【正文】 蛋白質變性 在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。 如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。 ?此外 , 防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質制劑（如疫苗等）的必要條件。 ?蛋白質的復性 (renaturation) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 β巰基乙醇 去除尿素、 β巰基乙醇 非折疊狀態(tài)，無活性 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 在一定條件下 ， 蛋白疏水側鏈暴露在外 ， 肽鏈融會相互纏繞繼而聚集 ， 因而從溶液中析出 。 蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 蛋白質的 OD280與其濃度呈正比關系 ，因此可作蛋白質定量測定 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （二）肽鏈中的肽鍵可與雙縮脲試劑反應 蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為 雙縮脲反應 (biuret reaction) 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 蛋白質的分離、純化、鑒定和結構分析 Isolation, Purification, Identification and Structural Analysis of Proteins 第五節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 一、透析及超濾法可清除蛋白質溶液中的小分子化合物 利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。 ?超濾法 ?透析 (dialysis) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 二 、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質沉淀方法 ?使用 丙酮沉淀 時 ， 必須在 0～ 4℃ 低溫下進行 ，丙酮用量一般 10倍于蛋白質溶液體積 。 除了丙酮以外 ， 也可用乙醇沉淀 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 將某一純化蛋白質免疫動物可獲得抗該蛋白的特異抗體 。 ?免疫沉淀法（ immunoprecipitation） 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 三 、電泳是蛋白質分離與鑒定的常用方法 蛋白質在高于或低于其 pI的溶液中為帶電的顆粒 ， 在電場中能向正極或負極移動 。 根據支撐物的不同 ， 可分為薄膜電泳 、 凝膠電泳等 。 ? 等電聚焦電泳 ，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。 ?幾種重要的蛋白質電泳： 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 四 、應用相分配或親和原理可將蛋白質進行層析分離 待分離蛋白質溶液（流動相）經過一個固態(tài)物質（固定相）時，根據溶液中待分離的蛋白質顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質組分在兩相中反復分配，并以不同速度流經固定相而達到分離蛋白質的目的 。 ? 凝膠過濾 (gel filtration)又稱分子篩層析，利用各蛋白質分子大小不同分離。 ? 蛋白質在離心場中的行為用 沉降系數(sedimentation coefficient, S)表示 ,沉降系數與蛋白質的密度和形狀相關 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ──────────────────────蛋白質 分子量 S──────────────────────細胞色素 C( 牛心 ) 1 3 3 7 0 1 . 1 7肌紅蛋白（馬心） 1 6 9 0 0 2 . 0 4糜蛋白酶原（牛胰） 2 3 2 4 0 2 . 5 4β 乳球蛋白（羊奶） 3 7 1 0 0 2 . 9 0血紅蛋白（人） 6 4 5 0 0 4 . 5 0清白蛋白（人） 6 8 5 0 0 4 . 6 0過氧化氫酶（馬肝） 2 4 7 5 0 0 1 1 . 3 0脲酶（刀豆） 4 8 2 7 0 0 1 8 . 6 0纖維蛋白原 3 3 9 7 0 0 7 . 6 0蛋白質的分子量和沉降系數目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 六、用化學或反向遺傳學方法可分析或演繹多肽鏈的氨基酸序列 分析已純化蛋白質的氨基酸殘基組成（離子交換層析） 測定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基 把肽鏈水解成片段，分別進行分析 測定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用 Edman降解法 ?一般需用數種水解法，并分析出各肽段中的氨基酸順序，然后經過組合排列對比，最終得出完整肽鏈中氨基酸順序的結果。 ?螺旋的 CD峰有 222nm處的負峰 、 208nm處的負峰和 198nm處的正峰 3個成分；而 ?折疊的 CD譜不很固定 。 （二） X射線衍射法和核磁共振技術用于 三維空間結構分析 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) * 用分子力學 、 分子動力學的方法 ， 根據物理化學的基本原理 ， 從理論上計算蛋白質分子的空間結構 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 第六節(jié) 血漿蛋白質 Plasma Proteins 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 一、采用電泳法可將血漿蛋白質分成若干組分 電泳法是分離、分析血漿蛋白質的主要方法。 按泳動快慢依次為：清蛋白、 α α β和 γ球蛋白（ globulin）。 A ? ? 白蛋白 ?1 ?2 ? ? 血漿蛋白的電泳圖 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 血漿蛋白質主要成分及功能 功 能 血漿蛋白質 抗蛋白酶 抗凝乳蛋白酶、 α1抗胰蛋白酶、 α2巨球蛋白、抗凝血酶 血液凝固 各種凝血因子、纖維蛋白原 酶 血液中功能酶：如凝血因子、膽堿酯酶 組織細胞漏出的酶：如轉氨酶 激素 紅細胞生成素 免疫功能 γ免疫球蛋白、補體蛋白、 β2微球蛋白 參與炎癥反應 急性時相反應蛋白：如 C反應蛋白、 α1酸性糖蛋白（血清類黏蛋白） 腫瘤胚胎性蛋白 α1甲胎蛋白（ AFP） 轉運或結合蛋白 清蛋白 —— 結合、運輸膽紅素、非酯化脂肪酸、離子（ Ca2＋ ），金屬離子（ Cu2＋ 、Zn2＋ ）、正鐵血紅素、類固醇激素和各種藥物分子 血漿銅藍蛋白 —— 含有 Cu2＋ （但 Cu2＋ 轉運可能主要依賴清蛋白） 皮質類固醇結合球蛋白（運皮質激素蛋白） —— 結合皮質醇 結合珠蛋白 —— 結合細胞外的血紅蛋白 脂蛋白（乳糜微粒、 VLDL、 LDL、 HDL） —— 運輸甘油三酯、膽固醇、磷脂等 血紅素結合蛋白 —— 結合血紅素 視黃醇結合蛋白 —— 結合視黃醇 性激素結合球蛋白 —— 結合睪酮、雌二醇 甲狀腺素結合球蛋白 —— 結合 T T4 運鐵蛋白 —— 運輸鐵 甲狀腺素運載蛋白 —— 結合 T4并與視黃醇結合蛋白形成復合物 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 二、血漿中大多數蛋白質具有特殊的 生物學功能 （一）血漿蛋白質大多數屬于分泌性蛋白質 （二）清蛋白是血漿中含量最多的蛋白質 （三）很多血漿蛋白具有特殊的結合功能 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （三）很多血漿蛋白具有特殊的結合功能 1．前清蛋白運輸視黃醇 2．運鐵蛋白是鐵的轉運載體 3．甲狀腺素結合球蛋白運輸甲狀腺素 4．結合珠蛋白 血紅蛋白復合物可防止血紅 蛋白在腎小管沉積 5．血漿銅藍蛋白可結合銅 6．免疫球蛋白與機體的防御機制