微生物實驗論文(編輯修改稿)
2024-12-08 06:40 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 剛果紅 瓊脂 20g 水 1000mL pH （ 2）涂布平板 釋倍數(shù)分別為 10 10 107的樣品溶液涂布到纖維素剛果紅培養(yǎng)基上， 37℃培養(yǎng) 3— 4 d （ 3）菌落形態(tài)觀察 選取一株生長較好的白色菌株 （菌 1）和一株粉紅色菌株 （菌 2） 和一株水解圈非常明顯的菌株 （菌 3） 和一株 黃色 真菌 （菌4） 進行劃線分離。 （ 4） 劃線分離 將步驟 (1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入 4 個無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取 (3)中 4 種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。劃線完畢后，蓋上 皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)，至長出單菌落。 2. 革蘭氏染色及菌種保存 1. 革蘭氏染色 基本原理： 革蘭氏染色法是 1884 年由丹麥病理學家 Christain Gram 氏創(chuàng)立的，而后一些學者在此礎上作了某些改進。革蘭氏染色法是細菌學中最重要的鑒別染色法。 革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 (或丙酮 )脫色，最后用復染劑 (如番紅 )復染。經(jīng)此方法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上復染劑的顏色 (紅色 )，該菌屬于革蘭氏陰性菌。 革蘭氏染色 的主要原理是由于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應不一樣?，F(xiàn)在一般認為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據(jù)。另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同 PH 條件下進行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如，在強堿的條件下進行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應； PH 很低時，則可都呈負反應。此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫 — 碘復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。 所需儀器或試劑：菌種 1， 2 的平板培養(yǎng)物、革蘭氏染色液（結晶紫碘液，番紅染液）、顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、蒸餾水等。 操作步驟： 制片（涂布、干燥、固定）→結晶紫初染 1— 2min，水洗→碘液媒染 1min，水洗→乙醇脫色 30s，水洗→番紅復染 1min，水洗→干燥→鏡檢，油鏡觀察 。 鏡檢結果見表 1 和圖 4。 表 1 革蘭氏染 色結果 （ “ +”表示陽性，“ — ”表示陰性 ） 陰性 /陽性 白色菌 （菌 1） — 粉色菌 （菌 2） + 水解圈菌（菌 3） — 黃色菌 （菌 4） + 圖 1 黃色菌 （菌 4） 圖 2 白色菌 （菌 1） 圖 3 粉色菌 （菌 2） 圖 4 水解圈菌（菌 3） 2. 菌種保存 斜面（ CMC 培養(yǎng)基： NaCl ， MgSO4 7H2O 、 KH2PO4 、 、 K2HO4 、CMC15g、（ NH4） 2SO4 、 — 、水1000mL。配好后， 滅菌 121℃ ， 20min） 馬鈴薯 培養(yǎng)基（ 馬鈴薯 20g、
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