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2025-02-25 04:51本頁(yè)面
【正文】 單一功能 單一功能 雙功能 識(shí)別與切割位點(diǎn) 分別，隨機(jī)切割，相距較遠(yuǎn) 同一位點(diǎn) 相距 510bp 在基因工程中意義 無(wú)用 非常有用 意義不大 限制性核酸內(nèi)切酶的分類(lèi) 限制性核酸內(nèi)切酶的類(lèi)型 主要特性 I 型 II 型 III 型 限制修飾 多功能 單功能 雙功能 蛋白結(jié)構(gòu) 異源三聚體 同源二聚體 異源二聚體 輔助因子 ATP Mg2+ SAM Mg2+ ATP Mg2+ SAM 識(shí)別序列 TGAN8TGCT AACN6GTGC 旋轉(zhuǎn)對(duì)稱(chēng)序列 GAGCC CAGCAG 切割位點(diǎn) 距識(shí)別序列 1kb處隨機(jī)性切割 識(shí)別序列內(nèi)或附近特異性切割 距識(shí)別序列下游 2426bp處 二、限制性?xún)?nèi)切酶作用機(jī)制 限制性?xún)?nèi)切酶以雙鏈 DNA為底物，識(shí)別特定的核苷酸序列，切斷特定位置的磷酸二酯鏈，產(chǎn)生具有 3’OH和 5’P的 DNA片段。 絕大多數(shù)的 Ⅱ 型限制性核酸內(nèi)切酶都能夠識(shí)別由 4~8個(gè)核苷酸組成的特定的核苷酸序列。 理論上，某限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別序列長(zhǎng)度為 n個(gè)核苷酸，則該酶切割 DNA的頻率為 1/4n，也就是說(shuō) DNA每隔 4n個(gè)核苷酸便 會(huì)出現(xiàn)一次該酶的識(shí)別序列。 A B C C’ B’ A’ A’ B’ C’ C B A A’ B’ N’ B A A B N B’ A’ A B B’ A’ A B B’ A’ 或 或 ? 回文結(jié)構(gòu)（ palindrome）：序列正讀和反讀是一樣的，即有一個(gè)中心對(duì)稱(chēng)軸，從這個(gè)軸朝兩個(gè)方向讀序列是完全一樣的。 四、限制性?xún)?nèi)切酶切割 DNA的位點(diǎn) 限制性?xún)?nèi)切酶切斷 DNA鏈上磷酸二酯鍵的位置一般在識(shí)別序列內(nèi)部，如 G↓GATCC, AT↓CGAT。 環(huán)狀 DNA分子上，若某種限制性?xún)?nèi)切酶有 n個(gè)識(shí)別序列，則完全切割后可獲得 n個(gè)片段。 幾種 II型限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn) Pst I Provindencia stuartii 164 CTGCAG GACGTC Haemophilus influenz
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