第六節(jié)植物克隆載體-在線瀏覽
2024-11-10 15:39本頁面
【正文】 (1 60250 k b)T D N A V ir R e p tr a tr a分裂素O p i n e合成分解 25 b p重復(fù)區(qū)25 b p重復(fù)區(qū)Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu) ii. TDNA TDNA包括植物激素冠癭堿合成區(qū)基因及兩側(cè)相同的25 bp重復(fù)序列， TDNA整合不具特異性，右側(cè) 25 bp重復(fù)序列對 TDNA的轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。第 六 節(jié) 植 物 克 隆 載 體 一、 Ti質(zhì)粒載體 1. 根癌農(nóng)桿菌 (Agrobacterium tumefaciens)與 Ti質(zhì)粒 G菌，可侵入 90科雙子葉植物受傷組織，形成冠癭瘤 (crown gall tumor)。冠癭瘤細胞具有以下特征： i. 不需要補充植物激素便可進行離體培養(yǎng) —冠癭堿 (opine)，能專一 的為根癌農(nóng)桿菌所利用 . 這兩個特征由 Ti質(zhì)粒決定，但該質(zhì)粒中僅有一部分進入植物細胞。 不同 Ti 質(zhì)粒中的 TDNA結(jié)構(gòu)是不相同的，其中 i) 胭脂堿 Ti 質(zhì)粒的 TDNA長 23bp,結(jié)構(gòu)連續(xù)，具 13個基因 ii) 鱆魚堿 Ti 質(zhì)粒中的 TDNA不連續(xù)，分左右兩段，分別稱之為 TL和 TR, TLDNA長 kb,含 8個基因，包括鱆魚堿合成酶和植物激素合成基因 , TR –DNA長 kb，含 5個基因，參與甘露堿 (mannopine)和農(nóng)堿合成 iii)兩者同源性：主要集中在植物激素合成區(qū)。 如果在中間載體中插入一個 TDNA的 25bp重復(fù)序列，在非致瘤 Ti質(zhì)粒載體中插入另一個 25bp重復(fù)序列，經(jīng)重組后形成一個完整的 TDNA，這種系統(tǒng)稱之為 分離末端載體系統(tǒng) (SEV,Split End Vector)。 共整合作用共培養(yǎng)共整合體中間載體pT i B 6 S3 SE分離末端載體的共整合作用 (SEV) 例子 : pBIN19的結(jié)構(gòu) TDNA的轉(zhuǎn)移必須依賴于輔助質(zhì)粒， pAL4404就是一個 TDNA全部丟失的天然缺失突變體。 轉(zhuǎn)化 接合 轉(zhuǎn)移 TRTLKanr La cZαp B I N 19 (1 0 kb)MCS植物的雙元載體 pBIN19 二、病毒載體 1. DNA病毒載體 1） CaMV ： 8kb，環(huán)狀 dsDNA， 8個 ORF，致死，最多可容納 800bp外源 DNA，只能用語作短暫表達 (transient expression) 2) 雙生病毒： ,環(huán)狀 ssDNA，可感染單子葉植物，短暫表達。 2）宿主范圍廣 。 第 七 節(jié) 動物分子克隆載體 一 . 構(gòu)建動物克隆載體的病毒種類和特征 病毒類型 例子 病毒大小 (nm) 基因組結(jié)構(gòu) 基因組大小 (kb) 細小病毒 野生型 H1,RV,MVM 20 ssDNA 缺陷型 AAV 乳多空病毒 乳實瘤 兔 ,人 (BPV) 3050 環(huán)狀 dsDNA 多型瘤 小鼠腫瘤 空泡 SV40， BKV 腺病毒 人 (AD) 8090 dsDNA 3040 皰疹病毒 HSV,EBV 100150 dsDNA
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