【正文】 泥作用的膠原蛋白所決定。膠原蛋白占身體蛋白質(zhì)的 1/3，生成結(jié)締組織，構(gòu)成身體骨架。一旦吸收，就分布到體內(nèi)所有的水溶性結(jié)構(gòu)中，正常成人體內(nèi)的維生素 C 代謝活性池中約有 1500mg維生素 C， 22 最高儲存峰值為 3000mg 維生素 C。 此步驟的生產(chǎn)流程可簡單寫為： 古龍酸粉 ???? ?? 甲醇、濃硫酸 古龍 酸甲酯 ?? ?? 小蘇打 VCNa （甲醇溶液） ??? ?? 結(jié)晶、冷凍 晶體 ?? ?? 過濾 VCNa溫品 ?? ?? 加水 VCNa 水溶液 ??? ?? 離子交換 VC 水溶液????????? ?? 結(jié)晶、脫水碳吸附、壓濾、濃縮、 粗 VC 20 ⑷ 精制 : 在潔凈區(qū)中 操作。傳統(tǒng) 工藝是加熱沉淀法，發(fā)酵液經(jīng)靜置沉降后通過 732 氫型離子交換樹脂柱，調(diào)節(jié) pH 至蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，并加熱使蛋白質(zhì)凝固，然后用高速離心機(jī)分離出菌絲、蛋白和微粒，清液再次通過陽離子交換柱，酸化為 2酮基 L古龍酸的水溶液，濃縮結(jié)晶后得到 2酮基 L古龍酸。種子和發(fā)酵培養(yǎng)基的成份類似 ,主要有 L山梨糖、玉米漿、尿素、碳酸鈣、磷酸二氫鉀等， pH 值為 。 發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液經(jīng)低溫滅菌，移入第二步發(fā)酵罐作原料。 此方法的生產(chǎn)流程可簡單寫為： D葡萄糖 ? ?? H2 D山梨醇 ? ?? O2 L 18 山梨糖 ??? ?? 硫酸、丙酮 雙丙酮 L山梨 糖 ??????? ?? 4K M n O2ON a O H][ 、氧化 雙丙酮 L古龍酸糖 ??? ?? HC l][酸化 2酮 L古龍酸 ?? ?? ][轉(zhuǎn)化 維生素 C 此方法的 注意事項(xiàng)及三廢處理 1) 車間進(jìn)行還原反應(yīng)時氫氣自制，故配有氫氣柜。 二、 聽 工作人員 給我們講解東藥 VC 的生產(chǎn)流程 ： 生產(chǎn)維生素 C 的 生產(chǎn)方法 有萊氏法、兩 步 發(fā)酵法、新兩 步 發(fā)酵法等。 在萬噸級維生素 C 生產(chǎn)裝置的實(shí)際應(yīng)用中，該公司設(shè)計(jì)采用了 300 立方米氣升式發(fā)酵罐，為國內(nèi)首創(chuàng)；同時引進(jìn)了具有世界先進(jìn)水平的超濾裝置，并采用先進(jìn)的連續(xù)式流程和滲析半連續(xù)組合工藝。 東北制藥具備強(qiáng)大的生產(chǎn)能力，企業(yè)技術(shù)裝備先進(jìn)，主導(dǎo)產(chǎn)品的各項(xiàng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)均處于國際、國內(nèi)先進(jìn)水平。 圖 3 圖 4 三、 實(shí)習(xí) 小結(jié) ： 這次去益康，我們收獲頗多， 由于他們實(shí)驗(yàn)室的潔凈程度特高，要進(jìn)去得經(jīng)過好幾層的消毒，而且還要穿防護(hù)服，所以我們沒有進(jìn)去 參觀，不過通過他們的微機(jī)監(jiān)控室我們也能夠清楚的看見各個車間都是做 什么的，再加上工作人員的認(rèn)真講解，我們學(xué)到很多課本上沒有的知識，也將有些學(xué)過的知識結(jié)合與實(shí)踐相結(jié)合。 由于 我們是 7 月份參觀的益康，這個時期正是他們停產(chǎn)的時期，所以很多車 16 間我們都沒有參觀到。氣霧免疫時，將疫苗按規(guī)定稀釋好，用噴霧器或空壓機(jī)將疫苗液噴成氣霧粒子。如果滴眼時雞剛好閉眼、滴鼻時雞打噴嚏或鼻孔產(chǎn)生氣泡現(xiàn)象，必須重復(fù)接種。 菌種 發(fā)酵罐培養(yǎng) 收毒 中間品檢驗(yàn) 種子培養(yǎng) 培養(yǎng)基 滅菌 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 入庫 28℃ 標(biāo)簽 滅菌 鋁蓋 成品檢驗(yàn) 清洗 病毒液暫存 15℃ 化苗 配苗 分裝 凍干保護(hù)劑 配制 滅菌 滅菌 西林瓶 精洗 粗洗 滅菌 粗洗 膠塞 精洗 凍干干燥 半壓塞 15 特別注意疫苗的用水量，一般為雞日飲水量的 30%，疫苗用量高于平均用量的 2~3 倍，保證所有的雞同時喝到疫苗水，并在 ~1 小時內(nèi)飲完。 12 ⒈ 雞胚培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 蛋庫（ SPF 蛋） 脫外包 接毒 雞胚前孵化 蛋表面消毒 后孵化 冷蛋（ 4℃ ） 收獲病毒 配苗 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 分裝 入庫 15℃ 滅菌 凍干保護(hù)劑 標(biāo)簽 滅菌 粗洗 清洗 膠塞 鋁蓋 配制 配制 滅菌 照蛋 中間品檢驗(yàn) 病毒液暫存 15℃ 化苗 照蛋 滅菌 西林瓶 精洗 精洗 成品檢驗(yàn) 粗洗 凍干干燥 半壓塞 13 ⒉ 細(xì)胞培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 蛋庫（ SPF 蛋） 脫外包 接毒 雞胚孵化 蛋表面消毒 轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng) 177。 20 世紀(jì) 80 年代 ,農(nóng)業(yè)系統(tǒng)進(jìn)行 SPF 雞技術(shù)的開發(fā)研究。 SPF 蛋： SPF 為 specific pathogen free 的縮寫意思為無特定病原體， SPF 雞蛋既是由無特定病原體雞下的，無特定病原體雞蛋。 工序五： 配苗 1．滅活疫苗：不同病毒采用不同滅活劑，有的需加佐劑，分裝。用傳代細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)注意不要用種瘤細(xì)胞。如豬瘟兔化弱毒牛睪丸細(xì)胞疫苗用犢牛睪丸原代細(xì)胞，狂犬病弱毒細(xì)胞適應(yīng)疫苗，采用 BHK21。 工序二 ： 營養(yǎng)液配制 分細(xì)胞培養(yǎng)用生長液（含 5%~10%血清）和病毒培殖用的維持液（ 2%~5%血清），不同細(xì)胞所需營養(yǎng)液不同，但內(nèi)均含多種 氨基酸 、 維生素 和一些有機(jī)物、無機(jī)物，并有商品粉劑出售 。 凍干苗：按比例加入保護(hù)劑（ 5%蔗糖脫脂乳）、濾過、加青鏈霉素、分裝、凍干。受精卵從孵育至培養(yǎng)全過程應(yīng)保持無菌，接種日齡視病毒而定。 工序三 ： 觀察與收獲 根據(jù)觀察征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒高器官組織。 3．品種、年令和體重合乎要求。無特定病原體動物（ SPF）要求在 CL 基礎(chǔ)上還須不帶有干擾實(shí)驗(yàn)的微生物。 Ⅲ級及Ⅱ級 動物的要求較高也較貴，只宜用于特殊目的和要求的實(shí)驗(yàn)。 1980 年 10 月在北京召開醫(yī)學(xué)科研存設(shè)計(jì)座談會，有 30 多位國內(nèi)著名專家教授參加，根據(jù)我國具體條件，這次會議對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行了分級，列舉如下： Ⅰ級：用于教學(xué)示教的動物，應(yīng)沒有能傳染給人的疾病，如結(jié)核、假結(jié)核、痢疾、傷寒沙門氏菌感染、出血性黃疸螺旋體病、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)腦膜炎病毒感染，皮膚霉菌病，體外寄生蟲病等。鼠應(yīng)排除肺炎病毒，沙門氏菌和鏈球菌，地鼠不應(yīng)有蟯蟲。墊料、飼料、用具等均應(yīng)經(jīng)過高壓消毒。故一般大多先培育出無菌動物或悉生動物后，再把其轉(zhuǎn)移到有封閉系統(tǒng)（ Barrier System）的設(shè)施中飼育繁殖。例如，人工投給的微生物，除可在飲水中增殖外，還能在隔離器內(nèi)放出大量的氨氣。此種動物原是無菌動物，系人為的將指定微生物叢投給其體內(nèi)，例如使大腸桿菌定居在無菌小鼠體內(nèi)，在進(jìn)行微生物檢查時，僅能檢出大腸桿菌。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養(yǎng)較為方便。 目前 ,通過微生物學(xué)的監(jiān)察手段 ,按對微生物控制的凈化程度 ,把實(shí)驗(yàn)動物區(qū)分為無菌動物、悉生動物和特殊病原體動物和清潔動物四類。物流路線的一條線是原輔料，物料經(jīng)過外清處理，進(jìn)行濃配、稀配；另一條線是 安 瓿 瓶， 安 瓿 經(jīng)過外清處理后，進(jìn)入洗灌封聯(lián)動線清洗、烘干。簡要的說， GMP 要求食品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備良好的生產(chǎn)設(shè)備，合理的生產(chǎn)過程，完善的質(zhì)量管理和嚴(yán)格的檢測系統(tǒng)，確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量（包括食品安全衛(wèi)生）符合法規(guī)要求 。如工藝無特殊要求，一般潔凈區(qū)溫度為 18 ~ 26℃，相對濕度為 45％ ~65％。其中，禽類活疫苗生產(chǎn)完全實(shí)現(xiàn) SPF 化。接種類毒素的話，血中可制造某種物質(zhì)，使菌中的毒素?zé)o毒化，可借此預(yù)防疾病。如百日咳、乙型腦炎、流行感冒等疫苗皆是。如小兒麻痹、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹 等疫苗皆是。按照那里工作人員的安排，我們先參觀了他們的微機(jī)控制室（圖 1），在那里我們都特別認(rèn)真地聽著益康工作人員給我們介紹他們公司 的現(xiàn)狀 、一些疫苗的生產(chǎn)流程、 實(shí)驗(yàn)室的潔凈程度 以及不同工作車間都是做什么的等?，F(xiàn)已推出新 支 減 流、新 支 減、 SPF 系列產(chǎn)品等。 公司擁有 12 萬平方米的生物工業(yè)園區(qū)，園區(qū)內(nèi)建有 13000 余平方米的 GMP 生產(chǎn)車間 3 座，還有現(xiàn)代化的 SPF 雞舍 1 座及其他科研、檢驗(yàn)等設(shè)施。 5. 將理論知識與實(shí)踐操作相結(jié)合 。 實(shí)習(xí)目的： 1. 了解 遼寧 益康生物制品有限公司的 GMP 生產(chǎn)車間 。 1 目錄 第一部分 校外參觀實(shí)習(xí) ???????????????? 2 實(shí)習(xí)目的 ????????????????????? 2 實(shí)習(xí)地點(diǎn) ㈠ 遼寧益康生物制品有限公司 ??????? 2 一、 遼寧益康生物制品有限公司 簡介 ????????? 2 二、 實(shí)習(xí)內(nèi)容 ????????????????? 3 三、 實(shí)習(xí)小結(jié) ????????????????????? 16 實(shí)習(xí)地點(diǎn) ㈡ 東北制藥廠 VC 總公司 ?????????? 16 一、 吳春江老師向我們介紹 東北制藥廠 ?????????? 16 二、 聽工作人員給我們講解東藥 VC 的生 產(chǎn)流程?????? 17 三、 吳老師給我們普及 VC 知識????????????? 21 四、 參觀生產(chǎn)車間??????????????????? 24 五、 實(shí)習(xí)心得????????????????????? 24 第二部分 校內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵酸奶 ???????????? ? 26 一、 實(shí)驗(yàn)經(jīng)過 ?????????????????? ? 26 二、 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ?????????????????? ? 28 第三部分 實(shí)習(xí)總結(jié) ?????????????????? 42 2 第一部分 校外參觀實(shí)習(xí)： 經(jīng)過大 學(xué)三年 的理論 性教育，使我們對生物制藥 以 及生物工程設(shè)備 這 兩 門學(xué)科有了理論上的大體認(rèn)識，在大三下 學(xué)期期末在舒老師和劉老師的帶領(lǐng)下， 我們?nèi)ミ|寧省益康生物制品有限公司和東北制藥集團(tuán)進(jìn)行參觀 實(shí)習(xí)。 加深我們對所學(xué)知識的理解和消化 ， 同時也學(xué)習(xí)到 兩所 工廠的許多技術(shù)細(xì)節(jié) ， 掌握了生產(chǎn)的基本工藝原理 和流程。 4. 學(xué)習(xí)東北制藥集團(tuán) VC 總公司生產(chǎn)維生素 C 的方法流程 。 2020年 “遼益牌 ”獲得 “遼寧省著名商標(biāo) ”。近年來，企業(yè) 3 以市場為導(dǎo)向，不斷加大科研開發(fā)力度，與吉林大學(xué)、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)等院校建立了長期的產(chǎn)、學(xué)、研合 作關(guān)系，先后合作成功“仔豬大腸桿菌 K88ST1LTB 三價基因工程疫苗”、“仔豬紅痢（α β）雙價基因工程疫苗”等十余項(xiàng)新產(chǎn)品，逐步形成了開發(fā)一批、研制一批、儲備一批的新產(chǎn)品開發(fā)模式。 二、 實(shí)習(xí)內(nèi)容： 早上 9 點(diǎn)左右，我們到達(dá)朝陽益康生物制品有限公司。 4 b) 疫苗可分為三類 ： i. 活菌疫苗 ：減毒活疫苗作為疫苗用。 ii. 滅活菌疫苗 ：殺死病原體，只留下能夠產(chǎn)生免疫力的毒素作為疫苗。 iii. 類毒素 ：取出病 原體的毒素，加以削弱毒性而成為無毒化。 2) 遼寧益康生物制品有限公司 生產(chǎn)的主要產(chǎn)品 ： 該公司生產(chǎn)的主要產(chǎn)品有：禽流感滅活疫苗、政府采購豬瘟活疫苗、禽類凍干活疫苗、豬類凍干活疫苗、禽類滅活疫苗、豬類滅活疫苗等，如山羊痘活疫苗、高效型豬瘟活疫苗，狂犬病活疫苗、豬瘟活疫苗，山羊痘活疫苗，小鵝瘟活疫苗，雞傳染性喉氣管炎活疫、雞痘活疫苗（鵪鶉化弱毒株）、雞馬立克氏病 火雞皰疹病毒活疫苗，雞傳染性支氣管炎活疫苗（ W93 株），雞新城疫滅活疫苗、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（ La Sota 株 + H）、鴨瘟活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力活疫苗、豬多殺性巴氏桿菌病活疫苗 (679230 株 ) ，豬丹毒活疫苗（ GC42株）、仔豬水腫病滅活疫苗等。潔凈級別高的區(qū)域相對于潔凈級別低 的區(qū)域要保持 5 ~10Pa 的正壓差。它是一套適用于制藥、食品等行業(yè)的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，要求企業(yè)從原料、人員、設(shè)施設(shè)備、生產(chǎn)過程、包裝運(yùn)輸、質(zhì)量控制等方面按國家有關(guān)法規(guī)達(dá)到衛(wèi)生質(zhì)量要求，形成一套可操作的作業(yè)規(guī)范幫助企業(yè)改善企業(yè)衛(wèi)生環(huán)境，及時發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)過程中存在的問題，加以改善。 6 盡量短捷、順暢。 圖 2 GMP 生產(chǎn)車間 4) 病毒性疫苗制造技術(shù) 的各工序要求 ： a) 病毒的組織苗制造 工序一 ： 動物選擇 1． 清潔級（ Ⅱ 級）以上的等級實(shí)驗(yàn)動物或無規(guī)定人畜共患病原體的動物。 7 其法：一般將臨產(chǎn)前的健康動物用麻醉藥品或頸椎臼法處死后，立即浸泡在 37℃滅菌液中，送進(jìn)無菌室（或無菌隔離器），按無菌手術(shù)進(jìn)行剖腹，切除帶胎子宮（子宮內(nèi)首先應(yīng)無菌），將其 浸入消毒液里并輸送到另一隔離器中，切開子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍（電刀切斷）后，放隔離器內(nèi)人工喂乳或用其它品系的無菌母鼠作保姆供養(yǎng)。 ②．悉生動物（ Cnotobi