動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)小鼠脾臟細(xì)胞docxdocx-在線瀏覽
2024-08-27 18:07本頁面
【正文】 根據(jù)染色結(jié)果計算活細(xì)胞率：依據(jù)死細(xì)胞染成藍(lán)色、活細(xì)胞不著色的原則計數(shù)死細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，以如下公式計算細(xì)胞存活率：每毫升液體中細(xì)胞的數(shù)=每個大方格中的細(xì)胞數(shù)量*10000*稀釋倍數(shù)【實驗結(jié)果】從培養(yǎng)箱拿出的培養(yǎng)基在倒置顯微鏡下可以清晰的看到培養(yǎng)的細(xì)胞，細(xì)胞呈圓形，形狀規(guī)則，聚集在一起，有立體感。（2）. 若所得培養(yǎng)基沒有明顯的顏色變化，則很有可能培養(yǎng)基中未接入細(xì)胞或接入的細(xì)胞很少，細(xì)胞未生長繁殖。 若所得的培養(yǎng)基透明度高，顏色微黃則證明細(xì)胞培養(yǎng)成功。而死細(xì)胞含有空泡，顆粒狀物質(zhì)多，細(xì)胞透明度下降，沒有立體感，核區(qū)域模糊，體積更大4. 活細(xì)胞邊緣較明顯，由于細(xì)胞膜仍然具有選擇透過性，染料無法通過細(xì)胞膜，所以呈現(xiàn)透明無色6. 本次實驗，我們組所得的細(xì)胞存活率較低，分析原因可能是：無菌操作時實驗操作不規(guī)范，導(dǎo)致細(xì)胞被破壞，影響了實驗結(jié)果，也有可能是因為染色時間過長，細(xì)胞膜的通透性遭到破壞，部分細(xì)胞死亡。2. 嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，防止雜菌污染，影響實驗結(jié)果。4. 取小鼠脾臟細(xì)胞時要小心謹(jǐn)慎，既不能太用力將脾扎爛，也不能扎的太輕因為得到的脾細(xì)胞太少，起初我們組扎的很輕得到的細(xì)胞很少，給老師看過之后，重新扎脾臟，得到了較多的細(xì)胞。7. 在用血球計數(shù)板技術(shù)時，計上不計下，計左不計右。此外，計數(shù)時要十分謹(jǐn)慎，因為是要在計數(shù)的結(jié)果上乘以10000，即使是很小的偏差也會導(dǎo)致實驗結(jié)果的大不相同。此外，對于實驗?zāi)承r間的精確把握也非常重要，時間的長短對于實驗結(jié)果可能有較大的影響，日后一定要注意這一方面。（1）. 應(yīng)用結(jié)晶紫染色測定法篩選抗腫瘤藥物結(jié)晶紫染色測定法是一種單層細(xì)胞培養(yǎng)的體外藥物敏感性測定方法，其原理是結(jié)晶紫染色可通過細(xì)胞的特定攝生法而選擇性的被細(xì)胞吸收，死亡的細(xì)胞幾乎不吸收結(jié)晶紫染料，而被核吸收的結(jié)晶紫染料又可被有機溶媒提取，通過測定提取液的光密度值，就可測定活細(xì)胞的數(shù)量。（2） 應(yīng)用噬菌體篩選已確證多種病毒能引起動物腫瘤，噬菌體是細(xì)菌的病毒，與腫瘤病毒相似，噬菌體的DNA也可整合到細(xì)菌染色體上，隨細(xì)菌DNA復(fù)制分裂并遺傳至子代細(xì)菌，不引起細(xì)菌裂解但可引起細(xì)菌部分生物學(xué)性狀發(fā)生改變。有些有誘導(dǎo)作用的物質(zhì)常同時具有抗腫瘤的作用。細(xì)胞水平的藥物篩選模型具有材料用量少、藥物作用機制比較明確和大規(guī)模篩選等優(yōu)點。法等檢測天然藥物及其提取物或單體的體外抗腫瘤作用。溫斌等在研究腹腔注射灰樹花提取成分對小鼠免疫功能的影響時,采用乳酸脫氫酶法、結(jié)晶紫染色法、MTT生物活性測定法等對小鼠脾自然殺傷(NK)細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞進(jìn)行檢2α、白細(xì)胞介素(21的產(chǎn)生水平。結(jié)晶紫染色法和MTTrAdinbitor能夠劑量依賴性地抑制SMMC27721細(xì)胞在FN上的黏附,促使已黏附的SMMC27721細(xì)胞脫落。已發(fā)現(xiàn)在正常的體細(xì)胞和良性腫瘤組織中端粒酶的活性是陰性，而在人體惡性腫瘤組織和人的腫瘤細(xì)胞株中都表達(dá)了很高的活性。（5）以DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶點篩選天然抗腫瘤藥物DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(DNA鏈的切割、轉(zhuǎn)移和再連接來改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。重組和有絲分裂等。campdoxorubicin)等則作用于真核生物DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ。的一條或兩條鏈的斷裂從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡。李運曼等通過DNA解螺旋實驗評價紫草素對拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ催化活性的抑制作用。湯濤等通過實驗首次揭示了鴉膽子油乳能夠特異性地抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的活力,而對拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ沒有影響,對DNA也沒有直接作用。子油乳細(xì)胞內(nèi)作用靶點之一(6）作用微管蛋白的天然抗腫瘤藥物的篩選方法微管(microtubule)是由αβ微管蛋白異二聚體聚合而成的管狀聚合物,是真核細(xì)胞骨架的重要組成部分。動、染色體運動和細(xì)胞分裂等。因(1990年從海綿動物Discodermia1999ijiensisFasciospongiatella中均發(fā)現(xiàn)了新型促進(jìn)微管穩(wěn)定化合物laulimalideLaulimalide可以有效促進(jìn)微管蛋白的聚合,并且與紫杉醇誘導(dǎo)形成的微管蛋白聚合體相似,但促聚合作用低于紫杉醇。laulimatide處理A210細(xì)胞可導(dǎo)致劑量依賴性細(xì)胞微管網(wǎng)的重組和異常紡錘體的形成,并能誘導(dǎo)染色體的卷繞和多核仁的形成。（7）應(yīng)用調(diào)節(jié)細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路篩選方法近年來,部分抗腫瘤藥物的研發(fā)已從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒藥物轉(zhuǎn)移到針對腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路的新型抗腫瘤藥物。差異,因此靶向這些組分的抗腫瘤藥物具有高選擇性、高效、低毒的特征。信號通路、鈣和鈣調(diào)蛋白通路等幾個通路實現(xiàn)。SAMEL等報道,芥麥(李寶元明兩者之間存在因果關(guān)系。（8）應(yīng)用腫瘤新生血管生成抑制的篩選方法腫瘤的新生血管是實體瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移的一個重要因素,它為腫瘤的生長提供必需的營養(yǎng)和氧氣。極其重要的作用。實驗組腫瘤組織中VEGFmRNA的表達(dá)量、VEGF蛋白表達(dá)量和MVD顯著低于對照組,從而認(rèn)為Rg3通過下調(diào)腫瘤組織中VEGFmRNA和VEGF蛋白的表達(dá)量來阻滯腫瘤血管的生成,抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。10μg因此認(rèn)為薏苡仁注射液對腫瘤血管生成有顯著抑制作用。（9）天然藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡的篩選細(xì)胞調(diào)亡(apoppcell細(xì)胞調(diào)亡伴隨著細(xì)胞質(zhì)濃縮,細(xì)胞核崩裂,微粒消失,細(xì)胞膜皺縮,染色質(zhì)濃縮繼而解體,DNA裂成180細(xì)胞增殖、分化和調(diào)亡調(diào)節(jié)系統(tǒng)的失常將導(dǎo)致細(xì)胞惡性生長分裂。增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡來發(fā)揮抗腫瘤作用。賈彩云等研究表明,蟾酥靈處理過的K562細(xì)胞其生長受到明顯抑制,形態(tài)學(xué)呈現(xiàn)出典型的調(diào)亡特征性改變,即核染色質(zhì)凝集、碎裂、延核周邊分布,胞膜內(nèi)陷將變性的細(xì)胞內(nèi)容物包裹成
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