微生物實(shí)驗(yàn)教材-在線瀏覽
2025-01-28 17:14本頁(yè)面
【正文】 簡(jiǎn)稱(chēng) NA），將手指輕按於培養(yǎng)基的一區(qū)上 另外有一平板培養(yǎng)基，將蓋子打開(kāi)，於空氣中暴露30分鐘 將平板培養(yǎng)基倒置放於室溫中，培養(yǎng) 2448小時(shí)。試著依大小、形狀、表面狀況、高度、顏色、邊緣等，描述幾個(gè)不同之菌落，菌落之外表特徵，可供菌種鑑定時(shí)的參考。 ?材料 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng) (NA, nutrient agar) 接種環(huán)、酒精燈 菌種 大腸桿菌 Escherichia coli 枯草桿菌 Bacillus subtilis 金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ? 實(shí)驗(yàn)步驟 用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿標(biāo)示組別、座號(hào)、日期，另外逆時(shí)針標(biāo)示三區(qū)（ I、 II、 III，每一區(qū)大約差 60~90度）及中間第四區(qū) IV I II III IV 將接種環(huán)前端的環(huán)區(qū)置於酒精燈上燒紅，放於酒精燈旁冷卻（要確實(shí)冷卻），以冷卻的接種環(huán)沾取一些菌落。再將接種環(huán)用酒精燈燒紅、冷卻。蓋上培養(yǎng)皿。 打開(kāi)培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿逆時(shí)針轉(zhuǎn)約 60~90度，自第 II區(qū)的尾部，單方向畫(huà)線拖往第 III區(qū)，大約劃 510條線。接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。 液態(tài)培養(yǎng)基的接種，將接種環(huán)燒紅之外，上面鐵棒部分也要燒過(guò)，放於酒精燈旁冷卻（要確實(shí)冷卻），沾取一些菌落。 拿出接種環(huán)，瓶口過(guò)火，蓋子過(guò)火，蓋子套回試管，再過(guò)火，接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。 接菌方式如上所述，沾到菌之後將接種環(huán)深入試管底部，從下往上慢慢 Z字型畫(huà)線。 固態(tài)培養(yǎng)基將培養(yǎng)於 45℃ 、 37℃ 、 25℃ 、 4℃ ，液態(tài)培養(yǎng)基置於 37℃ 震盪培養(yǎng)。此種方法簡(jiǎn)單、靈敏，廣泛應(yīng)用於食品、水體及土壤樣品中活的細(xì)菌的計(jì)數(shù) 平板計(jì)數(shù)法得到的結(jié)果稱(chēng)為菌落形成單位 (colony forming unit， CFU) CFU並不完全等同於樣品中的活菌數(shù)，菌落數(shù)在30300個(gè)內(nèi)，所計(jì)數(shù)的結(jié)果會(huì)較正確 ?材料 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng) (NA, nutrient agar) 液態(tài)培養(yǎng)基 (broth) L型玻棒、酒精燈 菌種（大腸桿菌 Escherichia coli）與所使用的稀釋倍數(shù)菌液 ? 實(shí)驗(yàn)步驟 用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿標(biāo)示組別、座號(hào)、日期，與所使用的稀釋倍數(shù)菌液。 以微量吸管取 100 ml稀釋菌液加於培養(yǎng)基的中央。 用冷卻的玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上，塗佈的時(shí)候只需將培養(yǎng)基稍微打開(kāi)，邊推邊轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)基，盡量塗均勻及避免污染。有時(shí)會(huì)不容易推乾，可置於無(wú)菌操作臺(tái)吹乾，培養(yǎng)於 37℃ 隔夜。 ?原理 鑑別染色需要先將細(xì)菌熱固定於玻片上，利用四種化學(xué)藥劑 結(jié)晶紫為初染劑，使細(xì)菌著色，細(xì)菌呈現(xiàn)藍(lán)紫色 革蘭碘為媒染劑，加強(qiáng)結(jié)晶紫的染色效果 95%的酒精為脫色劑，脫去初染劑的顏色，也是關(guān)鍵步驟 番紅為複染劑，與初染呈對(duì)比顏色 因?yàn)榧?xì)胞壁結(jié)構(gòu)不一樣，革蘭氏陽(yáng)性菌會(huì)被染成藍(lán)紫色，而革蘭氏陰性菌則被染成紅色。 媒染劑：革蘭碘液 (Gram39。 脫色劑： 95%酒精，酒精可溶解掉革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中外層
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