【正文】 分原代細(xì)胞和繼代細(xì)胞） 選擇依據(jù)： 1. 病毒的適應(yīng)性高、毒價(jià)高。 工序二 ： 營(yíng)養(yǎng)液配制 分細(xì)胞培養(yǎng)用生長(zhǎng)液（含 5%~10%血清）和病毒培殖用的維持液（ 2%~5%血清），不同細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)液不同，但內(nèi)均含多種 氨基酸 、 維生素 和一些有機(jī)物、無(wú)機(jī)物，并有商品粉劑出售 。指定部門提供。 凍干苗：按比例加入保護(hù)劑（ 5%蔗糖脫脂乳）、濾過(guò)、加青鏈霉素、分裝、凍干。 2．培養(yǎng) 10 3． 收獲病毒 工序四 ： 配苗 收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)合格后配苗。受精卵從孵育至培養(yǎng)全過(guò)程應(yīng)保持無(wú)菌，接種日齡視病毒而定。 2. 弱毒組織疫苗：無(wú) 菌取組織、稱重、剪碎、加保護(hù)劑，過(guò)濾、稀釋，檢查（檢菌、毒價(jià)）、鑒定、分裝、凍干。 工序三 ： 觀察與收獲 根據(jù)觀察征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動(dòng)物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒高器官組織。必須檢查合格后使用。 3．品種、年令和體重合乎要求。悉生動(dòng)物（ GN）要求在無(wú)菌動(dòng)物體上植入一種或數(shù)種已 知的微生物。無(wú)特定病原體動(dòng)物（ SPF）要求在 CL 基礎(chǔ)上還須不帶有干擾實(shí)驗(yàn)的微生物。 普通動(dòng)物（ CV）要求必須不帶有人獸共患病原體及體外寄生蟲。 Ⅲ級(jí)及Ⅱ級(jí) 動(dòng)物的要求較高也較貴，只宜用于特殊目的和要求的實(shí)驗(yàn)。 Ⅲ級(jí)：即所謂無(wú)特定病原體（ Specific Pathogen free,SPF）動(dòng)物，除Ⅱ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外，動(dòng)物為部腹產(chǎn)或子宮切除產(chǎn)，均按純系要求繁殖，在隔離器內(nèi)或?qū)恿魇覂?nèi)飼養(yǎng)，只有一些不致病的細(xì)菌叢，沒(méi)有各種致病的病原體。 1980 年 10 月在北京召開醫(yī)學(xué)科研存設(shè)計(jì)座談會(huì)，有 30 多位國(guó)內(nèi)著名專家教授參加，根據(jù)我國(guó)具體條件，這次會(huì)議對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行了分級(jí)，列舉如下： Ⅰ級(jí)：用于教學(xué)示教的動(dòng)物，應(yīng)沒(méi)有能傳染給人的疾病，如結(jié)核、假結(jié)核、痢疾、傷寒沙門氏菌感染、出血性黃疸螺旋體病、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)腦膜炎病毒感染，皮膚霉菌病，體外寄生蟲病等。 國(guó) 外將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為五級(jí)和四級(jí)，以用于不同的實(shí)驗(yàn)。鼠應(yīng)排除肺炎病毒，沙門氏菌和鏈球菌，地鼠不應(yīng)有蟯蟲。 普通動(dòng)物（ Conventioal animals）是未經(jīng)積極的微生物學(xué)控制，普遍地飼養(yǎng)在開放衛(wèi)生環(huán)境里的動(dòng)物。墊料、飼料、用具等均應(yīng)經(jīng)過(guò)高壓消毒。 SPF 動(dòng)物的祖先是無(wú)菌動(dòng)物，按理來(lái)說(shuō)，無(wú)菌動(dòng)物的子宮內(nèi)和卵中應(yīng)該是無(wú)菌的，然而，有些病毒實(shí)際上是通過(guò)親代傳給胎兒的，因此，在作出無(wú)菌動(dòng)物和 SPF 動(dòng)物之前，必須充分考慮這個(gè)問(wèn)題。故一般大多先培育出無(wú)菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物后，再把其轉(zhuǎn)移到有封閉系統(tǒng)（ Barrier System）的設(shè)施中飼育繁殖。但非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的，故其實(shí)際上就是指無(wú)傳染病的健康動(dòng)物。例如，人工投給的微生物，除可在飲水中增殖外，還能在隔離器內(nèi)放出大量的氨氣。悉生動(dòng)物一般分為單菌（ Monoxenie）、雙菌（ Dixenie）、三菌（ Trixenie），或多菌（ Polyxenie）動(dòng)物。此種動(dòng)物原是無(wú)菌動(dòng)物，系人為的將指定微生物叢投給其體內(nèi)，例如使大腸桿菌定居在無(wú)菌小鼠體內(nèi)，在進(jìn)行微生物檢查時(shí)，僅能檢出大腸桿菌。另外，象禽類、魚類、昆蟲類，因是在卵中無(wú)菌的前提下進(jìn)行的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入無(wú)菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動(dòng)物一般在在出生后能自力采食，故較易育成。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養(yǎng)較為方便。此種動(dòng)物在自然界中并不存在，必須用人為的方法培育出來(lái)。 目前 ,通過(guò)微生物學(xué)的監(jiān)察手段 ,按對(duì)微生物控制的凈化程度 ,把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物區(qū)分為無(wú)菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物和特殊病原體動(dòng)物和清潔動(dòng)物四類。灌封后的安 瓿 再經(jīng)過(guò)滅菌、檢漏、異物檢查，最后外包裝成整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程。物流路線的一條線是原輔料，物料經(jīng)過(guò)外清處理，進(jìn)行濃配、稀配；另一條線是 安 瓿 瓶， 安 瓿 經(jīng)過(guò)外清處理后，進(jìn)入洗灌封聯(lián)動(dòng)線清洗、烘干。 生產(chǎn)區(qū)要嚴(yán)格按照生產(chǎn)工藝流程布置，各個(gè)級(jí)別相同的生產(chǎn)區(qū)相對(duì)集中，潔凈級(jí)別不同的房間相互聯(lián)系中設(shè)立傳遞窗或緩沖間，使物料傳遞路線GMP 濕件 硬件 軟件 人員 廠房設(shè)施、 設(shè)備 組織、制度、工藝、操、 衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、記錄、教育等。簡(jiǎn)要的說(shuō)， GMP 要求食品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備良好的生產(chǎn)設(shè)備，合理的生產(chǎn)過(guò)程，完善的質(zhì)量管理和嚴(yán)格的檢測(cè)系統(tǒng)，確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量（包括食品安全衛(wèi)生）符合法規(guī)要求 。 注： “GMP”是英文 Good Manufacturing Practice 的縮寫，中文的意思是 “良好作業(yè)規(guī)范 ”，或是 “優(yōu)良制造標(biāo)準(zhǔn) ”，是一種特別注重在生產(chǎn)過(guò)程中實(shí)施對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生安全的自主性管理制 度。如工藝無(wú)特殊要求，一般潔凈區(qū)溫度為 18 ~ 26℃，相對(duì)濕度為 45％ ~65％。一般生產(chǎn)區(qū)包括 安 瓿 的洗烘、工作服的洗滌等； 1 萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)包括稀配、灌溉，且灌封機(jī)自帶局部 100 級(jí)層流。其中，禽類活疫苗生產(chǎn)完全實(shí)現(xiàn) SPF 化。不過(guò)，與滅活菌疫苗相同，不具持續(xù)力，所以必須經(jīng)常追加接種。接種類毒素的話，血中可制造某種物質(zhì)，使菌中的毒素?zé)o毒化，可借此預(yù)防疾病。滅活菌疫苗無(wú)法像活疫苗一樣在體內(nèi)增殖，所以必須經(jīng)常追加接種，以強(qiáng)化免疫。如百日咳、乙型腦炎、流行感冒等疫苗皆是。免疫力長(zhǎng)久持續(xù)，所以不用進(jìn)行數(shù)次追加免疫。如小兒麻痹、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹 等疫苗皆是。 1) 疫苗 的 概念及 分類： a) 疫苗 概念： 泛指所有用減毒或殺死的病原生物 (細(xì)菌、 病毒、立克次體等 )或其抗原性物質(zhì)所制成，用于預(yù)防接種的生物制品 。按照那里工作人員的安排，我們先參觀了他們的微機(jī)控制室（圖 1），在那里我們都特別認(rèn)真地聽著益康工作人員給我們介紹他們公司 的現(xiàn)狀 、一些疫苗的生產(chǎn)流程、 實(shí)驗(yàn)室的潔凈程度 以及不同工作車間都是做什么的等。 公司的經(jīng)營(yíng)宗旨是：以科技為先導(dǎo)，以質(zhì)量求生存，以管理求發(fā) 展，力促最新科技成果轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力，竭誠(chéng)為廣大用戶服務(wù) 。現(xiàn)已推出新 支 減 流、新 支 減、 SPF 系列產(chǎn)品等。 企業(yè)現(xiàn)有員工 414 人，其中各類專業(yè)技術(shù)人員 145 人，其中具有研究員技術(shù)職稱者 5 人，副研究員技術(shù)職稱者 11 人，中級(jí)技術(shù)職稱者 53 人。 公司擁有 12 萬(wàn)平方米的生物工業(yè)園區(qū)，園區(qū)內(nèi)建有 13000 余平方米的 GMP 生產(chǎn)車間 3 座，還有現(xiàn)代化的 SPF 雞舍 1 座及其他科研、檢驗(yàn)等設(shè)施。 2020 年獲得中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì) “感動(dòng)中國(guó)畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新領(lǐng)軍企業(yè) ”稱號(hào)， 2020 年被中國(guó)動(dòng)物保健品協(xié)會(huì)評(píng)為 “獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)十強(qiáng) ”。 5. 將理論知識(shí)與實(shí)踐操作相結(jié)合 。 3. 了解東北制藥 集團(tuán) VC 總 公司的發(fā)展歷史 。 實(shí)習(xí)目的： 1. 了解 遼寧 益康生物制品有限公司的 GMP 生產(chǎn)車間 。 實(shí)習(xí)讓我們了解到理論和實(shí)踐之間的差異 ， 找到了工廠大規(guī)模生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室小量操作的異同 。 1 目錄 第一部分 校外參觀實(shí)習(xí) ???????????????? 2 實(shí)習(xí)目的 ????????????????????? 2 實(shí)習(xí)地點(diǎn) ㈠ 遼寧益康生物制品有限公司 ??????? 2 一、 遼寧益康生物制品有限公司 簡(jiǎn)介 ????????? 2 二、 實(shí)習(xí)內(nèi)容 ????????????????? 3 三、 實(shí)習(xí)小結(jié) ????????????????????? 16 實(shí)習(xí)地點(diǎn) ㈡ 東北制藥廠 VC 總公司 ?????????? 16 一、 吳春江老師向我們介紹 東北制藥廠 ?????????? 16 二、 聽工作人員給我們講解東藥 VC 的生 產(chǎn)流程?????? 17 三、 吳老師給我們普及 VC 知識(shí)????????????? 21 四、 參觀生產(chǎn)車間??????????????????? 24 五、 實(shí)習(xí)心得????????????????????? 24 第二部分 校內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵酸奶 ???????????? ? 26 一、 實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò) ?????????????????? ? 26 二、 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ?????????????????? ? 28 第三部分 實(shí)習(xí)總結(jié) ?????????????????? 42 2 第一部分 校外參觀實(shí)習(xí)： 經(jīng)過(guò)大 學(xué)三年 的理論 性教育，使我們對(duì)生物制藥 以 及生物工程設(shè)備 這 兩 門學(xué)科有了理論上的大體認(rèn)識(shí)，在大三下 學(xué)期期末在舒老師和劉老師的帶領(lǐng)下， 我們?nèi)ミ|寧省益康生物制品有限公司和東北制藥集團(tuán)進(jìn)行參觀 實(shí)習(xí)。實(shí)習(xí)是在校大學(xué)生唯一 能夠 接觸工廠大規(guī)模生產(chǎn)的機(jī)會(huì) ,是學(xué)生走上社會(huì)的良好過(guò)渡 ， 走向工作崗位的入門之課 。 加深我們對(duì)所學(xué)知識(shí)的理解和消化 ， 同時(shí)也學(xué)習(xí)到 兩所 工廠的許多技術(shù)細(xì)節(jié) ， 掌握了生產(chǎn)的基本工藝原理 和流程。 2. 了解 遼寧益康生物制 品有限公司主要生產(chǎn)的疫苗和 生產(chǎn)流程 。 4. 學(xué)習(xí)東北制藥集團(tuán) VC 總公司生產(chǎn)維生素 C 的方法流程 。 實(shí)習(xí)地點(diǎn) ㈠ ： 遼寧益康生物制品有限公司 一、 遼寧益康生物制品有限公司 簡(jiǎn)介 ： 遼寧益康生物制品有限公司是國(guó)內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)動(dòng)物生物制品的骨干企業(yè)，是農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的禽流感滅活疫苗定點(diǎn)生產(chǎn)企業(yè)，是經(jīng)有關(guān)部門認(rèn)定的 “遼寧省高新技術(shù)企業(yè) ”。 2020年 “遼益牌 ”獲得 “遼寧省著名商標(biāo) ”。現(xiàn)可生產(chǎn)六大類 30 余個(gè)品種的動(dòng)物疫苗，基本滿足養(yǎng)殖業(yè)的防疫需求。近年來(lái)，企業(yè) 3 以市場(chǎng)為導(dǎo)向，不斷加大科研開發(fā)力度，與吉林大學(xué)、沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)等院校建立了長(zhǎng)期的產(chǎn)、學(xué)、研合 作關(guān)系，先后合作成功“仔豬大腸桿菌 K88ST1LTB 三價(jià)基因工程疫苗”、“仔豬紅?。é?β）雙價(jià)基因工程疫苗”等十余項(xiàng)新產(chǎn)品，逐步形成了開發(fā)一批、研制一批、儲(chǔ)備一批的新產(chǎn)品開發(fā)模式。 通過(guò)在內(nèi)部實(shí)行 ERP 管理，對(duì)外開通企業(yè)網(wǎng)站（ ），企業(yè)以嚴(yán)格的科學(xué)管理手段，強(qiáng)有力的科技創(chuàng)新能力，有針對(duì)性的市場(chǎng)營(yíng)銷策略，建立了一個(gè)高效、通暢的市場(chǎng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，使產(chǎn)品的市場(chǎng)占有率不斷提高。 二、 實(shí)習(xí)內(nèi)容： 早上 9 點(diǎn)左右，我們到達(dá)朝陽(yáng)益康生物制品有限公司。 圖 1 熱情的益康工作人員給我們講的最多的就是他們公司所生產(chǎn)的疫苗。 4 b) 疫苗可分為三類 ： i. 活菌疫苗 ：減毒活疫苗作為疫苗用。接種活疫苗的話，會(huì)發(fā)生輕微的感染，血中與細(xì)胞雙方的抵抗性會(huì)提高。 ii. 滅活菌疫苗 ：殺死病原體，只留下能夠產(chǎn)生免疫力的毒素作為疫苗。接種滅活菌疫苗，可在血中制造抗體，以殺死入侵的病原體。 iii. 類毒素 ：取出病 原體的毒素，加以削弱毒性而成為無(wú)毒化。白喉、破傷風(fēng)的疫苗即屬此類。 2) 遼寧益康生物制品有限公司 生產(chǎn)的主要產(chǎn)品 ： 該公司生產(chǎn)的主要產(chǎn)品有：禽流感滅活疫苗、政府采購(gòu)豬瘟活疫苗、禽類凍干活疫苗、豬類凍干活疫苗、禽類滅活疫苗、豬類滅活疫苗等，如山羊痘活疫苗、高效型豬瘟活疫苗，狂犬病活疫苗、豬瘟活疫苗，山羊痘活疫苗，小鵝瘟活疫苗，雞傳染性喉氣管炎活疫、雞痘活疫苗（鵪鶉化弱毒株）、雞馬立克氏病 火雞皰疹病毒活疫苗，雞傳染性支氣管炎活疫苗（ W93 株），雞新城疫滅活疫苗、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（ La Sota 株 + H）、鴨瘟活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力活疫苗、豬多殺性巴氏桿菌病活疫苗 (679230 株 ) ，豬丹毒活疫苗（ GC42株）、仔豬水腫病滅活疫苗等。 3) 制造疫苗的生廠車間要求 ： 首 先 ， 每 種 疫 苗 的 制 備 都 要 滿 足 以 下 生 產(chǎn) 車 間 的 要 求 ： 5 a) 按 照 GMP 的規(guī)定最終滅菌小容量注射劑生產(chǎn)環(huán)境分為三個(gè)區(qū)域 : 一般 生產(chǎn) 區(qū) 、 10 萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)、 1 萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)。潔凈級(jí)別高的區(qū)域相對(duì)于潔凈級(jí)別低 的區(qū)域要保持 5 ~10Pa 的正壓差。各工序需安裝紫外線燈。它是一套適用于制藥、食品等行業(yè)的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，要求企業(yè)從原料、人員、設(shè)施設(shè)備、生產(chǎn)過(guò)程、包裝運(yùn)輸、質(zhì)量控制等方面按國(guó)家有關(guān)法規(guī)達(dá)到衛(wèi)生質(zhì)量要求，形成一套可操作的作業(yè)規(guī)范幫助企業(yè)改善企業(yè)衛(wèi)生環(huán)境，及時(shí)發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)過(guò)程中存在的問(wèn)題，加以改善。 b) 車間設(shè)計(jì)要貫徹人、物流分開的原則 : 人員進(jìn)入各個(gè)級(jí)別的生產(chǎn)車間時(shí)，要先更衣，不同級(jí)別的生產(chǎn)區(qū)需有相應(yīng)級(jí)別的更衣凈化措施。 6 盡量短捷、順暢。兩條線匯聚于灌封工序。 圖 2 GMP 生產(chǎn)車間 4) 病毒性疫苗制造技術(shù) 的各工序要求 ： a) 病毒的組織苗制造 工序一 ： 動(dòng)物選擇 1． 清潔級(jí)（ Ⅱ 級(jí)）以上的等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或無(wú)規(guī)定人畜共患病原體的動(dòng)物。 ①． 無(wú)菌動(dòng)物（ Germ free animals）是指機(jī)體內(nèi)外均無(wú)任何寄生物（微生物和寄生蟲）的動(dòng)物。 7 其法：一般將臨產(chǎn)前的健康動(dòng)物用麻醉藥品或頸椎臼法處死后，立即浸泡在 37℃滅菌液中，送進(jìn)無(wú)菌室（或無(wú)菌隔離器），按無(wú)菌手術(shù)進(jìn)行剖腹，切除帶胎子宮（子宮內(nèi)首先應(yīng)無(wú)菌），將其 浸入消毒液里并輸送到另一隔離器中，切開子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍（電刀切斷）后，放隔離器內(nèi)人工喂乳或用其它品系的無(wú)菌母鼠作保姆供養(yǎng)。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。 ②．悉生動(dòng)物（ Cnotobiotes