基因工程重組蛋白的分離純化放映-展示頁(yè)
2024-09-07 09:26本頁(yè)面
【正文】 胞時(shí)必須根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成選擇合適的酶 .并確定相應(yīng)的使用次序，控制好溫度、 pH值和酶量。常用的酶有溶菌酶、葡聚糖酶、蛋白酶、甘露糖酶、糖昔酶、膚鏈內(nèi)切酶、殼多糖酶等。 ? 非機(jī)械破碎法包括酶溶法、化學(xué)滲透法、熱處理法、滲透壓沖擊法。 ? 機(jī)械破碎法是常用的方法，速度快，處理量較大，不會(huì)帶人其他化學(xué)物質(zhì)，但在處理過(guò)程中產(chǎn)生熱量，必要時(shí)要采取冷卻措施，以防止目的產(chǎn)物失活。在選擇處理技術(shù)，工藝和操作條件時(shí)，要確保去除有危險(xiǎn)的雜質(zhì)，保證產(chǎn)品質(zhì)量和作用安全以及生產(chǎn)過(guò)程的安全，藥品生產(chǎn)必須保證安全、無(wú)菌、病毒、熱原。 ⑦工藝和技術(shù)必須快速高效、收率高、易操作、對(duì)設(shè)備條件要求低、能耗低。 ⑤周期盡量短，因穩(wěn)定性差的產(chǎn)物隨工藝時(shí)間增加，收率、質(zhì)量會(huì)下降。 ③技術(shù)條件要溫和，溫度低， PH值適中，能保持目的產(chǎn)物的生物活性。必須明確嚴(yán)格控制的步驟和技術(shù)，以及允許的變化范圍。 三．蛋白質(zhì)分離純化 應(yīng)遵順 的原則 ①具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。 ? 包括允許雜質(zhì)種類(lèi)和最大允許含量，特殊雜質(zhì)種類(lèi)和最大允許量 。 2. 3初始物料的特點(diǎn) ①菌種類(lèi)型及其代謝特性，包括菌種表達(dá)方式 (是否以包含體形式 )、副產(chǎn)物種類(lèi)、產(chǎn)物類(lèi)似毒素、蛋白酶種類(lèi)、原材料和培養(yǎng)基的來(lái)源及其質(zhì)量； ②生產(chǎn)工藝和條件，包括滅菌方法和條件、生產(chǎn)方式 (連續(xù)、批式、半連續(xù) )、生產(chǎn)周期、生產(chǎn)能力、工藝控制條件、因素及方式等； ③初始物料的各種性質(zhì)，包括產(chǎn)物濃度、雜質(zhì)種類(lèi)、濃度變化、鹽的種類(lèi)、濃度、溶解度、 pH值、粘度等。的柱子結(jié)合 。⑷ .應(yīng)用面廣，往往是注射用，對(duì)其質(zhì)量、純度要求高，無(wú)菌、無(wú)病毒、無(wú)熱原。 ⑵ .目的產(chǎn)物一般是大分子物質(zhì)，穩(wěn)定性差，具有生物活性的物質(zhì)對(duì)pH值、溫度、金屬離子、有機(jī)溶劑等十分敏感，容易失活、變性； ⑶ .種類(lèi)繁多，包括有大、中、小分子，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單或復(fù)雜的有機(jī)化合物以及結(jié)構(gòu)復(fù)雜又性質(zhì)各異的生物活性物質(zhì)。 目錄 ? 一．獲得基因工程產(chǎn)品的特點(diǎn) ? 二．建立蛋白質(zhì)純化工藝的依據(jù) ? 三．蛋白質(zhì)分離純化應(yīng)遵順的原則 ? 四．分離純化的基本過(guò)程 ? 五．幾種主要蛋白質(zhì)分離純化的方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比 一．獲得基因工程產(chǎn)品的特點(diǎn) ⑴ 目的產(chǎn)物在初始物料中含量低，而且往往在細(xì)胞內(nèi)?；蚬こ讨亟M蛋白的分離純化 生物工程下游技術(shù) 第七組 馬夕堯 意義？？ ? 生物工程以基因工程為核心，主要產(chǎn)品為蛋白質(zhì)或多肽。通過(guò)多年的努力，我國(guó)基因工程“上游”已與國(guó)外差距縮小，但“下游”技術(shù)，尤其是蛋白質(zhì)純化處理與先進(jìn)國(guó)家相比， 仍有很大差距。含目的產(chǎn)物的初始物料組成復(fù)雜，除了目的產(chǎn)物外，還含有大量的細(xì)胞、代謝物、殘留培養(yǎng)基、無(wú)機(jī)鹽等，特別是產(chǎn)物降解酶、產(chǎn)物類(lèi)似物等對(duì)目的產(chǎn)物的分離影響很大。對(duì)這些大分子基因工程產(chǎn)品的純化缺乏必要的數(shù)據(jù)，似乎每種蛋白都有其獨(dú)自的純化方案，放大也往往憑經(jīng)驗(yàn)，不像抗生素等小分子物質(zhì)有很多數(shù)據(jù)可指導(dǎo)放大。 二．建立蛋白質(zhì)純化工藝的依據(jù) ? ①分子量大小，大的蛋白質(zhì)先過(guò)凝膠柱； ? ②分子形狀，球蛋白易擴(kuò)散人凝膠過(guò)濾柱填料顆粒的小孔內(nèi)，較遲洗脫出來(lái)； ? ③電荷與電荷分布，與離子交換緊密相關(guān)； ? ④疏水性，與疏水層析、反相高壓色譜有關(guān)； ? ⑤ .溶解度，影響因素有 pH值、離子強(qiáng)度、離子的性質(zhì)、濕度和溶劑極性等，可用于沉淀分離； ? ⑥密度，磷蛋白等密度大，可用密度梯度法分離； ? ⑦配體結(jié)合能力，用于親和層析； ? ⑧金屬結(jié)合能力，用于鰲合有金屬離子的親和柱； ? ⑨翻譯后修飾，如連有糖基的蛋白可用于含有外源凝集的親和柱，磷蛋白質(zhì)在某些糖基下能與鰲合有 FeZ39。 2. 2物料中雜質(zhì)的種類(lèi)和性質(zhì) ? 包括雜質(zhì)的種類(lèi)和含量、化學(xué)性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、相對(duì)分子量、電荷性及數(shù)量、生物
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