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第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-在線瀏覽

2024-12-14 11:50本頁(yè)面
  

【正文】 一、工作原理 二、散射光的測(cè)定 三、熒光測(cè)量 四、細(xì)胞分選原理 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 一、參數(shù) 二、數(shù)據(jù)顯示方式 三、設(shè)門(mén)分析技術(shù) 第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測(cè)樣品制備 二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色 三、免疫膠乳顆粒的應(yīng)用 四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型 四、腫瘤耐藥相關(guān)蛋白分析 五、 AIDS病檢測(cè)中的應(yīng)用 六、自身免疫性疾病相關(guān) HLA抗原分析 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 小結(jié) 流式細(xì)胞術(shù) (flow cytometry, FCM)是以流式細(xì)胞儀為檢測(cè)手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下,通過(guò)熒光探針的協(xié)助,從分子水平上獲取多種信號(hào)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。 第一節(jié) 概述 細(xì)胞組成 細(xì)胞功能 大小 細(xì)胞表面 /胞漿 /核 特異性抗原 粒度 細(xì)胞活性 DNA, RNA含量 胞內(nèi)細(xì)胞因子 蛋白質(zhì)含量 激素結(jié)合位點(diǎn) 鈣離子 , PH值 , 膜電位 酶活性 流式細(xì)胞儀常檢測(cè)的細(xì)胞特性 ?采用激光作為激發(fā)光源,保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率; ?利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù),保證檢測(cè)的靈敏度和特異性; ?用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)流動(dòng)的單細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析,保證了檢測(cè)速度與統(tǒng)計(jì)分析精確性。主要作用是包裹樣本流的周圍,保持樣本流中細(xì)胞處于噴嘴中心位置,防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。 立體角方向散射的光線信號(hào),它的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小、形狀、胞內(nèi)顆粒折射等有關(guān),主要分為 前向散射光 和 側(cè)向散射光 。 ~ 10176。 FALS Sensor Laser 前向散射光示意圖 側(cè)向散射光( side scatter, SS): 激光束照射細(xì)胞時(shí),光以 90176。 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 側(cè)向散射光 示意圖 測(cè)得的 FS與 SS信號(hào)通過(guò)計(jì)算機(jī)處理,可得到 FSSS圖,由此可僅用散射光信號(hào)對(duì)未染色的活細(xì)胞進(jìn)行分析或分選。 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 光散射測(cè)量最有效用途: 從非均一群體中鑒別出某些亞群 ? 熒光信號(hào)由被檢細(xì)胞上標(biāo)記的特異性熒光染料受激發(fā)后產(chǎn)生,發(fā)射的熒光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)不同。 ? 選擇不同的單抗及染料就可同時(shí)測(cè)定一個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)不同特征。 四、細(xì)胞分選原理 細(xì)胞懸液形成液流柱 流動(dòng)室振動(dòng) 液流斷裂成液滴 空白液滴 含細(xì)胞的液滴 棄去 偏轉(zhuǎn)落入收集器 壓電晶體 產(chǎn)生 機(jī)械振動(dòng) 不充電 充電 (一)分選基本原理 ? 分選速度: 單位時(shí)間內(nèi)分選的細(xì)胞數(shù)量。 ? 分選純度: 分選出的目的細(xì)胞占所有收獲細(xì)胞的百分率。與純度成反比。與分選速度成反比。 (一)單參數(shù)直方圖 單參數(shù)直方圖 細(xì)胞相對(duì)數(shù)量 信道(channel ) ? 雙參數(shù)直方圖:縱軸和
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