【正文】 程 分 子 學(xué) 基 礎(chǔ)：常規(guī) PCR+熒光探針（ TaqMan熒光探針 ) 酶 學(xué) 基 礎(chǔ)： Taq酶的 5’ 3’外切核酸酶活性 熒光化學(xué)基礎(chǔ)：熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)標(biāo)記探針 熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理 (FRET ) Ct值 ： C代表 Cycle， t代表 threshold， 其 含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá) 設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。 ?定 量 的 實(shí) 現(xiàn) ： ? 熒光探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合 ? Taq酶外切作用，探針裂解，熒光 被激發(fā) ? 熒光信號(hào)的檢測(cè) ? 熒光強(qiáng)度與定量核酸模板相關(guān)性 ? 實(shí)時(shí)定量與終產(chǎn)物定量 ? ? ? ? ? ? 熒光定量 PCR技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn) 一、真正的樣品原始核酸模板的準(zhǔn)確定量 二、定量范圍寬（ 0— 1010/ml)，無需梯度稀釋 三、封閉狀態(tài)檢測(cè)，避免擴(kuò)增產(chǎn)物污染 四、探針使用使特異性更強(qiáng) 五、光譜分析技術(shù)使敏感性更高 六、儀器讀數(shù)，結(jié)果判斷客觀真實(shí) 七、無需 PCR后處理，操作更簡(jiǎn)便、快速 八、數(shù)據(jù)電腦管理，利于醫(yī)院管理 熒光定量 PCR技術(shù)檢測(cè)的報(bào)告形式 一、報(bào)告形式： 熒光定量 PCR檢測(cè)的報(bào)告以：“拷貝數(shù)”（ copy) 二、拷貝數(shù)的意義： 表示原始標(biāo)本內(nèi)可供探針結(jié)合的核酸片段數(shù)量。 三、拷貝數(shù)與病原體的關(guān)系： 拷貝數(shù)與病原體的數(shù)量成正相關(guān) 一般來說：細(xì)菌是單拷貝的，病毒是多拷貝的。 檢測(cè)結(jié)果分析 熒光定量 PCR檢測(cè)結(jié)果的正常值？ 外源基因：正常值： 0拷貝 0拷貝：根據(jù)臨床表現(xiàn) 內(nèi)源基因：正常值：參照正常細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)水平 FQPCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 病原體的定量檢測(cè)； 腫瘤基因和腫瘤標(biāo)志物表達(dá) (mRNA)的檢測(cè)； 遺傳病基因的檢測(cè)； 與疾病相關(guān)的各種蛋白質(zhì)（細(xì)胞因子、酶、 激素、受體）的基因表達(dá)的定量檢測(cè)； 藥物療效的考核手段。 建立病原體的分子診斷標(biāo)準(zhǔn) FQPCR在病原體檢測(cè)中的應(yīng)用 一、肝炎病毒定量檢測(cè) 二、優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè) 三、結(jié)核桿菌及呼吸道病原體檢測(cè) 四、性病病原體檢測(cè) 129例 HBV定量檢測(cè)結(jié)果 ELISA 總數(shù) 陽性例數(shù) 陽性率 平均數(shù)量 范圍 大三陽 81 81 100% ?108/ml ?107~?1010/ml 小三陽 48 39 81% ?106/ml ?103~ ?106/ml HBV病毒載量與乙肝感染各期 平均