微生物實驗實驗一顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察(編輯修改稿)
2025-02-04 12:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 離時 ， 染色部分是帶正電荷的 ， 容易與帶負電荷的菌體結(jié)合使之著色 。 經(jīng)染色后的菌體細胞與背景形成鮮明的對比 ， 在顯微鏡下很容易觀察 。 33 ? 3． 革蘭氏染色法： 革蘭氏染色法將細菌分為 G＋ 和 G ， 這由兩類細菌細胞壁的結(jié)構(gòu)和組成的不同而決定 。 用結(jié)晶紫初染后 ， 所有的細菌都染上藍紫色 。 碘作為媒染劑能與結(jié)晶紫結(jié)合形成結(jié)晶紫碘的復合物 ， 增強了染料與菌體的結(jié)合力 。 用乙醇脫色處理時 ， 兩類細菌的脫色效果是不同的 。 G＋ 細菌的細胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成 ， 且壁厚 、 類脂含量低 ， 用乙醇脫色時使細胞壁脫水 、 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小 ， 通透性降低 ，使得結(jié)晶紫 — 碘的復合物不易被洗脫而保留在細胞內(nèi) 。 雖經(jīng)洗脫和復染仍然保持初染劑的藍紫色 。 G細菌則不同 ， 由于其細胞壁肽聚糖層較薄 ， 類脂含量高 ， 所以在脫色處理時 ，類脂被乙醇溶解 ， 細胞壁的通透性增大 ， 使結(jié)晶紫 — 碘的復合物比較容易被洗脫出來 ， 用復染劑復染后 ， 細胞被染上復染劑的顏色 。 34 三 ． 實驗器材 1． 顯微鏡 、 香柏油 、 接種環(huán) 、 酒精燈等 。 2． 結(jié)晶紫染液 、 碘液 、 95%乙醇 、 沙黃染液 。 3． 菌種：大腸桿菌 、 枯草芽孢桿菌 。 35 四 ． 實驗內(nèi)容 (一 ) 單染色 1． 涂片 取一塊載玻片 ， 用記號筆劃分出兩區(qū)域并做上記號 ， 在兩區(qū)域中央各滴半滴無菌水 ， 用接種環(huán)以無菌操作法分別取兩種菌種在左右兩滴水中 ， 和勻后涂成薄膜 。 2． 干燥 室溫自然干燥或吹干 。 3． 固定 涂面朝上 ， 通過火焰 2~3次 。 4． 染色 在涂片薄膜上滴加結(jié)晶紫染液 ， 使之覆蓋 2分鐘 。 5． 水洗 傾倒去染液 ， 斜置載玻片 ， 用洗瓶小水流沿玻片邊緣沖洗 ， 直至水呈無色為止 。 6． 干燥 室溫自然干燥或用吸水紙吸干 。 36 (二 )革蘭氏染色 完成單染色的 1~6步驟后 7. 媒染 加媒染劑碘液使之覆蓋 1分鐘 ， 水洗 ，吸水紙吸干 。 8. 脫色 滴加 95% 乙醇數(shù)滴使之覆蓋 16秒鐘 ， 立即水洗 ,吸干 。 9. 復染 用沙黃 （ 番紅 ） 液復染 2 分鐘 ， 水洗 ，吸干 。 (二 ) 鏡檢 先分別用低倍鏡和高倍鏡找到要觀察的樣品區(qū)域后 ， 用轉(zhuǎn)換器將物鏡轉(zhuǎn)到空擋 ， 在樣品區(qū)域滴加香柏油 ， 再將油鏡慢慢轉(zhuǎn)到工作位置浸入油中 。 若不清晰 ， 慢慢轉(zhuǎn)動微調(diào)直至清楚 。 油鏡用完后 ， 用鏡頭紙沾取乙醇 乙醚混合液檫拭油鏡頭 。 再用干的鏡頭紙檫干鏡頭 。 37 五．實驗結(jié)果 觀察兩種細菌的形態(tài)和顏色，繪出油鏡下細菌形態(tài)圖，說明革蘭氏染色的結(jié)果。 六．思考題 通過實驗 ， 你認為革蘭氏染色成功關(guān)鍵是那一步 ？ 為了避免假陽性或假陰性出現(xiàn) ， 在對未知菌種做革蘭氏染色鑒定時 ， 你認為應(yīng)該怎樣做 ？ 41 實驗四 微生物的計數(shù) （顯微鏡直接計數(shù)法） 一．目的 ，掌握血球計數(shù)板的計數(shù)方法。 ，學習區(qū)分酵母菌死活細胞的方法。 二 . 實驗器材 顯微鏡、血球計數(shù)板、酵母菌液、美藍染液、蓋玻片。 42 三．原理
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