sds-page檢測重組蛋白-展示頁
2025-07-16 12:04本頁面
【正文】 用于多肽分子量的分析，或用于變性蛋白的分離等。主要用于測定蛋白質(zhì)亞基的分子量。聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白質(zhì)最初是在玻璃管中進(jìn)行的，后來發(fā)展起來的垂直平板電泳一次最多可以容納20多個(gè)樣品，電泳過程中樣品所處的條件比較一致，樣品間可以進(jìn)行更好的比較，重復(fù)性也更好，所以垂直平板電泳目前應(yīng)用得最更為廣泛，常用于蛋白質(zhì)的分離和分子量的測定，以及DNA序列分析過程中的DNA片段的分離和鑒定。聚丙烯酰胺凝膠具有以下突出的優(yōu)點(diǎn)：（1）可以隨意控制膠濃度和交聯(lián)度，從而得到不同的有效孔徑，用于分離不同分子量的生物大分子；（2）能把分子篩作用和電荷效應(yīng)結(jié)合在同一方法中，達(dá)到更高的靈敏度：109~1012 mol/L；（3）由于聚丙烯酰胺凝膠是由CC鍵結(jié)合的酰胺多聚物，側(cè)鏈只有不活潑的酰胺基CONH2，沒有帶電的其他離子基團(tuán)，化學(xué)惰性好，電泳時(shí)不會產(chǎn)生“電滲”；（4）由于可以制得高純度的單體原料，因而電泳分離的重復(fù)性好；（5）透明度好，便于照相、掃描或復(fù)印。低濃度的凝膠具有較大的孔徑，如3%（V/V）的聚丙烯酰胺凝膠對蛋白質(zhì)沒有明顯的阻礙作用，可用于SDSPAGE的濃縮膠，也可以用于分離DNA。氧氣對自由基有清除的作用，在制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí)通常要進(jìn)行抽氣，或者用水或正丁醇隔絕氧氣。聚丙烯酰胺凝膠是由單體的丙烯酰胺（acrylamide）和甲叉雙丙烯酰胺（bisacrylamide）聚合而成，這一聚合過程需要有自由基催化完成。 SDSPAGE檢測重組蛋白一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑?掌握SDSPAGE的基本原理；② 掌握SDSPAGE的凝膠制備方法；③ 掌握蛋白質(zhì)的考馬斯亮藍(lán)染色法；④ 掌握測定重組蛋白分子量的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis），簡稱PAGE，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)。催化劑過硫酸銨（AP）可產(chǎn)生自由基，而加速劑四甲基乙二胺（TEMED）可催化過硫酸銨加速自由基的產(chǎn)生，這樣就可以形成丙烯酰胺長鏈，同時(shí)甲叉雙丙烯酰胺在不斷延長的丙烯酰胺鏈間形成甲叉鍵交聯(lián)，從而形成交聯(lián)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。聚丙烯酰胺凝膠的孔徑可以通過改變丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體的濃度來控制，丙烯酰胺的濃度可以在3~30%（V/V）之間。高濃度凝膠具有較小的孔徑，對蛋白質(zhì)有分子篩的作用，可以用于根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量進(jìn)行分離的電泳中，如10~20%（V/V）的凝膠常用于SDSPAGE的分離膠。機(jī)械強(qiáng)度好，有彈性，不容易破碎，便于操作和保存；（6）無紫外吸收，不需染色就可以用于紫外波長的凝膠掃描作定量分析；（7）還可以用作固定化酶的惰性載體。SDSPAGE十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）是根據(jù)SDS和還原劑將蛋白質(zhì)分子解聚后亞基的大小，在恒定pH（堿性）緩
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