微生物實驗論文(編輯修改稿)
2024-12-08 06:40 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 剛果紅 瓊脂 20g 水 1000mL pH （ 2）涂布平板 釋倍數(shù)分別為 10 10 107的樣品溶液涂布到纖維素剛果紅培養(yǎng)基上， 37℃培養(yǎng) 3— 4 d （ 3）菌落形態(tài)觀察 選取一株生長較好的白色菌株 （菌 1）和一株粉紅色菌株 （菌 2） 和一株水解圈非常明顯的菌株 （菌 3） 和一株 黃色 真菌 （菌4） 進行劃線分離。 （ 4） 劃線分離 將步驟 (1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入 4 個無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取 (3)中 4 種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。劃線完畢后，蓋上 皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)，至長出單菌落。 2. 革蘭氏染色及菌種保存 1. 革蘭氏染色 基本原理： 革蘭氏染色法是 1884 年由丹麥病理學(xué)家 Christain Gram 氏創(chuàng)立的，而后一些學(xué)者在此礎(chǔ)上作了某些改進。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。 革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 (或丙酮 )脫色，最后用復(fù)染劑 (如番紅 )復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌；如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色 (紅色 )，該菌屬于革蘭氏陰性菌。 革蘭氏染色 的主要原理是由于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣?，F(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同 PH 條件下進行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴(yán)格控制。例如，在強堿的條件下進行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)； PH 很低時，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對結(jié)晶紫 — 碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。 所需儀器或試劑：菌種 1， 2 的平板培養(yǎng)物、革蘭氏染色液（結(jié)晶紫碘液，番紅染液）、顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、蒸餾水等。 操作步驟： 制片（涂布、干燥、固定）→結(jié)晶紫初染 1— 2min，水洗→碘液媒染 1min，水洗→乙醇脫色 30s，水洗→番紅復(fù)染 1min，水洗→干燥→鏡檢，油鏡觀察 。 鏡檢結(jié)果見表 1 和圖 4。 表 1 革蘭氏染 色結(jié)果 （ “ +”表示陽性，“ — ”表示陰性 ） 陰性 /陽性 白色菌 （菌 1） — 粉色菌 （菌 2） + 水解圈菌（菌 3） — 黃色菌 （菌 4） + 圖 1 黃色菌 （菌 4） 圖 2 白色菌 （菌 1） 圖 3 粉色菌 （菌 2） 圖 4 水解圈菌（菌 3） 2. 菌種保存 斜面（ CMC 培養(yǎng)基： NaCl ， MgSO4 7H2O 、 KH2PO4 、 、 K2HO4 、CMC15g、（ NH4） 2SO4 、 — 、水1000mL。配好后， 滅菌 121℃ ， 20min） 馬鈴薯 培養(yǎng)基（ 馬鈴薯 20g、
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