12基因工程的基本操作程序1-展示頁
2025-03-14 12:11本頁面
【正文】 信息表達(dá)的核 苷酸序列 ，在該序列中， 最重要的是位于編碼區(qū)上 游的 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 。 終止子 ：是位于基因 尾端 的一段特殊的 DNA片斷，能 終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄。 轉(zhuǎn)錄完畢后， RNA鏈釋放出來，緊接著 RNA聚合酶也從 DNA模板鏈上脫落下來。 （ 2） cDNA構(gòu)建方法 反轉(zhuǎn)錄法 基因組 DNA文庫 cDNA文庫 （ 3）基因組 DNA文庫與 cDNA文庫的構(gòu)建 補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 啟動(dòng)子 終止子 RNA聚合酶能夠識(shí)別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。 （一）從基因文庫中獲取目的基因 ？ 基因文庫 基因組文庫 部分基因文庫 （如 cDNA文庫） 將含有某種生物 不同基因的許多 DNA片斷 ，導(dǎo)入到 受體菌的群體 中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。基因工程的基本操作程序 主要包括四個(gè)步驟： ? （ 1）目的基因的獲取 ? （ 2） ? （ 3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? （ 4）目的基因的檢測與鑒定 基因 表達(dá)載體 的構(gòu)建 一、目的基因的獲取 獲取方法： （ 1）從 基因文庫 中獲取目的基因； （ 2）利用 PCR技術(shù) 擴(kuò)增目的基因； （ 3）通過 DNA合成儀用化學(xué)方法直接 人工合成 。 目的基因：主要指的是編碼蛋白質(zhì)的 基因 ，也可以是一些具有 調(diào)控作用的因子 。 （ 1）基因組文庫的構(gòu)建模式圖 通過對(duì) 受體菌 的培養(yǎng)而儲(chǔ)存基因 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的 信使 RNA為模板，再 反轉(zhuǎn)錄酶 的催化下反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在 DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，即 cDNA，從而獲得所需的基因。 轉(zhuǎn)錄開始后， RNA聚合酶沿 DNA分子移動(dòng)，并以DNA分子的一條鏈為模板合成 RNA。 啟動(dòng)子 ： 位于基因 首端 的一段特殊的 DNA片斷，它是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng) 基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。 ①不能轉(zhuǎn)錄為信使 RNA，不能 編碼蛋白質(zhì)。 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 啟動(dòng)子 終止子 補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 與 RNA聚合酶 結(jié)合位點(diǎn) 內(nèi)含子 外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子 啟動(dòng)子 終止子 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 內(nèi)含子： 外顯子： 真核細(xì)胞的 基因結(jié)構(gòu) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列 內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列 ：有 調(diào)控作用的核苷酸序列 ， 包括位于編碼區(qū)上游的 RNA 聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 。 如：根
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