微生物實驗論文-在線瀏覽
2025-01-05 06:40本頁面
【正文】 驗后期分別通過甲基紅試驗、淀粉水解實驗、 pH 梯度試驗等生理生化反應(yīng)，檢測所得纖維素分解菌在分解過程中是否產(chǎn)酸、能否水解淀粉，以及不同 pH 值下分解纖維素的能力，為日后進(jìn)一步的研究打下基礎(chǔ)。保護(hù)環(huán)境資源，尋找可利用的新型能源已成為科學(xué)工作者的新課題。據(jù)統(tǒng)計，地球上每年光合作用的產(chǎn)物中， 90%以上為木質(zhì)纖維素類物質(zhì)。 土壤中的某些微生物有分解纖維素的能力。微生物分解纖維素主要是因為它們能夠分解纖維素酶。 1. 土壤中纖維素分解菌的分離及篩選 土樣的采集 土壤中的微生物，大約 70%90%是細(xì)菌。因此，土壤取樣時，一般要鏟去表層土。綜合各種因素，本小組分別從生科院南樓后的花園中和學(xué)生公寓 4號樓下的落葉堆下取土壤樣品。 富集培養(yǎng) 在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基之前，先通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品 中分離到所需要的微生物。 選擇培養(yǎng)基的制備比例見下： 纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基 纖維素粉 5g NaNO3 1g Na2HPO4 7H2O KCl 酵母膏 水 解酪素 將上述物質(zhì)溶解后 ,用蒸餾水定容到 1000ml 按上表比例配制 50ml 選擇培養(yǎng)基。 用移液器移取 10mL 土壤懸液于選擇培養(yǎng)基中， 將瓶置于搖床上，在 30℃下振蕩培養(yǎng) 3— 4d，至培養(yǎng)基變渾濁。 需要先經(jīng)高壓蒸氣滅菌的儀器：試管（每只內(nèi)裝 9ml 蒸餾 水）、槍頭（黃色、藍(lán)色）。L 的移液管從富集培養(yǎng)土壤液中吸取 1ml土壤懸液加入盛有 9ml無菌水的試管中充分混勻。 剛果紅染色法分離 所需儀器：無菌培養(yǎng)皿（ 12 個）、涂布器（ 3 個）、移液器、槍頭、溫箱等。 (1) 鑒別培養(yǎng)基的制備 培 養(yǎng)基成分如下： 纖維素剛果紅培養(yǎng)基 （ NH4） 2SO4 MgSO4 （ 4） 劃線分離 將步驟 (1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入 4 個無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取 (3)中 4 種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。 2. 革蘭氏染色及菌種保存 1. 革蘭氏染色 基本原理： 革蘭氏染色法是 1884 年由丹麥病理學(xué)家 Christain Gram 氏創(chuàng)立的，而后一些學(xué)者在此礎(chǔ)上作了某些改進(jìn)。 革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 (或丙酮 )脫色，最后用復(fù)染劑 (如番紅 )復(fù)染。 革蘭氏染色 的主要原理是由于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣。另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同 PH 條件下進(jìn)行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)； PH 很低時，則可都呈負(fù)反應(yīng)。所以脫色時間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。 操作步驟： 制片（涂布、干燥、固定）→結(jié)晶紫初染 1— 2min，水洗→碘液媒染 1min，水洗→乙醇脫色 30s，水洗→番紅復(fù)染 1min，水洗→干燥→鏡檢，油鏡觀察 。 表 1 革蘭氏染 色結(jié)果 （ “ +”表示陽性，“ — ”表示陰性 ） 陰性 /陽性 白色菌 （菌 1） — 粉色菌 （菌
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