細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)入門(mén)-在線(xiàn)瀏覽
2025-01-14 05:45本頁(yè)面
【正文】 再烘干備用。注意在超凈臺(tái)內(nèi)取出使用時(shí)應(yīng)該立即將螺旋旋緊。然后再泡入鹽酸液 30 分鐘，再用自來(lái)水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。 3. 膠帽，離心管帽烘干后只能在 2％氫氧化鈉溶液中浸泡 612 小時(shí)（切記時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)），自來(lái)水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。 ，培養(yǎng)板，凍存管： ：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸氣 消毒，可用 70％酒精浸泡消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用 2— 3周時(shí)間洗除殘留的氧化乙烯。為了防止清洗器材已消毒與末消毒發(fā) 生混淆，可在紙包裝后，用密寫(xiě)墨水作好標(biāo)記。密寫(xiě)墨水的配制：氯化鉆 (CoC12 注意事項(xiàng)： ：高壓消毒時(shí)，先檢查鍋內(nèi)是否有蒸餾水，以防高壓時(shí)燒干，水不能過(guò)多因?yàn)槠鋵⑹箍諝饬鲿呈茏?，?huì)降低高壓消毒效果。 ：注意濾膜光滑一面是正面，要朝上，否則起不到過(guò)濾的作用。 器皿時(shí)防止酸液濺到地面，會(huì)腐蝕地面。 細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制與消毒 器材與試劑： 干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素 . 純凈水系統(tǒng)、電子天平、 PH 計(jì)、磁力攪拌器。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水 二 .PBS 的制備與消毒 (也可用于其它 BSS，如： Hanks， DHanks 液的配制 )： ：將藥品（ NaCl ， KCl ， Na2HPO4 ：將 PBS 倒入溶液瓶（大的吊針瓶）內(nèi)，蓋上膠帽，并插上針頭放入高壓鍋內(nèi) 8 磅消毒 20 分鐘。 三 . 胰蛋白酶溶液的配制與消毒： 胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH為 、溫度為 37℃ 時(shí)，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。因 Ca2+、 Mg2+和血清、蛋白質(zhì) 克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+、 Mg2+的 BSS，如： DHanks 液。 ：按胰蛋白酶液濃度為 ％，用電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 ）或 PBS（ Dhanks）液中。 ：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（ 微米微孔濾膜）抽濾除菌。 四 .青、鏈霉素溶液的配制于消 毒 1. 所用純凈水（雙蒸水）需要 15 磅高壓 20 分鐘滅菌。青霉素是 80 萬(wàn)單位 /瓶，用注射器加 4ml 滅菌雙蒸水。 ，使青鏈霉素的濃度最終為 100 單位 /ml。然后用一個(gè)當(dāng)量的鹽酸和 NaOH 調(diào) PH到 左右。 ：安裝時(shí)先裝好支架，按規(guī)定放好濾膜，用螺絲將不銹鋼濾器和支架連接好。 ：配制好的培養(yǎng)液通常用濾器過(guò)濾除菌。 ：將過(guò)濾好的培養(yǎng)液分裝入小瓶?jī)?nèi)置于 4℃ 冰箱內(nèi)待用。 六．血清的滅火： 細(xì)胞培養(yǎng)常用的是小牛血清，新買(mǎi)來(lái)的血清要在 56℃ 水浴中滅火 30 分鐘后，再經(jīng)過(guò)抽濾方可加入培養(yǎng)基中使用。對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。使用終濃度為 1050mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含 20mmol/LHEPES 即可達(dá)到緩沖能力。過(guò)濾除菌，分裝后 4℃ 保存。如：稱(chēng)取 克 HEPES 溶于 20ml 三蒸水中，過(guò)濾除菌后可完全（ 20ml）加入 1L 培養(yǎng)液中，或者每 100ml 培養(yǎng)液中加入 2ml 即可。在配制各種培養(yǎng)液中都應(yīng)該補(bǔ)加一定量的谷氨酰胺。加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在 4℃ 冰箱中儲(chǔ)存 2 周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)的谷氨酰胺。可以配制 200mmol/L 谷氨酰胺液貯存，用時(shí)加入培養(yǎng)液。 九 .肝素溶液的配制： 含有肝素的培養(yǎng)液可以使內(nèi)皮細(xì)胞純度提高，肝素加入全培養(yǎng)液中最終濃度為 50ug/ml。使用時(shí)，向 100ml 培養(yǎng)液中加入 1ml（精確可加入 ）即可。注意：因?yàn)?Ⅰ 型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過(guò)濾，因此可以用蔡式濾器過(guò)濾除菌。 十一 .明膠溶液： 因?yàn)槊髂z難于過(guò)濾，所以配制 ％明膠溶液必須用無(wú)菌的 PBS 配制。首要的問(wèn)題是如何無(wú)菌準(zhǔn)確稱(chēng)量 克（配成 100ml 溶液） —
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