微生物實驗論文-在線瀏覽
2025-01-05 06:40本頁面
【正文】 驗后期分別通過甲基紅試驗、淀粉水解實驗、 pH 梯度試驗等生理生化反應，檢測所得纖維素分解菌在分解過程中是否產(chǎn)酸、能否水解淀粉，以及不同 pH 值下分解纖維素的能力，為日后進一步的研究打下基礎。保護環(huán)境資源，尋找可利用的新型能源已成為科學工作者的新課題。據(jù)統(tǒng)計，地球上每年光合作用的產(chǎn)物中， 90%以上為木質(zhì)纖維素類物質(zhì)。 土壤中的某些微生物有分解纖維素的能力。微生物分解纖維素主要是因為它們能夠分解纖維素酶。 1. 土壤中纖維素分解菌的分離及篩選 土樣的采集 土壤中的微生物，大約 70%90%是細菌。因此，土壤取樣時，一般要鏟去表層土。綜合各種因素，本小組分別從生科院南樓后的花園中和學生公寓 4號樓下的落葉堆下取土壤樣品。 富集培養(yǎng) 在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基之前，先通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品 中分離到所需要的微生物。 選擇培養(yǎng)基的制備比例見下： 纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基 纖維素粉 5g NaNO3 1g Na2HPO4 7H2O KCl 酵母膏 水 解酪素 將上述物質(zhì)溶解后 ,用蒸餾水定容到 1000ml 按上表比例配制 50ml 選擇培養(yǎng)基。 用移液器移取 10mL 土壤懸液于選擇培養(yǎng)基中， 將瓶置于搖床上，在 30℃下振蕩培養(yǎng) 3— 4d，至培養(yǎng)基變渾濁。 需要先經(jīng)高壓蒸氣滅菌的儀器：試管（每只內(nèi)裝 9ml 蒸餾 水）、槍頭（黃色、藍色）。L 的移液管從富集培養(yǎng)土壤液中吸取 1ml土壤懸液加入盛有 9ml無菌水的試管中充分混勻。 剛果紅染色法分離 所需儀器：無菌培養(yǎng)皿（ 12 個）、涂布器（ 3 個）、移液器、槍頭、溫箱等。 (1) 鑒別培養(yǎng)基的制備 培 養(yǎng)基成分如下： 纖維素剛果紅培養(yǎng)基 （ NH4） 2SO4 MgSO4 （ 4） 劃線分離 將步驟 (1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入 4 個無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取 (3)中 4 種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。 2. 革蘭氏染色及菌種保存 1. 革蘭氏染色 基本原理： 革蘭氏染色法是 1884 年由丹麥病理學家 Christain Gram 氏創(chuàng)立的，而后一些學者在此礎上作了某些改進。 革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 (或丙酮 )脫色，最后用復染劑 (如番紅 )復染。 革蘭氏染色 的主要原理是由于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應不一樣。另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同 PH 條件下進行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。例如，在強堿的條件下進行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應； PH 很低時，則可都呈負反應。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。 操作步驟： 制片（涂布、干燥、固定）→結晶紫初染 1— 2min，水洗→碘液媒染 1min，水洗→乙醇脫色 30s，水洗→番紅復染 1min，水洗→干燥→鏡檢，油鏡觀察 。 表 1 革蘭氏染 色結果 （ “ +”表示陽性，“ — ”表示陰性 ） 陰性 /陽性 白色菌 （菌 1） — 粉色菌 （菌
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