【正文】 由于 15L 的發(fā)酵罐體積和質(zhì)量相對(duì)來說比較大， 所以采用原位滅菌，是將發(fā)酵罐裝置和培養(yǎng)基分開滅菌的。 所以不能從發(fā)酵所得酸奶的粘稠度鑒別其好壞，只能通過測(cè) pH 看酸度 來鑒別其好壞 。 ② 為了讓酸奶稠度增加，制作當(dāng)中可以加入多種增稠劑如明膠或膳食纖維類物質(zhì)。在酸度合適的時(shí)候，酸奶被轉(zhuǎn)移到 4 攝氏度下，乳酸菌的活動(dòng)停止下來。不過通過聞氣味也能大概知道我們發(fā)酵的酸奶還是挺好的。 測(cè)完 pH 后我們有對(duì) 16 號(hào)試管中的樣品進(jìn)行聞味，可以聞出酸奶的味道越來越濃了 。 在乳酸菌發(fā)酵的過程中并沒有通入無菌空氣， 因?yàn)?乳酸 菌是厭氧型微生物，故其 發(fā)酵不 用 通入氧 氣。 根據(jù)數(shù)據(jù)分析， 其實(shí)乳酸菌的發(fā)酵溫度應(yīng)該是 42 度左右，可是實(shí)際的發(fā)酵溫度已經(jīng)達(dá)到 59 度了，這是因?yàn)樵诎l(fā)酵的過程中攪拌等各種因素 的影響使 發(fā)酵的溫度沒有維持在穩(wěn)定的 42 度，由于乳酸菌對(duì)溫度的要求不是很高，所以 59度不影響其發(fā)酵效果。 將發(fā)酵液置于冰箱或冰水中數(shù)小時(shí)，待冷卻老熟后即成酸奶。 用洗耳球?qū)l(fā)酵液吸到干凈的試管中， 將取完后的樣品 封口后， 按順序 放置于冰箱中冷藏。 ⑵ 夾緊 J2，將出料管放入接料瓶，松開口，發(fā)酵液被壓入接料瓶（也可以通入減少排氣，增加罐壓來加快取樣速度）。 ⑶ 打開蠕動(dòng)泵手動(dòng)開關(guān)，使輸液管中充滿料液。冷至 40℃（不燙手）時(shí)，在火焰保護(hù)下，打開接種口，倒入市面上銷售的酸奶（約 600 克），然后旋緊接種蓋，移去火焰圈。 當(dāng)溫度達(dá)到工藝要求時(shí)，調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速，空氣流量，罐壓，標(biāo)定溶氧電極的斜率及修正 pH 電極的零點(diǎn)。 8. 調(diào)整閥 V3，排除夾套上法蘭溝槽內(nèi)的水。 5. 升溫過程中調(diào)整閥 V1，節(jié)約蒸汽提高效率。切記人走前關(guān)機(jī)。 ⒀ 為延長(zhǎng)發(fā)生器使用期限，防止電熱器結(jié)垢過熱燒毀及水位控制器結(jié)垢卡死 ,發(fā)生器宜采用軟水或純水如 條件所限，采用煮沸過的水亦可收到良好效果。 ⑽ 當(dāng)發(fā)生器水位降到低水位時(shí)，綠色供水指示燈亮，約 3 秒種即可到達(dá)正 35 常水位，綠色供水指示燈熄滅，水泵停止供水。 ⑺ 啟動(dòng)發(fā)生器時(shí)黃色指示燈亮，表示電源供電，綠色指示燈亮，表示水泵運(yùn)轉(zhuǎn)開始供水，此時(shí)應(yīng)注意觀察水位上升情況約 3 分鐘左右即可達(dá)到正常水位。 ⑶ 水箱加滿水，擰開水泵放氣螺塞，待有水從放氣螺塞溢出后再擰緊放氣螺塞。 (二 ) 實(shí)罐滅菌 1. 啟動(dòng)蒸汽發(fā)生器。 ⑷ 將 pH 電極裝入 N17 口，并用螺帽蓋緊電極上端口，防止因電纜插口受潮導(dǎo)致電極故障。 三、 實(shí)驗(yàn)材料 15BGZ 發(fā)酵罐 蒸汽發(fā)生裝置 空氣壓縮機(jī) 沈陽輝山牛奶 沈陽輝山酸奶 白糖 無水乙醇 四、 實(shí)驗(yàn)步驟 (一 ) 準(zhǔn)備 1. 按圖連接公用管線且必須保證是安全可靠的。 2. 發(fā)酵原理 乳糖在乳酸的作用下轉(zhuǎn)化成乳酸，隨著乳酸的形成，溶液的 pH 值逐漸達(dá)到酪蛋白的等電點(diǎn)（ pH 值為 ），使酪蛋白聚集沉降，從而形成半固體狀態(tài)的 33 凝膠體物質(zhì)。穩(wěn)定劑添加不當(dāng)，就難以發(fā)揮其作用，最常用的方法是，將穩(wěn)定劑和干物料（如白砂糖和淀粉）預(yù)先用 1： 51：10 的比例從干粉狀態(tài)充分混合均勻，然后再邊攪拌邊添加到液體物料中溶解。砂糖中的酵母和其他細(xì)菌是產(chǎn)品中微生物的來源之一，再將糖添加到產(chǎn)品中去的過程中應(yīng)有嚴(yán)密的措施來保證成品的細(xì)菌指標(biāo)，保證產(chǎn)品質(zhì)量。 （二）酸奶發(fā)酵 生產(chǎn)酸奶的材料 原材料：生產(chǎn)酸奶必須使用無抗生素的新鮮牛奶。所以在發(fā)酵罐原位滅菌時(shí)，通常在溫度剛降到100℃就讓無菌空氣由進(jìn)口過濾器進(jìn)入容器以保證發(fā)酵罐內(nèi)的壓力呈現(xiàn)正壓，而且可以干燥在冷卻時(shí)凝結(jié)了部分水蒸 氣的進(jìn)口和出口的空氣過濾器。電極在放入高壓蒸汽滅菌器中前，要用不吸水的棉花塞好并包扎好。所以，如果發(fā)酵罐要放入高壓蒸汽滅菌器中滅菌，要將出口過濾器的出口塞好蓋帽。否則，任何與發(fā)酵罐有關(guān)的容器的開口端都要分別包扎進(jìn)行滅菌。 首先，用洗滌劑將發(fā)酵罐和外圍設(shè)備徹底清洗。此外，發(fā)酵罐或容器的體積越 31 大，則加熱和冷卻的速率就越慢。體積變化是有益還是有害，取決于這些效果的平衡。有時(shí)由于蒸發(fā)會(huì)造成培養(yǎng)基體積的損失，盡管這個(gè)損失很小，但也需要進(jìn)行測(cè) 定。另外，器皿內(nèi)液體之間的熱傳遞也很慢，因?yàn)椴幌裾Ｇ闆r下進(jìn)行攪拌。滅菌的保持時(shí)間應(yīng)該從容器溫度最底部分（裝有培養(yǎng)基的容器通常是中部）達(dá)到所需要溫度開始計(jì)時(shí)，可以從排氣閥門中排除白色蒸汽為準(zhǔn)。所以無論采用哪種加熱滅菌方法，最好在最短時(shí)間內(nèi)將發(fā)酵罐或容器的溫度升至滅菌溫度，達(dá)到滅菌時(shí)間時(shí)間后再以最快的速度進(jìn)行冷卻。 也有人認(rèn)為將攪拌發(fā)酵罐空消比裝 滿培養(yǎng)基后進(jìn)行實(shí)消滅菌效果好。進(jìn)行實(shí)罐滅菌時(shí)，培養(yǎng)基的體積只能占發(fā)酵罐體積的 70%，即要預(yù)留 3%的空間這是因?yàn)橐苊馀囵B(yǎng)基沸 騰時(shí)液體進(jìn)入空氣出口過濾器而導(dǎo)致染菌。 小型發(fā)酵罐的輔助容器的滅菌也應(yīng)該考慮同樣的因素，這與復(fù)合結(jié)構(gòu)發(fā)酵罐，玻璃發(fā)酵罐和其它型號(hào)發(fā)酵罐類似。市面上也有可以用原位滅菌的復(fù)合結(jié)構(gòu)發(fā)酵罐。有些小型發(fā)酵罐常自身附帶有蒸汽發(fā)生器，另一些可能是在發(fā)酵罐和夾套中間有電加熱器。濕熱滅菌通常在120℃ / 的蒸汽壓力下進(jìn)行所以采用的玻璃容器要足夠牢固。 二、 實(shí)驗(yàn)原理 （一） 15L 小型發(fā)酵罐 用于實(shí)驗(yàn)室小型發(fā)酵罐的滅菌方法有兩種：高壓蒸汽滅菌器滅菌和原位滅菌法。每隔 一 小時(shí)用 吸 耳球?qū)l(fā)酵 液吸到 干凈的試管 中 ， 封口后 放入冰箱，留待最后 通過 測(cè)定 酸奶 PH 和聞氣味 ，來鑒別酸奶發(fā)酵的好壞，最后清洗發(fā)酵罐。最后預(yù)習(xí)了酸奶發(fā)酵的步驟，為第二天的發(fā)酵做好準(zhǔn)備。 看著東藥 VC 總公司的工作人員 都 那么辛勤的工作，自己也有那么一股勁兒想 踏踏實(shí)實(shí)走好每一步，讓我的最后一年學(xué)習(xí)時(shí)光變得更美好、更燦爛，最后祝愿東北制藥集團(tuán)能發(fā)展的越來越好。 實(shí)踐證明，當(dāng)時(shí)提高產(chǎn)量的決定是完 全正確的。 東北制 藥集團(tuán)能有今天的成就全靠當(dāng)初的改革轉(zhuǎn)制。這就使得東北制藥一年損失近 2 億元，連銀行利息都還不起。在這種情況下，國際與國內(nèi)企業(yè)都被迫進(jìn)行調(diào)整，國際上許多企業(yè)已經(jīng)不生產(chǎn)了，國內(nèi)也從 29 家減少到6 家，生產(chǎn)能力從 5 萬噸下降到 萬噸。 由于企業(yè)間競(jìng)相壓價(jià)，挑起了全世界范圍的“ VC 大戰(zhàn)”，打破了原來的世界 VC 格局。在該車間需要注意的就是不要隨便碰罐，和管子 。 最后老師給我們解答了一道我們一直很想知道的問題，就是為什么藥店 賣的 VC 產(chǎn)品價(jià)格會(huì)有那么大的差別？那是因?yàn)椴煌瑑r(jià)格的 VC 片 ， 其維生素 C 的含量是不同的，除雜程度 和流程 也是不同的 ，維生素 C 的含量越高，提純 效果越好 就越貴。 10．提高機(jī)體的應(yīng)急能力。 9．提高人體的免疫力。 VC 是一種強(qiáng)抗 氧化劑，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽還原為還原型谷胱甘肽，從而發(fā)揮抗氧化作用。在人的生命活動(dòng)中，保證細(xì)胞的完整性和代謝的正常進(jìn)行至關(guān)重要。 7．防癌。 。健康的牙床緊緊包住每一顆牙齒。當(dāng)體內(nèi) VC 不足，微血管容易破裂，血液流到鄰近組織。如骨骼、血管、韌帶等，決定了皮膚的彈性，保護(hù)大腦，并且有助于人體創(chuàng)傷的愈合。正常情況下，維生素 C 絕大部分在體內(nèi)經(jīng)代謝分解成草酸或與硫酸結(jié)合生成抗壞血酸 2硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出體外。 （ 1）工藝原理 ① L抗壞血酸易遭破壞 1) 溫度 2) 金屬離子 3) 空氣接觸 4) pH ② 易氧化 ③ 易分解 ④ 變質(zhì)的標(biāo)志：色澤變黃 （ 2）工藝過程 ① 配料比：粗維生素 C：蒸餾水：活性炭：晶種 = 1： ： ： ② 步驟 1) 粗維生素 C 真空干燥 2) 加蒸餾水?dāng)嚢枞芙? 3) 加活性炭，攪拌 510min，壓濾 4) 濾液加入結(jié)晶罐，再加入 50L 左右的乙醇，攪拌 5) 降溫、加晶種，結(jié)晶 6) 將晶體離心甩濾，冰乙醇洗滌 7) 甩濾、干燥器中干燥，得精制 VC ③ 整個(gè)過程耗時(shí) 7680h ④ 總收率 %（以山梨醇計(jì)） 此步驟的生產(chǎn)流程可簡(jiǎn)單寫為： 粗 VC ?????? ?? 加水、加活性炭、過濾 VC水溶液 ????? ?? 結(jié)晶、脫水、干燥 VC 粉末 ??? ?? 過篩、檢測(cè) 大顆粒 ?? ?? 包裝 成品 （ 3）注意事項(xiàng) ① 結(jié)晶時(shí)， 結(jié)晶罐中 最高溫度不得高于 45℃，最低不得低于 4℃，不能再 21 高溫下加晶種 ； ① 回旋干燥要嚴(yán)格控制循環(huán)水溫和時(shí)間，夏天循環(huán)水溫高，可用小冷凝器降溫 ； ② 壓濾時(shí)遇停電，應(yīng)立即關(guān)空壓閥保壓 。 此步驟的生產(chǎn)流程可簡(jiǎn)單寫為：發(fā)酵液 ???? ?? 高速離心機(jī)離心 上清液?????? ?? 超濾膜過濾（除蛋白） 古 龍 酸 鈉 溶液 ??? ?? 離子交換 古龍酸溶液??? ?? 除水、濃縮 結(jié)晶罐冷卻 ??? ?? 過濾干燥 古龍酸粉末（大約 19t） ⑶ 轉(zhuǎn)化： 2酮基 L古龍酸的化學(xué)轉(zhuǎn)化 將維生素 C 前體 2酮基 L古龍酸轉(zhuǎn)化為維生素 C，常采用堿轉(zhuǎn)化法。大、小菌經(jīng)二級(jí)種子擴(kuò)大培養(yǎng)，接入含有第一步發(fā)酵液的發(fā)酵罐中， 29~30 ℃下通入大量無菌空氣攪拌， 發(fā)酵罐容積 325 噸，料液 260 噸， 發(fā)酵時(shí)間 50 個(gè)小 時(shí)。D山梨醇轉(zhuǎn)化 L山梨糖 的生物轉(zhuǎn)化率達(dá) 98%以上。應(yīng)杜絕火源，以免氫氣發(fā)生爆炸 2) 廢鎳催化劑可壓制成塊，冶煉回收 3) 再生廢液中的鎳經(jīng)沉淀后可回收 4) 廢酸、廢堿經(jīng)中和后放入 下水道 2. 兩步發(fā)酵法 兩步發(fā)酵法 為東北制藥廠 VC 總公司生產(chǎn) VC 的方法，其 可以系統(tǒng)的分為：發(fā)酵、提取、轉(zhuǎn)化、精制四個(gè)步驟。該公司員工主要給我講解的是 VC 生物發(fā)酵法，即兩 步 發(fā)酵 法 。此外，東北制藥還配備有自動(dòng)化程度較高的生產(chǎn)裝備，其生產(chǎn)連續(xù)性好，高效節(jié)能，總體形成了較為先進(jìn)的技術(shù)新格局。該公司擁有全球最大的單條萬噸級(jí)維生素 C 17 生產(chǎn)線以及享有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的全化學(xué)合成黃連素等產(chǎn)品，硫糖鋁、金剛烷胺和金剛乙胺三個(gè)產(chǎn)品順利通過了美國 FDA 認(rèn)證檢查。親身體會(huì)到那么大的罐體，更加深了我們對(duì)生物反應(yīng)罐的認(rèn)識(shí)。最后我們還去了 后續(xù)處理 車間（圖 4），在那里我們參觀了很多大的反應(yīng)罐， 比在課本中的更形象。一般對(duì) 6 周齡以內(nèi)的雛雞氣霧免疫，氣霧粒子為 50μ m，而對(duì) 12 周齡雛雞氣霧免疫時(shí)，氣霧粒子取 10~30μ m為宜。 c) 刺種免疫 選擇翼膜上羽毛少和血管較少的部位接種。如飲水量少，只能讓一部分雞飲上疫苗，造成免疫不均勻；飲水量太多，很長(zhǎng)時(shí)間飲不完，造成疫苗效價(jià)降低。 1℃ 收獲病毒 制細(xì)胞懸液 轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng) 177。 20 多年來 ,SPF 雞、SPF 雞蛋已在獸用生物制品企業(yè)推廣使用 ,并取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益。 SPF 雞卵作為生物制品的原材料 ,對(duì)生物制品的質(zhì)量影響力是不言而喻的。 2．凍干苗：加保護(hù)劑或穩(wěn)定劑、混合、分裝、凍干 。 工序四： 接毒與收獲 11 病毒接種有同步和異步。 制備細(xì)胞程序： 原代細(xì)胞將動(dòng)物器官用胰蛋白酶消化，要裝培養(yǎng)成單層，如為凍干，可按細(xì)胞數(shù)分裝，擴(kuò)增培養(yǎng)。只需溶解后經(jīng)除菌處理即可。 c) 病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造 工序一： 種毒與毒種繼代 制苗用種毒應(yīng)經(jīng)毒力、最小免疫量、安全性、無菌檢驗(yàn)合格，多為凍干品。 工序二 ： 種毒與毒種繼代 工序三 ： 接毒與收獲 1．接毒：接毒途徑和接毒量，視不同病毒不同。 工序四 ： 制苗 1. 組織滅活疫苗：收獲的組織經(jīng)無菌檢驗(yàn)及毒價(jià)測(cè)定合格后按比例加入滅活劑制成勻漿，然后按不同病毒的滅活溫度、時(shí)間進(jìn)行滅活或脫毒。 工序二 ： 種毒與接種 1. 種毒：致死力強(qiáng)大的自然毒株的臟器組織毒或強(qiáng)毒株的增菌培養(yǎng)物，也可用弱毒株組織毒種。無菌動(dòng)物（ GF）要求不帶有任何用現(xiàn)有的方法可以檢出的微生物。 最近國內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專家和科技工作者研究認(rèn)為，現(xiàn)在我國醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級(jí)：一級(jí)為普通動(dòng)物；二級(jí)為清潔動(dòng)物；三級(jí)為無特定原體動(dòng)物；四級(jí)為無菌 9 動(dòng)物和悉生動(dòng)物。 Ⅱ級(jí)：用于一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，除Ⅰ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外，動(dòng)物在一般實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室內(nèi)繁殖飼養(yǎng)，種系清楚，不雜亂，沒有動(dòng)物所特有的疾病，如脫腳?。ㄊ?痘）、流行性腹病毒、致死性腸道病毒、 Pillifomis 菌、出血性敗血性巴斯德菌、支氣管敗血性傳代菌感染、絲蟲病、球蟲病、蠕蟲（除蛔蟲外）病等。普遍動(dòng)物只能供教養(yǎng)和一般性實(shí)驗(yàn)，不適用于研究實(shí)驗(yàn)。飲水 pH 為 ～ ，鼠盒上帶過濾帽，空氣亦應(yīng)經(jīng)過一定的過濾，工作人員穿干凈服裝操作，此類動(dòng)物的微生物控制標(biāo)準(zhǔn)基本與 SPF 相同，不同之處為血清病毒抗體檢查（腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒??）經(jīng)?？蓹z出一定滴度的抗體，但不允許出現(xiàn)臨床癥狀和臟器的病理變化和自然死亡。原則上 SPF 動(dòng)物室內(nèi)是不允許存在病原菌的，但在封閉系統(tǒng)環(huán)境中，難免有很多非病原性微生物會(huì)逐漸進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體 內(nèi)，故亦有人把這個(gè)轉(zhuǎn)移過程稱之為通常動(dòng)物化。 ③．無特定病原體動(dòng)物（ Specefic pathogenfree animals）是指機(jī)體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動(dòng)物，簡(jiǎn)稱 SPF 動(dòng)物。亦有人工投給二種以上的已知