【正文】 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 第六節(jié) 血漿蛋白質(zhì) Plasma Proteins 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 一、采用電泳法可將血漿蛋白質(zhì)分成若干組分 電泳法是分離、分析血漿蛋白質(zhì)的主要方法。 ? 蛋白質(zhì)在離心場中的行為用 沉降系數(shù)(sedimentation coefficient, S)表示 ,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān) 。 根據(jù)支撐物的不同 ， 可分為薄膜電泳 、 凝膠電泳等 。 ?超濾法 ?透析 (dialysis) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 二 、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質(zhì)沉淀方法 ?使用 丙酮沉淀 時 ， 必須在 0～ 4℃ 低溫下進行 ，丙酮用量一般 10倍于蛋白質(zhì)溶液體積 。 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 ?蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素： 顆粒表面電荷 水化膜 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質(zhì) － － － － － － － － 帶負電荷的蛋白質(zhì) 在等電點的蛋白質(zhì) 水化膜 + + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質(zhì) － － － － － － － － 帶負電荷的蛋白質(zhì) 不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒 酸 堿 酸 堿 酸 堿 脫水作用 脫水作用 脫水作用 溶液中蛋白質(zhì)的聚集和沉淀 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 三、很多因素可引起蛋白質(zhì)變性 在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 瘋牛病是由朊病毒蛋白 (prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) Hb與 Mb一樣能可逆地與 O2結(jié)合 ， Hb與O2結(jié)合后稱為 氧合 Hb。 his pro 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （三）生物體內(nèi)有很多由多亞基組成的蛋白質(zhì) 生物體內(nèi)許多蛋白質(zhì)往往由多個亞基組成，亞基之間憑借次級鍵形成蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)。 * 分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結(jié)合，使之解聚后，再誘導(dǎo)其正確折疊。 形成 β折疊的肽段要求氨基酸殘基的側(cè)鏈較小，才能容許兩條肽段彼此靠近。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （五）模體 是蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu) 在許多蛋白質(zhì)分子中， 由幾個具有二級結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近、相互作用，所形成的折疊模樣，稱為 超二級結(jié)構(gòu)（ supersecondary structure）， 又稱 折疊（ fold）或 模體（ motif）。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 五、 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)比對可用于同源 蛋白質(zhì)分析 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)（氨基酸序列）比對常被用來預(yù)測蛋白質(zhì)之間結(jié)構(gòu)與功能的相似性。 較早發(fā)現(xiàn)的有腦啡肽 (5肽 )、 β內(nèi)啡肽 (31肽 )和強啡肽 (17肽 )等。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) * 一分子氨基酸與另一分子氨基酸脫去一分子水縮合成二肽。 20世紀 90年代以后 ，后基因組計劃。目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 多肽與蛋白質(zhì) 第二章 Peptides and Proteins 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 1833年 ， Payen和 Persoz分離出淀粉酶。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ?什么是蛋白質(zhì) ? 蛋白質(zhì) （ protein） 是由許多氨基酸（ amino acids） 通過肽鍵 （ peptide bond） 相連形成的高分子含氮化合物 。 * 二肽通過肽鍵與另一分子氨基酸縮合生成三肽 …… * 一般來說，由數(shù)個、十數(shù)個氨基酸組成的肽習(xí)慣稱為 寡肽 (oligopeptide)，而很多氨基酸組成的肽稱為 多肽（ polypeptide）。 近年發(fā)現(xiàn)的孤啡肽 (17肽 )，其一級結(jié)構(gòu)類似于強啡肽。 序列比對方法（ sequenceparison method）關(guān)鍵在于將 2個序列準確地對齊，使之達到相同序列最大化，插入或刪除序列最小化的目的，然后計算相同的氨基酸數(shù)。 超二級結(jié)構(gòu)形式有 3種： αα， βαβ， ββ 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體 鋅指結(jié)構(gòu) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （六） 氨基酸殘基的側(cè)鏈可影響二級結(jié)構(gòu)的形成 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是以一級結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 二、 多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上進一步折疊形成蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu) (tertiary structure)是指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位臵。 * 分子伴侶在蛋白質(zhì)分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。 胰島素受體： 由 4個亞基組成 (α2β2) ， α亞基與 β亞基形成單體 (monomer)， 2個單體形成二聚體 (dimer)。 glu leu 氧合 Hb占總 Hb的百分數(shù) （ 稱 百分飽和度 ） 隨 O2濃度變化而改變 。 正常的 PrP富含 α螺旋，稱為 PrPc。 ?蛋白質(zhì)的變性 (denaturation) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? 造成變性的因素 ? 變性的本質(zhì) —— 破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。 ?蛋白質(zhì)沉淀 ?蛋白質(zhì)的凝固作用 (protein coagulation) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 四 、蛋白質(zhì)在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰 由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸 ， 因此在 280nm波長處有特征性吸收峰 。 蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后 ， 應(yīng)立即分離 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ，常用于蛋白質(zhì)分子量的測定。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 因為沉降系數(shù) S大體上和分子量成正比關(guān)系 ，故可應(yīng)用超速離心法測定蛋白質(zhì)分子量 ， 但對分子形狀的高度不對稱的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用 。采用醋酸纖維素膜電泳，可將血漿蛋白質(zhì)分為 5個組分。 （ 三 ） 根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列預(yù)測三維空間 結(jié)構(gòu) * 通過對已知空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進行分析 ， 找出一級結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系 ， 總結(jié)出規(guī)律 ， 用于新的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的預(yù)測 。 ?蛋白質(zhì)分離常用的層析方法 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 五 、利用蛋白質(zhì)顆粒沉降行為不同可進行超速離心分離 ?超速離心法 (ultracentrifugation)既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測定蛋白質(zhì)的分子量 。 這種通過蛋白質(zhì)在電場中泳動而達到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù) , 稱為 電泳 (elctrophoresis) 。 應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。 變性的蛋白質(zhì)易于沉淀 ， 有時蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀 ， 但并不變性 。 ?蛋白質(zhì)的等電點 ( isoelectric point, pI