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12-基因工程的基本操作程序-展示頁

2025-03-15 14:57本頁面
  

【正文】 堿基互補配對 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復制 細胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 目的基因的 mRNA 單鏈 DNA (cDNA) 雙鏈 DNA (即目的基因 ) 反轉(zhuǎn)錄 合成 1)反轉(zhuǎn)錄法: 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板,反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈 DNA,然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA,從而獲得所需的基因。 : 見課本 P9 提取某種生物的全部 DNA 用適當?shù)南拗泼盖? 一定大小的 DNA片段 將 DNA片段與載體連接 導入受體菌中儲存 基因組文庫 ( 1)直接分離法 (鳥槍法 ) 某種生物的單鏈 mRNA 單鏈互補 DNA 雙鏈 cDNA片段 導入受體菌中儲存 與載體連接 cDNA文庫 反(逆)轉(zhuǎn)錄酶 DNA聚合酶 反轉(zhuǎn)錄法: cDNA的合成流程圖解 基因組文庫和部分基因組文庫 (cDNA文庫 )比較 概念 : PCR全稱為 _______________,是一項 在生物 ____復制 ___________的核酸合成技術(shù) 聚合酶鏈式反應 體外 特定 DNA片段 原理: DNA復制 利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 四種脫氧核苷酸 (dNTP) 一對引物: 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶) 模板 DNA( 需含有目的基因 ) Mg2+(激活劑 ) 條件: 緩沖溶液 一對寡核苷酸序列:與目的基因的起始段互補 一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成引物 前提: 過程 高溫變性( 解旋為單鏈 ) 低溫退火( 引物與單鏈互補結(jié)合 ) 適溫延伸 ( 在 Taq酶的作用下合成 與模板互補的 DNA雙鏈 ) 重復循環(huán) 預變性( 增加 DNA變性的概率 ) 具體過程 PCR(多聚酶鏈式反應 ) ① 概念: PCR全稱為 _______________,是一項 在生物 ____復制 ___________的核酸合成技術(shù) ③條件: _______________________、 _______________、 ___________ 、 ②原理: __________ ④方式:以 _____方式擴增,即 ____( n為擴增循 環(huán)的次數(shù)) ⑤ 結(jié)果: 聚合酶鏈式反應 體外 特定 DNA片段 DNA復制 四種脫氧核苷酸 一對引物 DNA聚合酶 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增 要有一段已知目的基因的核苷酸序列(前提條件) ⑥ 過程: a、 DNA變性 ( 90℃ 95℃ ):雙鏈 DNA模板 在熱作用下, _____斷裂,形成 ___________ b、退火 ( 復性 55
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