專題1基因工程12基因工程的基本操作程序修改-展示頁(yè)
2024-09-26 20:28本頁(yè)面
【正文】 復(fù)制 ___________的核酸合成技術(shù) ③條件： _______________________、 _______________、 ___________ 、 ___________ 、 ___________. 等 ② 原理： __________ ④ 方式：以 _____方式擴(kuò)增，即 ____（ n為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤ 結(jié)果： 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 雙鏈 DNA復(fù)制 四種脫氧核苷酸 一對(duì)引物 DNA聚合酶 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增 要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提條件） 溫度 ⑥ 過(guò)程： a、 DNA變性 （ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， _____斷裂，形成 ___________ b、退火 （ 復(fù)性 55℃ 60℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與 DNA模板結(jié)合，形成局部 ________。 ① 不能轉(zhuǎn)錄為信使 RNA，不能 編碼蛋白質(zhì)。 基因組文庫(kù)和部分基因組文庫(kù) (cDNA文庫(kù) )比較 原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 啟動(dòng)子 終止子 啟動(dòng)子： 一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片斷， 位于基因的首端， 它是 RNA聚合酶 識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。 常用的方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法（ DNA合成儀）。 ，如從基因組文庫(kù)或 cDNA文庫(kù)中獲取。 含有目的基因的表達(dá)載體只有進(jìn)入受體細(xì)胞，并且維持穩(wěn)定和表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。 第一步：目的基因的獲取 第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建 第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 第四步：目的基因的檢測(cè)與鑒定 有了目的基因，才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。 單獨(dú)的 DNA片段 —— 目的基因，是不能穩(wěn)定遺傳的。 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以 穩(wěn)定 維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過(guò)檢測(cè)與鑒定才能知道。 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 通過(guò) PCR技術(shù)可對(duì)已獲取的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，以獲取大量的目的基因。 一、目的基因的獲取 （一）目的基因： （二）獲取方法： 主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因。 終止子： 位于基因的尾端的一段特殊的 DNA片斷，能終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄。 ：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使 RNA，能 編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) （含啟動(dòng)子和終止子等） 原核細(xì)胞的 基因結(jié)構(gòu) ② 有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核 苷酸序列 .包括啟動(dòng)子和終止子 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 啟動(dòng)子 終止子 真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 與 RNA聚合酶 結(jié)合位點(diǎn) 內(nèi)含子 外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子 啟動(dòng)子 終止子 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 內(nèi)
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