12基因工程的基本操作程序1(參考版)
2025-03-10 12:11本頁面
【正文】 ?目的基因的表達(dá)和檢測 轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入目的基因 DNA分子雜交 （ DNA和 DNA之間） 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA 分子雜交技術(shù) （ DNA和 mRNA之間） 目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì) 抗原 — 抗體雜交 歸納 : 基因工程的基本操作程序 1. 獲取目的基因 ? 從基因文庫 ? 利用 PCR ? 化學(xué)方法人工合成 2. 構(gòu)建基因表達(dá)載體 ? 目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? Ca2+處理 （微生物）、 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 （植物）、 顯微注射法 （動(dòng)物） 4. 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯 ? 個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定 演講完畢，謝謝觀看！ 。 若不能表達(dá)，要對抗蟲基因再進(jìn)行 修飾 。 （一）檢測 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) ①方法 : 分 子 雜 交 (mRNADNA) ① 方法 : 抗原 抗體雜交 ②過程 : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交 ,若出現(xiàn)雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆?，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加 DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。 ③轉(zhuǎn)化過程 : Ti質(zhì)粒 目的基因 構(gòu)建 表達(dá)載體 導(dǎo)入 植物細(xì)胞 插入 植物細(xì)胞染色體 DNA 表達(dá) 新性狀 轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌 基因槍法又稱 微彈轟擊法 ，是 利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力 ，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中 ，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? 常用的受體細(xì)胞： 有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。 ③ 啟動(dòng)子、終止子 對于目的基因表達(dá)必不可少。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu)。科學(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入 終止子 (抗蟲基因末端 )，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了抗蟲能力。 起初把蘇云金芽孢桿菌的 抗蟲基因 插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。 將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的 ______處， 再加入適量 ___________，形成了一個(gè)重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制酶 黏性末端或平末端 同一種限制酶 相同的黏性末端或平末端 切口 DNA連接酶 : 二、構(gòu)建 表達(dá) 載體 —— 核心 基因表達(dá)載體的目的 （ 1）使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在并可以 遺傳給下一代 ； （ 2）使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮 作用。 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1