綜合性設(shè)計性實驗-3(存儲版)
【正文】 等電聚焦電泳進行過程中 等電聚焦電泳結(jié)束后 （＋） （＋） （－） （－） 高 pH 低 pH 實驗操作及注意事項 1. 凝膠配制： ? 取 10 ，選擇底部較齊平的一端用橡皮片封底（用兩條橡皮圈扎緊），從一端量出 7cm作好標記，垂直放置。然后垂直靜置待其聚合。 ? 2D電泳可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究、蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用、細胞分化凋亡研究、致病機制及耐藥機制的研究、療效監(jiān)測、新藥開發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許多方面。 ? 將雙向凝膠電泳的蛋白點挖出來，用質(zhì)譜分析，能得到該蛋白的分子量，質(zhì)荷比等參數(shù)，隨后搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，將該蛋白判斷為哪個蛋白。 ? 質(zhì)譜（ Mass Spectrometry）是帶電原子、分子或分子碎片按質(zhì)荷比（或質(zhì)量）的大小順序排列的圖譜。 第三部分，目標蛋白的 2D電泳 分離分析及其生物質(zhì)譜鑒定 ? 蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行者，是生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，以細胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動方式為研究對象。 ? 立即用 5ml注射器針頭沿玻璃壁內(nèi)側(cè)面緩慢加入 ，加時貼近凝膠，盡量減少膠面與水相混和。引入電場時，載體兩性電解質(zhì)分子分別向陰極和陽極移動，最終在分子凈電荷為零的位置停止遷移， 在凝膠內(nèi)制造一個 pH梯度。 ? 聚丙烯酰胺凝膠的特點：機械彈度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高及無電滲等。將各條分別浸于上述試管內(nèi)（注意管與蛋白帶的順序），用力搖動，使藍色洗出，約半小時； ? 用分光光度計進行比色，波長 650nm，以空白薄膜條洗出液為空白對照，讀取 A、 α αβ、 γ球蛋白各管的光密度。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。過低，電泳時間增加，擴散。它使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，功能更為完善，調(diào)節(jié)更為精細，作用更為專一。 電泳的應(yīng)用 1. 分離各種有機物：如蛋白質(zhì)、酶、核酸等 2. 分析某種物質(zhì)的純度及分子量 第二部分，醋酸纖維薄膜電泳和等電聚焦電泳 電泳的基本原理 ? 在電場中，推動帶電質(zhì)點運動的力（ F）等于質(zhì)點所帶凈電荷量（ Q）與電場強度（ E）的乘積。 ? 支持介質(zhì)的篩孔 ：篩孔越小，則顆粒在移動的過程中所受到的阻力也就越大。取充分浸透的膜條，濾紙吸取多余的緩沖液，不要弄太干。 ? 肝硬化：白蛋白、 α α2球蛋白均明顯下降， γ球蛋白極度升高，甚至 A/G比值倒置。 在電場存在下的一定 pH溶液中 ， 帶正電的蛋白分子將向負極移動而帶負電的蛋白分子將向正極移動 ， 在某一 pH時 ， 蛋白分子在電場中不再移動 ， 此時的 pH值即為該蛋白質(zhì)的等電點 。 ? 按下表配制聚丙烯
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1