選修課臨床檢驗(yàn)9熒光定量pcr在臨床實(shí)驗(yàn)室診斷中的應(yīng)用-展示頁(yè)
2024-10-15 15:48本頁(yè)面
【正文】 性質(zhì) 生化診斷時(shí)代 生化分析 表象 免疫學(xué)診斷時(shí)代 酶免、放免 表象 分子 (基因 )診斷時(shí)代 基因體外擴(kuò)增 (PCR) 本質(zhì) 基因診斷技術(shù)的發(fā)展及在臨床診斷中的地位 基因診斷（分子診斷）：以核酸作為診斷的物質(zhì)基礎(chǔ) 主要包括： 遺傳性疾病 有遺傳趨向疾病的連鎖分析 疾病及腫瘤易感基因的分析 病原體的檢測(cè) 親子鑒定和個(gè)人認(rèn)定 人類基因組計(jì)劃（ HGP）與基因診斷 基因診斷技術(shù)： PCR技術(shù)為其標(biāo)志性技術(shù) 聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR） PCR： Polymerase Chain Reaction 基因體外擴(kuò)增技術(shù) Saiki PK 等 1985年 Science 230： 1350 Mullis K 1993年 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng) PCR循環(huán)次數(shù)與 DNA產(chǎn)量關(guān)系 循環(huán)次數(shù) DNA的鏈數(shù) 1 222 2 2 232 6 3 242 14 10 2112 2046 15 2162 65534 20 2212 2097150 25 2262 67,108,864 30 2312 2,147,483,646 熒光探針定量 PCR的技術(shù)特點(diǎn) 第一代 PCR技術(shù)：變性、退火、延伸 結(jié)果判斷：電泳 缺點(diǎn)：假陽(yáng)性（污染）、 假陰性（靈敏度低） 定性檢測(cè) 第二代 PCR技術(shù)：常規(guī) PCR+探針 例如：熒光探針 PCR技術(shù) PCRELISA ? ? 熒光探針定量 PCR技術(shù)的 原理 及過(guò)程 分 子 學(xué) 基 礎(chǔ)：常規(guī) PCR+熒光探針（ TaqMan熒光探針 ) 酶 學(xué) 基 礎(chǔ)： Taq酶的 5’ 3’外切核酸酶活性 熒光化學(xué)基礎(chǔ)：熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)標(biāo)記探針 熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理 (FRET ) Ct值 ： C代表 Cycle， t代表 threshold， 其
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