微生物實(shí)驗(yàn)教材(編輯修改稿)
2025-01-14 17:14 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 要讓火滴到酒精中）。 用冷卻的玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上，塗佈的時(shí)候只需將培養(yǎng)基稍微打開，邊推邊轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)基，盡量塗均勻及避免污染。 塗佈到菌液乾掉為止（這樣才可倒置培養(yǎng)）。有時(shí)會(huì)不容易推乾，可置於無(wú)菌操作臺(tái)吹乾，培養(yǎng)於 37℃ 隔夜。 總菌數(shù)的計(jì)數(shù) 培養(yǎng)基菌落數(shù) / ml/稀釋倍數(shù) 例如：所使用的稀釋度為 105，平板長(zhǎng)出的菌落數(shù)平均為 200個(gè)，則原培養(yǎng)液中可能的菌數(shù)含量為？ 200/ ml/105 = 200 x 106 = 2 x 108 ?平板塗布技術(shù) (SpreadPlate Technique) 1. 將少量的菌液用微量吸管滴在平板中央 2. 將玻棒侵入酒精中 『冷卻』 題目：細(xì)菌的鑑別染色法 革蘭氏染色法（ Gram stain） ?目的 藉由此實(shí)驗(yàn)讓學(xué)生練習(xí)細(xì)菌的鑑別染色方法，革蘭氏染色可將細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽(yáng)性菌及陰性菌。 ?原理 鑑別染色需要先將細(xì)菌熱固定於玻片上，利用四種化學(xué)藥劑 結(jié)晶紫為初染劑，使細(xì)菌著色，細(xì)菌呈現(xiàn)藍(lán)紫色 革蘭碘為媒染劑，加強(qiáng)結(jié)晶紫的染色效果 95%的酒精為脫色劑，脫去初染劑的顏色，也是關(guān)鍵步驟 番紅為複染劑，與初染呈對(duì)比顏色 因?yàn)榧?xì)胞壁結(jié)構(gòu)不一樣，革蘭氏陽(yáng)性菌會(huì)被染成藍(lán)紫色，而革蘭氏陰性菌則被染成紅色。 ?革蘭氏染色法四種化學(xué)藥劑的作用原理 初染劑：結(jié)晶紫 (Crystal violet)是一種鹼性溶劑，可與細(xì)胞壁中的勝肽聚醣緊密結(jié)合，使細(xì)菌染成藍(lán)紫色。 媒染劑：革蘭碘液 (Gram39。s iodine solution)，可與結(jié)晶紫結(jié)合形成不溶性複合物，加強(qiáng)結(jié)晶紫的顏色。 脫色劑： 95%酒精，酒精可溶解掉革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中外層的脂多醣（ LPS），而使的結(jié)晶紫釋出，使菌體成無(wú)色。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁之脂質(zhì)含量低，酒精很難讓結(jié)晶紫完全釋出，因而保留了藍(lán)紫色，但若脫色時(shí)間太久也會(huì)導(dǎo)致菌體成無(wú)色。 複染劑：番紅 (safranin)可將脫成無(wú)色的革蘭氏陰性菌染成紅色，而革蘭氏陽(yáng)性菌因保有初始的藍(lán)紫色，番紅無(wú)法將其再染色。 ?材料 液態(tài)培養(yǎng)菌液 大腸桿菌 Escherichia coli 枯草桿菌 Bacillus subtilis 宜使用培養(yǎng) 16~24小時(shí)之細(xì)菌。因菌齡老化，革蘭氏陽(yáng)性菌之勝肽聚醣易失去保留初染劑結(jié)晶紫的能力，而使的份菌體染呈藍(lán)紫色，部份呈紅色。 玻片、顯微鏡、試鏡紙、酒精燈 染劑 結(jié)晶紫、革蘭碘、 95%酒精、番紅 ?實(shí)驗(yàn)步驟 以試鏡紙將玻片擦乾淨(jìng)，以簽字筆在玻片背面畫一個(gè)小圓圈。 使用接種環(huán)取一點(diǎn)菌液（環(huán)部分形成一薄膜），塗抹於玻片中央，將接種環(huán)再燒紅滅菌。大腸桿菌（ EC）與枯草桿菌（ BS）分別取，於空氣中乾燥，熱固定（玻片背面用火烤一下）。 滴結(jié)晶紫覆蓋塗抹區(qū)，靜置一分鐘，以 RO水輕洗。（在水槽邊操作） 滴革蘭碘試劑染一分鐘，以 RO水輕洗。 以 95%酒精脫色，將玻片放傾斜，酒
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