定的蛋白區(qū)帶中，此法雖然十分方便，但較為粗略。 方法二：將所需測定的蛋白區(qū)帶用刀片切下，置于 5ml蒸餾水的小燒杯中，經(jīng)常攪拌， 4小時后用 PH計測其 pI。 第三部分，目標蛋白的 2D電泳 分離分析及其生物質(zhì)譜鑒定 ? 蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行者，是生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，以細胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動方式為研究對象。 ? 人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質(zhì)組學得到了空前的發(fā)展，蛋白質(zhì)組研究旨在揭示基因表達的真正執(zhí)行生命活動的全部蛋白質(zhì)的表達規(guī)律和生物功能。 ? 2D電泳可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究、蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用、細胞分化凋亡研究、致病機制及耐藥機制的研究、療效監(jiān)測、新藥開發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許多方面。 ? 蛋白質(zhì)組學已成為當今生物領(lǐng)域中極其活躍的學科。其中雙向電泳 (Two Dimensional Electrophoresis， 2DE) 是蛋白質(zhì)組研究的三大關(guān)鍵核心技術(shù)之一 ( 另兩種是質(zhì)譜技術(shù)和蛋白質(zhì)組信息學 ) 。 ? 雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學研究中所處的重要位置。 ? 雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質(zhì)的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用 SDSPAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開，從而大大提高了分辨率。 ? 用圖像掃描儀、萊賽密度儀、電荷組合裝置可把用上述方法得到的蛋白圖譜數(shù)字化，再經(jīng)過計算機處理，去除縱向和橫向的曳尾以及背景底色，就可以給出所有蛋白斑點的準確位置和強度， ? 蛋白質(zhì)組研究的重點是對用雙向凝膠電泳分離出來的蛋白，進行定性和定量的分析。 ? 質(zhì)譜（ Mass Spectrometry）是帶電原子、分子或分子碎片按質(zhì)荷比（或質(zhì)量）的大小順序排列的圖譜。質(zhì)譜儀是一類能使物質(zhì)粒子高化成離子并通過適當?shù)碾妶?、磁場將它們按空間位置、時間先后或者軌道穩(wěn)定與否實現(xiàn)質(zhì)荷比分離，并檢測強度后進行物質(zhì)分析的儀器。 ? 將雙向凝膠電泳的蛋白點挖出來，用質(zhì)譜分析，能得到該蛋白的分子量，質(zhì)荷比等參數(shù)，隨后搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，將該蛋白判斷為哪個蛋白。 實驗設(shè)計 1. 查閱相關(guān)資料，設(shè)計一個實驗流程，分析正常人細胞與食管癌細胞間的差異基因表達，應(yīng)注意什么事項； 2. 了解目前質(zhì)譜技術(shù)的種類和原理，選擇哪種技術(shù)來分析這些差異表達基因； 3. 請介紹一些雙向電泳數(shù)據(jù)庫的內(nèi)容和使用方法。
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