選修課臨床檢驗(yàn)9熒光定量pcr在臨床實(shí)驗(yàn)室診斷中的應(yīng)用(更新版)
【正文】 時(shí)代 酶免、放免 表象 分子 (基因 )診斷時(shí)代 基因體外擴(kuò)增 (PCR) 本質(zhì) 基因診斷技術(shù)的發(fā)展及在臨床診斷中的地位 基因診斷（分子診斷）：以核酸作為診斷的物質(zhì)基礎(chǔ) 主要包括： 遺傳性疾病 有遺傳趨向疾病的連鎖分析 疾病及腫瘤易感基因的分析 病原體的檢測(cè) 親子鑒定和個(gè)人認(rèn)定 人類基因組計(jì)劃（ HGP）與基因診斷 基因診斷技術(shù)： PCR技術(shù)為其標(biāo)志性技術(shù) 聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR） PCR： Polymerase Chain Reaction 基因體外擴(kuò)增技術(shù) Saiki PK 等 1985年 Science 230： 1350 Mullis K 1993年 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng) PCR循環(huán)次數(shù)與 DNA產(chǎn)量關(guān)系 循環(huán)次數(shù) DNA的鏈數(shù) 1 222 2 2 232 6 3 242 14 10 2112 2046 15 2162 65534 20 2212 2097150 25 2262 67,108,864 30 2312 2,147,483,646 熒光探針定量 PCR的技術(shù)特點(diǎn) 第一代 PCR技術(shù)：變性、退火、延伸 結(jié)果判斷：電泳 缺點(diǎn)：假陽(yáng)性（污染）、 假陰性（靈敏度低） 定性檢測(cè) 第二代 PCR技術(shù)：常規(guī) PCR+探針 例如：熒光探針 PCR技術(shù) PCRELISA ? ? 熒光探針定量 PCR技術(shù)的 原理 及過(guò)程 分 子 學(xué) 基 礎(chǔ)：常規(guī) PCR+熒光探針（ TaqMan熒光探針 ) 酶 學(xué) 基 礎(chǔ)： Taq酶的 5’ 3’外切核酸酶活性 熒光化學(xué)基礎(chǔ)：熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)標(biāo)記探針 熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理 (FRET ) Ct值 ： C代表 Cycle， t代表 threshold， 其 含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá) 設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)
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