綜合性設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)-3(存儲(chǔ)版)
【正文】 等電聚焦電泳進(jìn)行過(guò)程中 等電聚焦電泳結(jié)束后 （＋） （＋） （－） （－） 高 pH 低 pH 實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng) 1. 凝膠配制： ? 取 10 ，選擇底部較齊平的一端用橡皮片封底（用兩條橡皮圈扎緊），從一端量出 7cm作好標(biāo)記，垂直放置。然后垂直靜置待其聚合。 ? 2D電泳可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究、蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用、細(xì)胞分化凋亡研究、致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究、療效監(jiān)測(cè)、新藥開(kāi)發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許多方面。 ? 將雙向凝膠電泳的蛋白點(diǎn)挖出來(lái)，用質(zhì)譜分析，能得到該蛋白的分子量，質(zhì)荷比等參數(shù)，隨后搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，將該蛋白判斷為哪個(gè)蛋白。 ? 質(zhì)譜（ Mass Spectrometry）是帶電原子、分子或分子碎片按質(zhì)荷比（或質(zhì)量）的大小順序排列的圖譜。 第三部分，目標(biāo)蛋白的 2D電泳 分離分析及其生物質(zhì)譜鑒定 ? 蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行者，是生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，以細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動(dòng)方式為研究對(duì)象。 ? 立即用 5ml注射器針頭沿玻璃壁內(nèi)側(cè)面緩慢加入 ，加時(shí)貼近凝膠，盡量減少膠面與水相混和。引入電場(chǎng)時(shí)，載體兩性電解質(zhì)分子分別向陰極和陽(yáng)極移動(dòng)，最終在分子凈電荷為零的位置停止遷移， 在凝膠內(nèi)制造一個(gè) pH梯度。 ? 聚丙烯酰胺凝膠的特點(diǎn)：機(jī)械彈度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高及無(wú)電滲等。將各條分別浸于上述試管內(nèi)（注意管與蛋白帶的順序），用力搖動(dòng)，使藍(lán)色洗出，約半小時(shí)； ? 用分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長(zhǎng) 650nm，以空白薄膜條洗出液為空白對(duì)照，讀取 A、 α αβ、 γ球蛋白各管的光密度。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。過(guò)低，電泳時(shí)間增加，擴(kuò)散。它使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，功能更為完善，調(diào)節(jié)更為精細(xì)，作用更為專(zhuān)一。 電泳的應(yīng)用 1. 分離各種有機(jī)物：如蛋白質(zhì)、酶、核酸等 2. 分析某種物質(zhì)的純度及分子量 第二部分，醋酸纖維薄膜電泳和等電聚焦電泳 電泳的基本原理 ? 在電場(chǎng)中，推動(dòng)帶電質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)的力（ F）等于質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量（ Q）與電場(chǎng)強(qiáng)度（ E）的乘積。 ? 支持介質(zhì)的篩孔 ：篩孔越小，則顆粒在移動(dòng)的過(guò)程中所受到的阻力也就越大。取充分浸透的膜條，濾紙吸取多余的緩沖液，不要弄太干。 ? 肝硬化：白蛋白、 α α2球蛋白均明顯下降， γ球蛋白極度升高，甚至 A/G比值倒置。 在電場(chǎng)存在下的一定 pH溶液中 ， 帶正電的蛋白分子將向負(fù)極移動(dòng)而帶負(fù)電的蛋白分子將向正極移動(dòng) ， 在某一 pH時(shí) ， 蛋白分子在電場(chǎng)中不再移動(dòng) ， 此時(shí)的 pH值即為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 。 ? 按下表配制聚丙烯
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