20xx年醫(yī)學專題—流式細胞儀概述-在線瀏覽
2024-11-15 05:38本頁面
【正文】 下落入偏轉板間的靜電場時，依所帶電荷的符號分別向左偏轉或向右偏轉，落入指定的收集器內(nèi)。,第十九頁，共七十二頁。 臨床型只有分析(fēnxī)功能，沒有分選功能，操作簡便，易學易掌握。,第二十頁，共七十二頁。 t243。 前者的光斑直徑大于被檢細胞體積，只能提供細胞內(nèi)某種生物化學成分的參數(shù)。,第二十一頁，共七十二頁。 f233。,第二十二頁，共七十二頁。tǒng)；激光光源及光束成形系統(tǒng)(x236。tǒng)；信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng)(x236。tǒng)等五個部分。,（一）流動室與液流驅動系統(tǒng) 流動室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央開一個孔，供細胞單個流過，檢測區(qū)在該孔的中心，流動室內(nèi)充滿了鞘液,鞘液的作用是將樣品流環(huán)包。,第二十四頁，共七十二頁。)系統(tǒng)運行中流速是不變的。,（二）激光光源與光束成形系統(tǒng) 激光是一種相干光源，它能提供單波長、高強度及穩(wěn)定性高的光照(guāngzh224。由于細胞的快速流動，每個細胞經(jīng)過光照(guāngzh224。,第二十六頁，共七十二頁。 因此，當樣本速率選擇 高速時，處在樣本流不 同位置的細胞或顆粒， 受激光照射的能量不一 樣，從而被激發(fā)(jīfā)出的熒 光強度也不相同。,（三）光學系統(tǒng) FCM的光學系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片和小孔組成。 2.短通濾光片 特定波長以下(yǐxi224。 3.帶通濾光片 帶通濾光片允許一定波長范圍內(nèi)的光通過,第二十八頁，共七十二頁。這些信號以細胞為中心，向空間360度立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號。,1.散射光信號 射光分為前向角散射和側向角散射，散射光不依賴任何細胞樣品(y224。 （1）前向角散射 前向角散射與被測細胞的大小有關 （2）側向角散射 側向散射光可提供細胞內(nèi)精細結構和顆粒性質的信息。,2.熒光信號(x236。o) 當激光光束與細胞正交時，一般會產(chǎn)生兩種熒光信號。,第三十一頁，共七十二頁。ng)線性放大測量。,第三十二頁，共七十二頁。)反映DNA的含量。,第三十三頁，共七十二頁。)濾片使每種熒光僅被相應的檢測器檢測，但由于目前所使用的各種熒光染料都是寬發(fā)射譜性質，雖然它們之間發(fā)射峰值各不相同，但發(fā)射譜范圍有一定的重疊。,從右圖中可以看出，陰影為探測器檢測(jiǎn c232。,第三十五頁，共七十二頁。 在光電倍增管前放上一小孔，作為空間濾波器，排除其它雜散光信號，從而(c243。r)確保了A點光源進不了B’點處，B點光源也進不了A’點處。,（五）細胞分選器 1．小水滴的形成 壓電晶體帶動流動室振動，液流形成水滴。當噴嘴直徑(zh237。ng)為50μm時，信號頻率為40kHz，則每秒鐘產(chǎn)生4萬個水滴。,第三十七頁，共七十二頁。li225。,第三十八頁，共七十二頁。o)斷開時給整個流束充電，則水滴從流束上斷開后便帶有同極性的多余表面電荷。,第三十九頁，共七十二頁。目前FCM所采用的都是多參數(shù)指標，熒光標記物參數(shù)數(shù)量在逐漸增多(zēnɡ duō)。,第四十頁，共七十二頁。,第三節(jié) 流式細胞儀的主要(zhǔy224。一般以能檢測到單個微球上最少標有FITC或PE熒光分子數(shù)目來表示，現(xiàn)在的FCM均可達到檢測小于100個熒光分子的指標。,二、儀器的分辨率 分辨率是衡量儀器測量(c232。ng)精度的指標，通常用變異系數(shù)CV(Coefficient of Variation)值表示： (δ是分布的標準誤差，μ是分布的平均值) 或,第四十三頁，共七十二頁。xiǎo)，一般目前商品化的FCM可以測量到0.2～0.5μm左右。,四、FCM分析速度(s249。) 分析速度以每秒分析的細胞數(shù)來表示。 死時間越短，儀器處理數(shù)據(jù)越快，一般可達到3000～6000個/秒左右。,第四十五頁，共七十二頁。 分選速度指每秒可提取所要細胞的個數(shù)。 分選收獲率指被分出的細胞與原來(yu225。i)溶液中該細胞的百分比。,第四節(jié) 流式細胞儀應用(y236。ng)的技術要求,流式細胞分析儀器(y237。)是一項集多學科知識綜合應用的復雜儀器(y237。)，除了對儀器(y237。)各方面性能指標有嚴格的要求以外，在實驗設計與樣品處理方面也需要有豐富的基礎理論及操作經(jīng)驗。,一、檢測樣品制備的重要性 因為流式細胞儀測量的是每個細胞所產(chǎn)生的散射光和熒光信號，如果兩個或多個(duō ɡ232。,第四十八頁，共七十二頁。) 散射光信號是激光照在細胞上所產(chǎn)生的前向光和側向光信號。 因此，被分析細胞在制備成單細胞懸液后，經(jīng)過與熒光染料染色后才能上機進行檢測。,焦寧Y與異硫氰酸熒光素（FITC，530nm）分別是RNA與蛋白質的特異性染料； 碘化丙啶（PI，620nm）與FITC雙染可測知單個細胞內(nèi)DNA與蛋白質量的變
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1