【正文】 30 余個(gè)品種的動(dòng)物疫苗，基本滿足養(yǎng)殖業(yè)的防疫需求。 2. 了解 遼寧益康生物制 品有限公司主要生產(chǎn)的疫苗和 生產(chǎn)流程 。 實(shí)習(xí)讓我們了解到理論和實(shí)踐之間的差異 ， 找到了工廠大規(guī)模生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室小量操作的異同 。 2020 年獲得中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì) “感動(dòng)中國(guó)畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新領(lǐng)軍企業(yè) ”稱號(hào)， 2020 年被中國(guó)動(dòng)物保健品協(xié)會(huì)評(píng)為 “獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)十強(qiáng) ”。 公司的經(jīng)營(yíng)宗旨是：以科技為先導(dǎo)，以質(zhì)量求生存，以管理求發(fā) 展，力促最新科技成果轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力，竭誠(chéng)為廣大用戶服務(wù) 。免疫力長(zhǎng)久持續(xù)，所以不用進(jìn)行數(shù)次追加免疫。不過(guò)，與滅活菌疫苗相同，不具持續(xù)力，所以必須經(jīng)常追加接種。 注： “GMP”是英文 Good Manufacturing Practice 的縮寫，中文的意思是 “良好作業(yè)規(guī)范 ”，或是 “優(yōu)良制造標(biāo)準(zhǔn) ”，是一種特別注重在生產(chǎn)過(guò)程中實(shí)施對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生安全的自主性管理制 度。灌封后的安 瓿 再經(jīng)過(guò)滅菌、檢漏、異物檢查，最后外包裝成整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程。另外，象禽類、魚類、昆蟲(chóng)類，因是在卵中無(wú)菌的前提下進(jìn)行的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入無(wú)菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動(dòng)物一般在在出生后能自力采食，故較易育成。但非特定的微生物和寄生蟲(chóng)是允許存在的，故其實(shí)際上就是指無(wú)傳染病的健康動(dòng)物。 普通動(dòng)物（ Conventioal animals）是未經(jīng)積極的微生物學(xué)控制，普遍地飼養(yǎng)在開(kāi)放衛(wèi)生環(huán)境里的動(dòng)物。 Ⅲ級(jí)：即所謂無(wú)特定病原體（ Specific Pathogen free,SPF）動(dòng)物，除Ⅱ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外，動(dòng)物為部腹產(chǎn)或子宮切除產(chǎn)，均按純系要求繁殖，在隔離器內(nèi)或?qū)恿魇覂?nèi)飼養(yǎng)，只有一些不致病的細(xì)菌叢，沒(méi)有各種致病的病原體。悉生動(dòng)物（ GN）要求在無(wú)菌動(dòng)物體上植入一種或數(shù)種已 知的微生物。 2. 弱毒組織疫苗：無(wú) 菌取組織、稱重、剪碎、加保護(hù)劑，過(guò)濾、稀釋，檢查（檢菌、毒價(jià)）、鑒定、分裝、凍干。指定部門提供。常用細(xì)胞培養(yǎng)方法為靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。 5) 典型疫苗 的 生產(chǎn)工藝流程 根據(jù)以上總結(jié)的制造疫苗的各項(xiàng)操作步驟，益康員工給我們重點(diǎn)介紹了幾種疫苗的生產(chǎn)工藝流程。特別是2020 年中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第 202 號(hào)、 2020 年中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第 404 號(hào)和中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第 442 號(hào)頒布以來(lái) ,SPF 雞蛋和 SPF 雞的使用量明顯增加 (據(jù)不完全統(tǒng)計(jì) ,2020 年全國(guó)使用 SPF 雞為 28 348 只 ,2020 年約 73 000 只 ),正負(fù)壓 SPF 雞隔離器的數(shù)量也明顯增多 (2020 年為 96 臺(tái) ,2020 年為 1 232臺(tái) ),SPF 雞蛋的生產(chǎn)和銷售正向產(chǎn)業(yè)化、專業(yè)化邁進(jìn)。 b) 滴鼻點(diǎn)眼免疫 疫苗稀釋要用蒸餾水或生理鹽水，用量與配量相匹配。 在雞頭上為約 米左右噴霧，噴完后要最大限度地降低通風(fēng)換氣量，以保證氣霧免疫效果，同時(shí)也要防止通風(fēng)不良而造成 窒息死亡，一般噴霧后密閉雞舍 10~20分即可。 就這樣我們結(jié)束了為期半天的益康參觀實(shí)習(xí)， 七月六號(hào) 上午我們?nèi)チ松蜿?yáng)東北制藥廠。經(jīng)專家鑒定：東北制藥的萬(wàn)噸維生素 C 新工藝和工業(yè)化技術(shù)水平在發(fā)酵法生產(chǎn)維生素 C 領(lǐng) 域處于國(guó)際先進(jìn)水平，該工藝使維生素 C 總收率提高了近 25%、制造成本降低了 67%，實(shí)現(xiàn)了維生素 C 生產(chǎn)的規(guī)模生產(chǎn)效益。 ⑴ 發(fā)酵 ① . 第一步發(fā)酵 黑醋酸菌（ Acetobacter suboxydans）經(jīng)種子擴(kuò)大培養(yǎng)，接入發(fā)酵罐，種子和發(fā)酵培養(yǎng)基主要包括山梨醇、玉米漿、酵母膏、碳酸鈣等成份， pH ~。 ， L山梨糖生成 2酮基 L古龍酸的轉(zhuǎn)化率可達(dá) 70~85%。 生產(chǎn)過(guò)程中要注意三廢的處理： ? 母液回收、濃縮、結(jié)晶甩濾，提高收率 ? 廢鹽酸回收后可再用于第一次交換 萊氏法和兩步發(fā)酵法的工藝比較 （ 1）萊氏法工藝 ?葡萄糖、 高壓催化氫化、黑醋菌氧化、丙酮保護(hù)、次氯酸鈉氧化、鹽酸轉(zhuǎn)化、維生素 C ?優(yōu)點(diǎn) ? 生產(chǎn)工藝成熟、各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)先進(jìn)、生產(chǎn)技術(shù)水平較高、 ? 總收率達(dá) 65%、優(yōu)級(jí)品率 100% ?缺點(diǎn) ? 需要丙酮保護(hù)羥基、反應(yīng)步驟增多，連續(xù)操作有困難 ? 丙酮用量大，苯的毒性大 ? 勞動(dòng)保護(hù)強(qiáng)度大，并污染環(huán)境 （ 2）兩步發(fā)酵法 ?葡萄糖 高壓催化氫化 兩步微生物氧化 酸（堿）轉(zhuǎn)化 維生素 C ?優(yōu)點(diǎn) ? 生物氧化具有特異性，省去了保護(hù)和脫保護(hù)兩步 ? 革除了大量有機(jī)溶劑 ? 改善了勞動(dòng)條件和環(huán)境保護(hù)問(wèn)題 ? 革除了動(dòng)力攪拌，大大節(jié)約了能源 三、 吳老師給我們普及 VC 知識(shí) 維生素 C（ Vitamin C ， Ascorbic Acid）又叫 L抗壞血酸，是一種水溶性維生素。 2．壞血病。牙齦是軟組織，當(dāng)缺乏蛋白質(zhì)、鈣、 VC 時(shí)易產(chǎn)生牙齦萎縮、出血。豐富的膠原蛋白有助于防止癌細(xì)胞的擴(kuò)散； VC 的抗氧化作用可以抵御自由基對(duì)細(xì)胞的傷害防止細(xì)胞的變異；阻斷亞硝酸鹽和仲胺形成強(qiáng)致癌物亞硝胺。 酶是生化反應(yīng)的催化劑，有些酶需要有自由的琉基（ SH）才能保持活性。人體受到異常的刺激，如劇痛、寒冷、缺氧、精神強(qiáng)刺激，會(huì)引發(fā)抵御異常刺激的緊張狀態(tài)。工作人員告訴我們，綠色的標(biāo)志代表水，紅色的標(biāo)志代表酸堿，銀色的標(biāo)志代表蒸汽，黑色的標(biāo)志代表物料。 可以看出， VC 項(xiàng)目特點(diǎn)是直接參與國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)，當(dāng)中國(guó)的產(chǎn)量只有 2020 噸或 3000 噸時(shí)，外國(guó)企業(yè)還不害怕，因?yàn)槟窃?5 萬(wàn) — 6 萬(wàn)噸的國(guó)際市場(chǎng)中算不了什么。在 1998 年 1 月， VC車間開(kāi)始轉(zhuǎn)制，成立了“ VC 公司”，原來(lái)的 1300 人全部“下崗”，再由干部進(jìn)行選聘，最后上崗者為 805 人。 26 第二部分 校內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵酸奶： 一、 實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)： 第一天： 在實(shí)驗(yàn)室聽(tīng)舒楊老師講解 15L 發(fā)酵罐的原位滅菌和菌體發(fā)酵 實(shí)驗(yàn)，首先我們認(rèn)識(shí)了 15L 發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu)，以及各個(gè)結(jié)構(gòu)的用途和注意事項(xiàng)，以便我們做實(shí)驗(yàn)時(shí)能夠正確的鏈接管路。 圖 9 設(shè)定發(fā)酵參數(shù) 圖 10 取樣 圖 11 酸奶發(fā)酵中 28 圖 12 酸奶發(fā)酵中 二、 實(shí)驗(yàn)報(bào)告： 15L 發(fā)酵罐 中 試 實(shí)驗(yàn)及酸奶的制備 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解 15L 小型發(fā)酵罐及控制器的基本結(jié)構(gòu) 。小型發(fā)酵罐及大多數(shù)攪拌發(fā)酵罐通?？梢圆捎?316 型不銹鋼或相似材料。使用這類 型的發(fā)酵罐必須配備與之緊密配合的保護(hù)套，保護(hù)套的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮足以承受如果滅菌過(guò)程中發(fā)酵罐爆炸所產(chǎn)生的飛濺的玻璃碎片。采用實(shí)罐滅菌比發(fā)酵罐空消、 培養(yǎng)基分開(kāi)滅菌機(jī)培養(yǎng)基滅菌后再加入發(fā)酵罐中操作簡(jiǎn)單可靠，染菌的概率更小。無(wú)論是采用高壓蒸汽滅菌器滅菌還是蒸汽原位滅菌都應(yīng)遵守這個(gè)原則。容器的直徑越大，溫度滯后效應(yīng)越明顯，所以容器中間的溫度與高壓蒸汽滅菌器的顯示溫度有相當(dāng)大的區(qū)別。蒸汽噴射的溫度低，則由于冷凝造成的體積越多，尤其在低于 100℃時(shí)，一般允許培養(yǎng)基體積增加的范圍在 5%10%之間。在一些情況下，空罐滅菌被認(rèn)為是進(jìn)行最后清洗的理想方式，尤其是對(duì)原位滅菌。 總之，無(wú)論是在高壓蒸汽滅菌器內(nèi)滅菌還是在蒸汽原位滅菌，所有與發(fā)酵罐連接的管路都必須是密閉的：系統(tǒng)中的管路如果是在高壓蒸汽滅菌器中滅菌，則每個(gè)子管都要兩端密閉，一端靠近發(fā)酵罐，一段靠近輔助器。 32 發(fā)酵罐在高壓蒸汽滅菌器中冷卻時(shí)很少去控制它的壓力，但是冷卻的速率不能太快，以免造成發(fā)酵罐內(nèi)的液體溢出，應(yīng)盡量避免滅菌器內(nèi)壓力的突然下降，另一方面，也要防止高壓蒸汽滅菌器中形成真空。 穩(wěn)定劑：為防止產(chǎn)品出現(xiàn)分層或沉淀現(xiàn)象，保持產(chǎn)品的外觀性能而添加到食品中的添加物 稱為穩(wěn)定劑。影響乳酸菌生長(zhǎng)增值的因素主要為環(huán)境，由于乳酸菌是厭氧菌，因此在混料過(guò)程中空氣的過(guò)多混入或在添加菌種室攪拌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)均會(huì)影響乳酸菌的正常生長(zhǎng)增值，從而影響乳酸成品的質(zhì)量。 ⑸ 將溶氧電極裝入 N11 口并用鋁箔紙包裹電極上端口，防止因電纜插口受潮導(dǎo)致電極故障。 ⑷ 長(zhǎng)期停機(jī)后或首次使用應(yīng)打開(kāi)水泵電動(dòng)機(jī)后 蓋，用手撥動(dòng)冷卻風(fēng)扇葉輪，水泵應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)靈活。 ⑾ 發(fā)生器正常工作的壓力范圍為 ~、當(dāng)壓力超出上述范圍時(shí)可調(diào)整壓力控制器的旋鈕。 2. 用保護(hù)罩蓋住發(fā)酵罐并用傾倒螺釘鎖緊法蘭，開(kāi)保護(hù)罩頂部排氣閥 V4。 9. 當(dāng)溫度降至 100℃一下，緩緩開(kāi)排氣閥 V4（排氣過(guò)大易損壞排氣過(guò)濾器） ，使保護(hù)罩頂部的壓力表指示為零（保護(hù)罩內(nèi)無(wú)壓力），移去保護(hù)罩。 42℃進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng) 68h。 ⑶ 開(kāi) J J3 排出取樣管內(nèi)殘料 。 五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與分析 整理發(fā)酵過(guò)程中所測(cè)的各 種 數(shù)據(jù)資料。 此時(shí)的 pH 為剛開(kāi)始發(fā)酵時(shí)的 pH 值，在發(fā)酵的過(guò)程中 pH 值會(huì)發(fā)生變化。 市售酸奶： 優(yōu)質(zhì)酸奶呈乳白色或淡黃色，凝結(jié)細(xì)膩，無(wú)氣泡。明膠是蛋白質(zhì)膠體，也就是肉皮凍中 的主要成分，可以被人體消化吸收。由于本實(shí)驗(yàn)所采用的牛奶、酸奶等原料都是市售的已經(jīng)滅過(guò)菌的材料，所以直接。它們對(duì)人體無(wú)任何危害，沒(méi)有熱量，還能發(fā)揮膳食纖維的有益作用。 通過(guò)了解 ，知道酸奶 的好壞與其 黏稠度沒(méi)有關(guān)系， 不同的酸奶的粘稠度不同主要有兩方面的原因： ① 牛奶中的蛋白質(zhì)有遇酸凝固的特性，在乳酸菌作用下漸漸變成均勻細(xì)膩而脆弱的凝凍。故可知培養(yǎng)液的 pH 值隨著發(fā)酵的進(jìn)行而逐漸下降，酸度逐漸增大，最后達(dá)到酸奶的 pH 值。溶氧： ％ ；空氣： 1/m；罐壓： MPa 。 37 ⑸ 發(fā)酵開(kāi)始 時(shí)計(jì)時(shí) ，每隔一個(gè)小時(shí)進(jìn)行一次取樣操作直到發(fā)酵結(jié)束為止。 ⑵ 將酒精棉球放在罐蓋補(bǔ)料口內(nèi)，然后將針頭插入并穿透密封蓋。注意滅菌完畢后，關(guān)閉蒸汽發(fā)生器并排去蒸汽發(fā)生器 36 內(nèi)殘氣。 4. 關(guān)進(jìn)水閥 W1，開(kāi)蒸汽冷凝水閥 V1，開(kāi)蒸汽發(fā)生器出口閥，緩緩 開(kāi)蒸汽閥S1，蒸汽進(jìn)入。 ⑿ 水箱內(nèi)不可缺水，應(yīng)經(jīng)常查看水箱水位。 ⑹ 在啟動(dòng)發(fā)生器同時(shí)觀察電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)向，從冷卻風(fēng)扇端看電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)向?yàn)轫槙r(shí)針，如發(fā)現(xiàn)電動(dòng)機(jī)反轉(zhuǎn)應(yīng)立即停機(jī)，調(diào)換電源插頭的線頭，再重新啟動(dòng)。 ⑺ 移去排氣冷凝器冷凝水進(jìn)出口地管。灌裝好的半成品在 4243℃的無(wú)菌恒溫室靜止培養(yǎng)至滴定酸度 80度終止發(fā)酵，冷卻至 1825℃。常用的穩(wěn)定劑有果膠和羧甲基纖維素鈉（ CMC）。建議在 80℃溫度以上時(shí)將發(fā)酵罐取出，放置在工作臺(tái)上，打開(kāi)溫度控制系統(tǒng)可使發(fā)酵罐迅速冷卻，而且可從空氣過(guò)濾器進(jìn)口通入無(wú)菌空氣以保持發(fā)酵罐內(nèi)處于正壓狀態(tài)，同時(shí)干燥空氣過(guò)濾器，這一點(diǎn)與原位滅菌是一致的。輔助容器都必須有空氣出口過(guò)濾器，如果這些設(shè)備 要在高壓蒸汽滅菌器中滅菌也要塞好包扎好，不要漏水。裝酸堿消泡劑以及其他添加物的容器如果是同時(shí)滅菌也應(yīng)該在此時(shí)接好。發(fā)酵罐原位滅菌通常是在有攪拌的情況下進(jìn)行，這樣可以提高熱傳遞的速度，減少溫度梯度，這一點(diǎn)比在高壓蒸汽滅菌器中的情況下要好得多。而空的聚丙烯容器只需 20min 就可以達(dá)到指定溫度。一個(gè)普遍的原則是，對(duì)于同一加熱方式的高壓滅菌器而言，高壓蒸汽滅菌器的體積越大，其升溫降溫速度越慢，所需時(shí)間越長(zhǎng)。例如，氣升式或泡罩式發(fā)酵罐使用蒸汽或高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，由于一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的壓力下進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌不是很徹底，此時(shí)宜將培養(yǎng)基在高壓滅菌器中進(jìn)行單獨(dú)滅菌后再加入到發(fā)酵罐中。一般小型不銹鋼發(fā)酵罐都用蒸汽原位滅菌。中型攪拌發(fā)酵罐的滅菌常用外置夾套和直接向罐中通入飽和蒸汽。 掌握制備酸奶 的操作過(guò)程 。 并對(duì)其 進(jìn)行 蒸汽 滅菌 （圖 8）。例如，降低原材料采購(gòu)成本一年可達(dá) 9000 萬(wàn)元；能源產(chǎn)值率增加了 30％，在產(chǎn)量增加的情況下，能源消耗沒(méi)有增加（在企業(yè)總的能源消耗中 VC 項(xiàng)目占一半）；修理費(fèi)大幅度降低；財(cái)務(wù)費(fèi)用也減少了 1700萬(wàn)元；管理費(fèi)用也從 6000 萬(wàn)元降低到 5000 萬(wàn)元。 1995 年 10月 18 日，就在東北制藥正式投產(chǎn)的當(dāng)天，羅氏公司宣布降價(jià)，每公斤價(jià)格從 12 25 美元降低到 7 美元，后來(lái)盯住中國(guó)企業(yè)的 價(jià)格一直降低到 5 美元。 從 1990 年到 1996 年短短 6 年的時(shí)間里，中國(guó) VC 生產(chǎn)能力增長(zhǎng)了好幾倍，出口雖也有一定的增長(zhǎng)，但沒(méi)有生產(chǎn)能力增長(zhǎng)得快，供過(guò)于求是必然的。腎上腺髓質(zhì)所分泌的腎上腺素和去甲腎上腺素是有酪氨酸轉(zhuǎn) 化而來(lái)，在次過(guò)程需要 VC 的參與。 從以上可知，只要 VC 充足，則 VC、谷胱甘肽、 SH 形成有力的抗氧化組合拳，清除自由基，阻止脂類過(guò)氧化及某些化學(xué)物質(zhì)的毒害作用，保護(hù)肝臟的解毒能力和細(xì)胞的正常代謝。 8．保護(hù)細(xì)胞、解毒，保護(hù)肝臟。可促進(jìn)膽固醇的排泄，防止膽固醇在動(dòng)脈內(nèi)壁沉積，甚至可以使沉積的粥樣斑塊溶解。微血管是所有血管中最細(xì)小的，管壁可能只有一個(gè)細(xì)胞的厚度，其強(qiáng)度、彈性是由負(fù)責(zé)連接細(xì)胞具有膠泥作用的膠原蛋白所決定。一旦吸收，就分布到體內(nèi)所有的水溶性結(jié)構(gòu)中，正常成人體內(nèi)的維生素 C 代謝活性池中約有 1500mg維生素 C， 22 最高儲(chǔ)存峰值為 3000mg 維生素 C。傳統(tǒng) 工藝是加熱沉淀法，發(fā)酵液經(jīng)靜置沉降后通過(guò) 732 氫型離子交換樹(shù)脂柱，調(diào)節(jié) pH 至蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，并加熱使蛋白質(zhì)凝固，然后用高速離心機(jī)分離出菌絲、蛋白和微粒，清液再次通過(guò)陽(yáng)離子交換柱，酸化為 2酮基 L古龍酸的水溶液，濃縮結(jié)晶后