選修課臨床檢驗9熒光定量pcr在臨床實驗室診斷中的應(yīng)用(完整版)
【正文】 NA表達 關(guān)于結(jié)核桿菌等 5項檢測的 具體應(yīng)用 概 述 用于臨床 PCR常規(guī)檢測三條件： ? SDA批準使用的試劑盒 ?國家批準符合要求的實驗室 ?經(jīng)行政部門同意并培訓(xùn)后持證上崗 ? 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 靶序列來源 : a. 單抗檢出的 TB抗原旦白編碼基因 b. TB特異性核酸片段克隆 c. 插 入序列 實驗設(shè)計特點 ?結(jié)核的 PCR臨床主要應(yīng)用 臨床評價 ? 沙眼衣原體 (Ct) 實驗設(shè)計特點 靶及引物選擇 ?外膜蛋白基因 (MOMPOMPI) ? 隱蔽性基因質(zhì)粒拷貝 ? 16srRNA基 因 臨床評價 ?細胞培養(yǎng) McCoy. Hela229金標準 ? ELA法 ? PCR法 .專家希望 此法為新金標 ? HBVDNA 臨床評價： 般臨床靠免疫標志 ， 但無法明確時可測 、阿德福韋及干擾素治療監(jiān)測 ? HCVRNA 實驗室設(shè)計特點 ? 需擴增二次 ? 低溫啟動 UDG系統(tǒng) RNA不穩(wěn)定性 注意事項 防止 RNase污染 杜絕溶血 臨床評估： ? 定性用于診斷 (只憑抗 HCV，無法 決定病毒存在狀況） ? 定量用于治療監(jiān)測 ? 基因分型 ? HLA 方法 : 免疫學(xué) 分子生物學(xué)： PCR SSCP RFLP 基因芯片 I 類 (A,B,C) 與疾病發(fā)生頻率有關(guān) II 類 (DR,DQ,DP) 等 移植配型 PCR 在臨床檢驗應(yīng)用中的局限性 差之毫厘，失之千里 ，影響因素多，嚴格遵守操作規(guī)范 ：實驗條件設(shè)計欠佳；擴增產(chǎn)物或核酸提取中標 本間的交叉污染 ：在臨床標本核酸提取過程中 ,靶核酸的丟失； 提取試劑 (如有機溶劑等 )的殘留、標本中抑制 物的去除不徹底；擴增儀孔間溫度差異 質(zhì)量保證措施 ?防止假陽性：實驗室首先要有嚴格的分區(qū)；使用帶濾心的吸頭；陰性質(zhì)控樣本應(yīng)與臨床標本一起處理 ,并適當(dāng)散在分布于不同標本之間 ?防止假陰性：設(shè)立“內(nèi)標” ?通過認證的參考品 謝 謝！ 晚 安！ 。熒光探針定量 PCR技術(shù)在臨床 實驗室診斷中的應(yīng)用 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科 胥飚 38,200,000 (PCR) 8,800,000 (周杰倫） 內(nèi) 容 提 要 一、基因診斷技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的地位 二、熒光探針定量 PCR的技術(shù)特點 三、熒光探針定量 PCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 臨床實驗醫(yī)學(xué)發(fā)展 三個時代 標志技術(shù) 性質(zhì) 生化診斷時代 生化分析 表象 免疫學(xué)診斷
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