綜合性設(shè)計性實驗-3-文庫吧在線文庫
【正文】 酰胺凝膠，見下頁 注意事項： a. 按表中的順序加入試劑，并搖勻。 2. 電泳 ? 將已聚合的凝膠去除水層，凝膠端加 2％氫氧化鈉消除凹面，垂直插入電泳槽中的橡皮管中； ? 在電泳槽中的上槽注入 ％硫酸或 5％磷酸，下槽注入 ％乙醇胺或 2％氫氧化鈉。 ? 蛋白質(zhì)組學(xué)已成為當(dāng)今生物領(lǐng)域中極其活躍的學(xué)科。 實驗設(shè)計 1. 查閱相關(guān)資料，設(shè)計一個實驗流程，分析正常人細(xì)胞與食管癌細(xì)胞間的差異基因表達(dá)，應(yīng)注意什么事項； 2. 了解目前質(zhì)譜技術(shù)的種類和原理，選擇哪種技術(shù)來分析這些差異表達(dá)基因； 3. 請介紹一些雙向電泳數(shù)據(jù)庫的內(nèi)容和使用方法。 ? 用圖像掃描儀、萊賽密度儀、電荷組合裝置可把用上述方法得到的蛋白圖譜數(shù)字化，再經(jīng)過計算機處理，去除縱向和橫向的曳尾以及背景底色，就可以給出所有蛋白斑點的準(zhǔn)確位置和強度， ? 蛋白質(zhì)組研究的重點是對用雙向凝膠電泳分離出來的蛋白，進(jìn)行定性和定量的分析。 方法二：將所需測定的蛋白區(qū)帶用刀片切下，置于 5ml蒸餾水的小燒杯中，經(jīng)常攪拌， 4小時后用 PH計測其 pI。l 總量 按下表配制聚丙烯酰胺凝膠 ? 用長滴管汲取配置好的凝膠液，沿玻璃管傾斜緩慢注入到 7ml標(biāo)記平面，避免產(chǎn)生氣泡。所以載體兩性電解質(zhì)分子都帶有電荷，只是在溶液中的正電荷和負(fù)電荷數(shù)目相等，凈電荷為零。聚丙烯酰胺凝膠是由單體的丙烯酰（ Acrylamide,Acr）和甲叉雙丙烯酰胺（ N,Nmethylenebisacrylamide,Bis）在催化劑作用下聚合而成。 5. 定量： ? 取 6支試管，編號，分別用吸管吸取 NaOH 4ml； ? 剪下膜上各蛋白質(zhì)帶及另一空白部位剪一平均大小的薄膜條（空白帶的寬度以最窄的條帶為準(zhǔn)）。 蛋白名稱 等電點 分子量 白蛋白 69000 α α1： 20200 α2： 30000 β 90000150000 γ 156000300000 ? 醋酸纖維素（二乙酸纖維素）薄膜具有勻一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，滲透性強，對分子移動無阻力，用它作區(qū)帶電泳的支持物，具有用樣量少，分離清晰，無吸附作用。 ? 電場強度：過高，產(chǎn)熱，蛋白變性導(dǎo)致不能分離； 緩沖液水分蒸發(fā)過多，離子強度增加；虹吸現(xiàn)象等。 蛋白質(zhì)翻譯后修飾在生命體中具有十分重要的作用。 F＝ QE ? 質(zhì)點的前移同樣要受到阻力（ F）的影響，對于一個球形質(zhì)點，服從 Stoke定律，即：F′＝ 6πrην（ r為質(zhì)點半徑， η為介質(zhì)粘度， ν為質(zhì)點移動速度） ? 當(dāng)質(zhì)點在電場中作穩(wěn)定運動時： F＝ F′即： QE＝ 6πrην 在同一電泳條件下，不同的物質(zhì)因其分子大?。?r）和帶電量（ Q）的差異
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