綜合性設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)-3-wenkub
2022-09-12 08:06:26 本頁面
【正文】 致不能分離； 緩沖液水分蒸發(fā)過多，離子強(qiáng)度增加；虹吸現(xiàn)象等。 電泳的應(yīng)用 1. 分離各種有機(jī)物：如蛋白質(zhì)、酶、核酸等 2. 分析某種物質(zhì)的純度及分子量 第二部分，醋酸纖維薄膜電泳和等電聚焦電泳 電泳的基本原理 ? 在電場中，推動帶電質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動的力（ F）等于質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量（ Q）與電場強(qiáng)度（ E）的乘積。 蛋白質(zhì)翻譯后修飾在生命體中具有十分重要的作用。它使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，功能更為完善，調(diào)節(jié)更為精細(xì)，作用更為專一。 F＝ QE ? 質(zhì)點(diǎn)的前移同樣要受到阻力（ F）的影響，對于一個(gè)球形質(zhì)點(diǎn)，服從 Stoke定律，即：F′＝ 6πrην（ r為質(zhì)點(diǎn)半徑， η為介質(zhì)粘度， ν為質(zhì)點(diǎn)移動速度） ? 當(dāng)質(zhì)點(diǎn)在電場中作穩(wěn)定運(yùn)動時(shí)： F＝ F′即： QE＝ 6πrην 在同一電泳條件下，不同的物質(zhì)因其分子大?。?r）和帶電量（ Q）的差異而具有不同的泳動速度，因此，電泳一定的時(shí)間（ t）就可互相分離。過低，電泳時(shí)間增加，擴(kuò)散。 ? 緩沖液 pH和離子強(qiáng)度： pH值距離其等電點(diǎn)愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過高或過低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強(qiáng)度；強(qiáng)度過低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強(qiáng)度過高，在待分離分子周圍形成較強(qiáng)的帶相反電荷的離子擴(kuò)散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。 2. 加樣：光面用鉛筆標(biāo)注，無光澤面距一端 （不能看見有液滴形成），待血清進(jìn)入膜內(nèi)，移開點(diǎn)樣器。將各條分別浸于上述試管內(nèi)（注意管與蛋白帶的順序），用力搖動，使藍(lán)色洗出，約半小時(shí)； ? 用分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長 650nm，以空白薄膜條洗出液為空白對照，讀取 A、 α αβ、 γ球蛋白各管的光密度。 ? 腎病綜合征時(shí)，白蛋白降低， α2 、 β球蛋白升高。 ? 聚丙烯酰胺凝膠的特點(diǎn)：機(jī)械彈度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高及無電滲等。 ? 等電聚焦 (IEF） 電泳就是在凝膠中加入兩性電解質(zhì)從而構(gòu)成從正極到負(fù)極 pH逐漸增加的pH梯度 ， 處在其中的蛋白分子在電場的作用下運(yùn)動 ， 最后各自停留在其等電點(diǎn)的位置上 ，測出蛋白分子聚焦位置的 pH值 ， 便可以得到它的等電點(diǎn) 。引入電場時(shí)，載體兩性電解質(zhì)分子分別向陰極和陽極移動，最終在分子凈電荷為零的位置停止遷移， 在凝膠內(nèi)制造一個(gè) pH梯度。 b. TEMED最后加，注意混勻。 ? 立即用 5ml注射器針頭沿玻璃壁內(nèi)側(cè)面緩慢加入 ，加時(shí)貼近凝膠，盡量減少膠面與水相混和。加完電極液后，要仔細(xì)檢查凝膠管上下口內(nèi)有無氣泡，如有必需排除，否則影響導(dǎo)電； ? 上槽接正極，下槽接負(fù)極，電壓 50V，預(yù)電泳 30分鐘，然后將電壓維持
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