【正文】 0家族 功能 :識別和結合新合成的、部分折疊的新生肽鏈或正在穿膜的肽鏈 ,防止肽鏈錯誤聚集 ,有利于肽鏈的正確折疊 . 67 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 2 伴侶素 (chaperonins) E coli中包括 GroEL和 GroES家族 真核細胞同源物 HSP60和 HSP10 作用：為非自發(fā)折疊的蛋白質創(chuàng)造折疊的微環(huán)境． 作用特點 :形成桶狀結構 68 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 伴侶素 GroEL/GroES系統(tǒng)促進蛋白質折疊過程 69 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University (二 )折疊酶 功能 : 在肽鏈中催化錯配二硫鍵斷裂并形成 正確二硫鍵連接 . 谷胱甘肽 :鏈內 二硫鍵形成起著重要作用 GSH:還原性谷胱甘肽 GssG:氧化性谷胱甘肽 70 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University CH2SH CH2SH GSH CH2SSG CH2SH CH2S CH2S + GssG ２ GSH GSH 鏈內 二硫鍵形成機制 71 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 2. 肽酰脯氨酸順反異構酶 ? 多肽鏈中肽酰 脯氨酸間形成的肽鍵有順反兩種異構體，空間構象明顯差別 . ? 肽酰 脯氨酰順反異構酶可促進上述順反兩種異構體之間的轉換 . 72 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 第四節(jié) 蛋白質的性質 蛋白質是由氨基酸組成 ,因此蛋白質的性質與氨基酸相似 ,但由于蛋白質是由許多氨基酸通過肽鍵形成了大分子化合物 ,也就出現(xiàn)了一些新的性質 . 73 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 一 蛋白質的變性 (denaturation) 指蛋白質受物理或化學因素的影響 ,使蛋白 質分子原有的特定的空間構象發(fā)生改變 ,從 而導致蛋白質性質的改變以及生物活性的 喪失 .但一級結構未遭破壞 . ： ① 變性蛋白質主要標志是 生物學功能的喪失 ② 溶解度降低 ,易形成沉淀析出 ,粘度增加而擴散系數(shù)減小，結晶能力喪失 ,分子形狀改變 ,肽鏈松散 ,反應基團增加 ,易被酶消化 . 74 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 物理因素 : 加熱、紫外線、 X射線、超聲波等 . 化學因素 : 強酸、強堿、有機溶劑、蛋白變性 劑 (尿素、鹽酸胍 )、重金屬鹽等 . (renaturation) 除去變性因素后 ,有的變性蛋白質又可恢復其 天然構象和生物活性 ,這一現(xiàn)象稱為蛋白質的 復性 75 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 蛋白質的一級結構決定高級結構 76 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 二 蛋白質的膠體性質 蛋白質分子顆粒大小 1100nm之間 ,屬膠體顆粒范圍 ,在溶 液中能形成穩(wěn)定的膠體 ,具有膠體溶液的典型性質如布郎 運動、丁達爾現(xiàn)象、不能透過半透膜、具有吸附能力等 . 蛋白質的親水膠體溶液相當穩(wěn)定： ,使水分子定 向排列在它的周圍 ,形成 “ 水化層 ” . 同種電荷 , 同種電荷相斥 ,使蛋白質分子保持一定 的距離而不聚合 . 細胞質 ,分離純化 + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質 77 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 三 蛋白質的兩性電離與等電點 在某一 pH值溶液中 ,蛋白質酸性基團和堿性基團 的解離程度相當 ,蛋白質分子所帶正負電荷相等 , 凈電荷為零 .此時溶液的 pH值稱為蛋白質的等電 點 (isoelectric point,pI). 蛋白質分離純化 78 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 四 蛋白質的沉淀反應 (precipitation) 當破壞了維持蛋白質膠體穩(wěn)定的因素甚至蛋白 質的構象時 ,蛋白質就會從溶液中析出 ,這種現(xiàn) 象稱為蛋白質的沉淀 . 方法 : (1) 鹽析法 (salting out) 向蛋白質溶液中加入大量中性鹽 低濃度中性鹽： 鹽溶 作用 高濃度中性鹽： 鹽析 作用 79 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 常用的中性鹽 ：硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等 作用原理 :鹽離子與水親和力極強 ,奪去蛋白質的水化層 ,減少分子間靜電斥力 特點 ：不破壞蛋白質的構象 ,蛋白質不發(fā)生變性 分段鹽析 ：調節(jié)鹽濃度 ,可使混合蛋白質溶液中 的幾種蛋白質分段析出 . 如 血清球蛋白 (50硫酸銨飽和度 ) 清蛋白 (飽和硫酸銨 ) 80 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University (2)有機溶劑沉淀法 原理 :使蛋白質脫去水化層 ,又能降低溶液 的介電常數(shù)使蛋白質表面電荷減少 ,導致白 質分子聚集而沉淀 . 常用有機溶劑 :甲醇、乙醇、丙酮 缺點： 常會使蛋白質變性 注意事項 :低溫下操作 ,盡量縮短處理時間 81 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University (3)重金屬鹽沉淀法 原理 :重金屬離子如 Hg2+、 Ag+、 Pb2+等帶有正 電荷 ,能與蛋白質分子中帶負電基團結合 ,生 成不溶性的重金屬蛋白鹽而沉淀 . 若溶液 pH大于蛋白質的 pI,沉淀更易發(fā)生 缺點： 此法常使蛋白質變性失活 (4)加熱 : 變性導致沉淀 .等電點時效果最好 82 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University (5)生物堿試劑和某些酸類沉淀法 原理 :生物堿試劑 (如鞣酸、苦味酸、鎢酸等 ), 某些酸類 (三氯乙酸、磺酰水楊酸等 ),與帶正 電的蛋白質結合生成不溶性的鹽而沉淀 . 注意事項 :反應溶液的 pHpI,確保蛋白質以陽離子形式存在 缺點： 此法常使蛋白質變性失活 83 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 五 蛋白質的顏色反應 84 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 六 蛋白質的免疫學性質 (antigen,Ag):外源和非自身的能被免疫系統(tǒng) 識別并產生免疫應答的物質 . 免疫原性 (Immunogenicity):能刺激生物體產生免疫 應答并產生抗體或免疫淋巴細胞的特性 . 免疫反應性 (Specific reactivity):能與所產生免疫應 答產物進行結合并發(fā)生反應的能力 . 半抗原 (Hapten):不具免疫原性只具免疫反應性 的物質 . 85 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 抗原決定簇 (Determinant):是抗原引起 免疫應答和與抗體結合反應的基本結構 單位 . 常位于抗原分子的表面 ,由 38個氨基酸 構成 : 分為 86 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University (antibody,Ab):能與抗原特異性結合 ,并具免疫功能的球蛋白 . 免疫球蛋白 (immunoglobulin Ig)：具有抗體活性及和抗體結構類似的球蛋白家族 多克隆抗體 (polyclonal antibodies)：針對各種抗原決定簇的許多不同的抗體 . 單克隆抗體 (monoclonal antibody McAb)：針對單一抗原決定簇 87 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院 School Pharmacy of Yantai University 抗原抗體反應具有高度特異性 3 蛋白質免疫性的應用 疾病的免疫 預防 ,免疫 診斷 ,免疫 治療 免疫分析 :放射免疫分析 (RIA) 酶聯(lián)免疫分析 :(ELISA) 免疫分離純化 :免疫親和層析 88 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學藥學院