第六節(jié)植物克隆載體-展示頁
2024-10-15 15:39本頁面
【正文】 DNA的存在不能使轉(zhuǎn)化細(xì)胞再生為完整植株 2) 載體類型 i)中間載體 (intermediate vector) 由以下幾部分組成： ? 適合于 基因 ? 適合于植物細(xì)胞選擇用標(biāo)記基因 ? 一段來自天然 Ti質(zhì)粒的部分 TDNA序列（提供同源重組） ? 12個(gè)來自 TDNA的 25bp重復(fù)序列 ? 用于表達(dá)外源基因的 DNA序列（如啟動(dòng)子、終止子序列） 重組 DNA的轉(zhuǎn)移過程 ： 中間載體或重組子 (中宿主 ) 在根癌農(nóng)桿菌中與天然 Ti質(zhì)?；蚍侵铝鲑|(zhì)粒發(fā)生 共整合作用 感染植物受傷組織或與植物細(xì)胞共培養(yǎng) TDNA進(jìn)入植物細(xì)胞并整合到染色體 DNA中 外源基因表達(dá) 轉(zhuǎn)化 接合 轉(zhuǎn)移 Ti GG細(xì)菌間DNA的轉(zhuǎn)移Ti 細(xì)菌植物間DNA 的轉(zhuǎn)移根癌農(nóng)桿菌中 Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移 L I HK a nrS p e/ S t rr L I H O CStmstmr共整合作用共培養(yǎng)T i 質(zhì)粒p M O N 載體植物細(xì)胞內(nèi)L I HL I HTi載體的共整合作用 LIHtmsTiVirLIHT i 1T i 3LIHT i 2LIHT i 5T i 6T i 4v i r分離兩個(gè)25 bp重復(fù)序列,插入細(xì)菌載體分離25 bp和LIH序列,插入細(xì)菌載體除去致瘤基因除去致瘤基因和25bp序列Vir 用細(xì)菌載體DNA取代TDNA除去全部TDNAT i 5 是中間載體, T i 6 是雙質(zhì)粒載體Ti基 因片段植物標(biāo)記基因Ti質(zhì)粒衍生的植物克隆載體 K a nr AprAprpBR322MCS N O Spro mote r O C St e r m i n a t o rAprK a nr N O Spro mote r O C StermonatorM C S非致瘤載體的重組 ii)非致瘤 Ti質(zhì)粒載體 (disarmed Ti plasmid) 該類載體實(shí)際上是輔助載體，其特點(diǎn)是用 pBR322 DNA取代了 Ti質(zhì)粒中參與植物激素合成基因序列，它可以與含有 pBR322 序列的 DNA發(fā)生同源重組，構(gòu)成一個(gè)完整的重組 DNA序列，然后轉(zhuǎn)移至植物細(xì)胞。 1) Ti 質(zhì)粒類型 （由 Ti 質(zhì)粒所產(chǎn)生的冠癭堿種類而定） i. 鱆魚堿類 (octopine) ii. 胭脂堿類 (nopaline) (agropine) 2) Ti 質(zhì)粒的結(jié)構(gòu) i. 環(huán)狀 dsDNA,160250kb，具六個(gè)功能區(qū) i) 致瘤區(qū)：合成植物生長素和細(xì)胞分裂素 ii) 冠癭堿合成區(qū)：參與冠癭堿合成 iii) 冠癭堿分解區(qū)：參與冠癭堿分解 iv) Ti 質(zhì)粒轉(zhuǎn)移區(qū) (tra)：參與不同農(nóng)桿菌中的接合轉(zhuǎn)移 v) 毒（性）區(qū)：參與 TDNA的轉(zhuǎn)移和插入植物染色體 vi) DNA復(fù)制區(qū)：參與 Ti 質(zhì)粒 DNA復(fù)制 T i 質(zhì)粒
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