【正文】 和 x菌的培養(yǎng)液成為紅色，這說明了四種細(xì)菌在培養(yǎng)的早期均產(chǎn)生有機(jī)酸，但粉色菌和 x 菌在培養(yǎng)后期仍能維持酸性 pH4，而黃色菌和白色菌則轉(zhuǎn)化有機(jī)酸為非酸性末端產(chǎn)物，如乙醇、丙酮酸等，使pH 升至大約 6。 所需儀器或試劑：菌種 1， 2 的平板培養(yǎng)物、革蘭氏染色液（結(jié)晶紫碘液，番紅染液）、顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、蒸餾水等。 需要滅菌的儀器：無菌培養(yǎng)皿（ 12 個）、涂布器（ 3 個）、移液器、槍頭。另外，土樣的采集要選擇富含纖維素的環(huán)境，這是因?yàn)樵诶w維素含量豐富的環(huán)境，通常會聚集較多的分解纖維素的微生物。實(shí)驗(yàn)后期分別通過甲基紅試驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)、 pH 梯度試驗(yàn)等生理生化反應(yīng)，檢測所得纖維素分解菌在分解過程中是否產(chǎn)酸、能否水解淀粉，以及不同 pH 值下分解纖維素的能力，為日后進(jìn)一步的研究打下基礎(chǔ)。 富集培養(yǎng) 在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基之前，先通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品 中分離到所需要的微生物。 （ 4） 劃線分離 將步驟 (1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入 4 個無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取 (3)中 4 種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。 表 1 革蘭氏染 色結(jié)果 （ “ +”表示陽性，“ — ”表示陰性 ） 陰性 /陽性 白色菌 （菌 1） — 粉色菌 （菌 2） + 水解圈菌（菌 3） — 黃色菌 （菌 4） + 圖 1 黃色菌 （菌 4） 圖 2 白色菌 （菌 1） 圖 3 粉色菌 （菌 2） 圖 4 水解圈菌（菌 3） 2. 菌種保存 斜面（ CMC 培養(yǎng)基： NaCl ， MgSO4放入 高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi) 112℃滅菌 30min。 不同 PH值對分離菌株酶活力也有影響，本試驗(yàn)分離得到的菌種在 PH=6 左右的偏酸性條件下酶活力較高， PH 大于 6 后隨著 PH值的升高，纖維素酶活力降低。但是染料濃度的高低、每個培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的多少常常會導(dǎo)致培養(yǎng)基本身的背景值大小有所差異，因此限制了觀察的效果。 注意：甲基紅試劑不能加的太多，否則會有假陽性出現(xiàn)。所以脫色時間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。 剛果紅染色法分離 所需儀器：無菌培養(yǎng)皿（ 12 個）、涂布器（ 3 個）、移液器、槍頭、溫箱等。因此，土壤取樣時，一般要鏟去表層土。 關(guān)鍵詞 土壤 纖維素分解菌 分離篩選 pH 試驗(yàn) Isolation and Screening of Soil CelluloseDeposing Microbes Zhou Yudi, Zhu Liang, Zhu Xiaoyu, Zong Lu School of Life Science, Shandong University, Jinan,250100 Corresponding author Abstract In our experiment, we took an appropriate amount of soil sample, dissolved them in distilled water, put them in enrichment culture, and then sifted the bacteria and fungus which can break down cellulose by Congo redcellulose medi