【正文】 微生物。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。 ①． 無菌動物（ Germ free animals）是指機體內(nèi)外均無任何寄生物（微生物和寄生蟲）的動物。兩條線匯聚于灌封工序。 b) 車間設(shè)計要貫徹人、物流分開的原則 : 人員進(jìn)入各個級別的生產(chǎn)車間時，要先更衣，不同級別的生產(chǎn)區(qū)需有相應(yīng)級別的更衣凈化措施。各工序需安裝紫外線燈。 3) 制造疫苗的生廠車間要求 ： 首 先 ， 每 種 疫 苗 的 制 備 都 要 滿 足 以 下 生 產(chǎn) 車 間 的 要 求 ： 5 a) 按 照 GMP 的規(guī)定最終滅菌小容量注射劑生產(chǎn)環(huán)境分為三個區(qū)域 : 一般 生產(chǎn) 區(qū) 、 10 萬級潔凈區(qū)、 1 萬級潔凈區(qū)。白喉、破傷風(fēng)的疫苗即屬此類。接種滅活菌疫苗，可在血中制造抗體，以殺死入侵的病原體。接種活疫苗的話，會發(fā)生輕微的感染，血中與細(xì)胞雙方的抵抗性會提高。 圖 1 熱情的益康工作人員給我們講的最多的就是他們公司所生產(chǎn)的疫苗。 通過在內(nèi)部實行 ERP 管理，對外開通企業(yè)網(wǎng)站（ ），企業(yè)以嚴(yán)格的科學(xué)管理手段，強有力的科技創(chuàng)新能力，有針對性的市場營銷策略，建立了一個高效、通暢的市場網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，使產(chǎn)品的市場占有率不斷提高。現(xiàn)可生產(chǎn)六大類 30 余個品種的動物疫苗，基本滿足養(yǎng)殖業(yè)的防疫需求。 實習(xí)地點 ㈠ ： 遼寧益康生物制品有限公司 一、 遼寧益康生物制品有限公司 簡介 ： 遼寧益康生物制品有限公司是國內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營動物生物制品的骨干企業(yè)，是農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的禽流感滅活疫苗定點生產(chǎn)企業(yè)，是經(jīng)有關(guān)部門認(rèn)定的 “遼寧省高新技術(shù)企業(yè) ”。 2. 了解 遼寧益康生物制 品有限公司主要生產(chǎn)的疫苗和 生產(chǎn)流程 。實習(xí)是在校大學(xué)生唯一 能夠 接觸工廠大規(guī)模生產(chǎn)的機會 ,是學(xué)生走上社會的良好過渡 ， 走向工作崗位的入門之課 。 實習(xí)讓我們了解到理論和實踐之間的差異 ， 找到了工廠大規(guī)模生產(chǎn)和實驗室小量操作的異同 。 3. 了解東北制藥 集團(tuán) VC 總 公司的發(fā)展歷史 。 2020 年獲得中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會 “感動中國畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新領(lǐng)軍企業(yè) ”稱號， 2020 年被中國動物保健品協(xié)會評為 “獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)十強 ”。 企業(yè)現(xiàn)有員工 414 人，其中各類專業(yè)技術(shù)人員 145 人，其中具有研究員技術(shù)職稱者 5 人，副研究員技術(shù)職稱者 11 人，中級技術(shù)職稱者 53 人。 公司的經(jīng)營宗旨是：以科技為先導(dǎo)，以質(zhì)量求生存，以管理求發(fā) 展，力促最新科技成果轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力，竭誠為廣大用戶服務(wù) 。 1) 疫苗 的 概念及 分類： a) 疫苗 概念： 泛指所有用減毒或殺死的病原生物 (細(xì)菌、 病毒、立克次體等 )或其抗原性物質(zhì)所制成，用于預(yù)防接種的生物制品 。免疫力長久持續(xù)，所以不用進(jìn)行數(shù)次追加免疫。滅活菌疫苗無法像活疫苗一樣在體內(nèi)增殖，所以必須經(jīng)常追加接種，以強化免疫。不過，與滅活菌疫苗相同，不具持續(xù)力，所以必須經(jīng)常追加接種。一般生產(chǎn)區(qū)包括 安 瓿 的洗烘、工作服的洗滌等； 1 萬級潔凈區(qū)包括稀配、灌溉，且灌封機自帶局部 100 級層流。 注： “GMP”是英文 Good Manufacturing Practice 的縮寫，中文的意思是 “良好作業(yè)規(guī)范 ”，或是 “優(yōu)良制造標(biāo)準(zhǔn) ”，是一種特別注重在生產(chǎn)過程中實施對產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生安全的自主性管理制 度。 生產(chǎn)區(qū)要嚴(yán)格按照生產(chǎn)工藝流程布置，各個級別相同的生產(chǎn)區(qū)相對集中，潔凈級別不同的房間相互聯(lián)系中設(shè)立傳遞窗或緩沖間，使物料傳遞路線GMP 濕件 硬件 軟件 人員 廠房設(shè)施、 設(shè)備 組織、制度、工藝、操、 衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、記錄、教育等。灌封后的安 瓿 再經(jīng)過滅菌、檢漏、異物檢查，最后外包裝成整個生產(chǎn)過程。此種動物在自然界中并不存在，必須用人為的方法培育出來。另外，象禽類、魚類、昆蟲類，因是在卵中無菌的前提下進(jìn)行的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入無菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動物一般在在出生后能自力采食，故較易育成。悉生動物一般分為單菌（ Monoxenie）、雙菌（ Dixenie）、三菌（ Trixenie），或多菌（ Polyxenie）動物。但非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的，故其實際上就是指無傳染病的健康動物。 SPF 動物的祖先是無菌動物，按理來說，無菌動物的子宮內(nèi)和卵中應(yīng)該是無菌的，然而，有些病毒實際上是通過親代傳給胎兒的，因此，在作出無菌動物和 SPF 動物之前，必須充分考慮這個問題。 普通動物（ Conventioal animals）是未經(jīng)積極的微生物學(xué)控制，普遍地飼養(yǎng)在開放衛(wèi)生環(huán)境里的動物。 國 外將實驗動物分為五級和四級，以用于不同的實驗。 Ⅲ級：即所謂無特定病原體（ Specific Pathogen free,SPF）動物，除Ⅱ級標(biāo)準(zhǔn)外，動物為部腹產(chǎn)或子宮切除產(chǎn)，均按純系要求繁殖，在隔離器內(nèi)或?qū)恿魇覂?nèi)飼養(yǎng)，只有一些不致病的細(xì)菌叢，沒有各種致病的病原體。 普通動物（ CV）要求必須不帶有人獸共患病原體及體外寄生蟲。悉生動物（ GN）要求在無菌動物體上植入一種或數(shù)種已 知的微生物。必須檢查合格后使用。 2. 弱毒組織疫苗：無 菌取組織、稱重、剪碎、加保護(hù)劑，過濾、稀釋，檢查（檢菌、毒價）、鑒定、分裝、凍干。 2．培養(yǎng) 10 3． 收獲病毒 工序四 ： 配苗 收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無菌檢驗合格后配苗。指定部門提供。 工序三 ： 細(xì)胞制備 （分原代細(xì)胞和繼代細(xì)胞） 選擇依據(jù)： 1. 病毒的適應(yīng)性高、毒價高。常用細(xì)胞培養(yǎng)方法為靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。培養(yǎng)當(dāng)出現(xiàn) 70%~85%以上細(xì)胞病孌時，即可收獲。 5) 典型疫苗 的 生產(chǎn)工藝流程 根據(jù)以上總結(jié)的制造疫苗的各項操作步驟，益康員工給我們重點介紹了幾種疫苗的生產(chǎn)工藝流程。由于我國獸藥實施 GMP 管理 ,SPF 雞卵的需求量大增。特別是2020 年中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第 202 號、 2020 年中華人民共和國國務(wù)院令第 404 號和中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第 442 號頒布以來 ,SPF 雞蛋和 SPF 雞的使用量明顯增加 (據(jù)不完全統(tǒng)計 ,2020 年全國使用 SPF 雞為 28 348 只 ,2020 年約 73 000 只 ),正負(fù)壓 SPF 雞隔離器的數(shù)量也明顯增多 (2020 年為 96 臺 ,2020 年為 1 232臺 ),SPF 雞蛋的生產(chǎn)和銷售正向產(chǎn)業(yè)化、專業(yè)化邁進(jìn)。 1℃ 照蛋 轉(zhuǎn)瓶 滅菌 晾干 精洗 粗洗 培養(yǎng)液 冷庫 15℃ 解凍 28℃ 病毒液暫存 15℃ 化苗 配苗 中間品檢驗 分裝 凍干保護(hù)劑 配制 滅菌 滅菌 西林瓶 精洗 粗洗 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 入庫 15℃ 標(biāo)簽 滅菌 清洗 鋁蓋 成品檢驗 滅菌 粗洗 膠塞 精洗 凍干干燥 半壓塞 14 ⒊菌種培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 6) 舉例說明 雞新城 疫苗的 使用 方法： a) 飲水免疫 首先要保證足夠的飲水器，并把飲水器清洗干凈， 達(dá)到 無抗菌、消毒藥物殘留；飲水免疫前停水 2~4 小時；疫苗水中不含金屬離子和氯離子，可使用涼開水或蒸餾水，最 好使用去離子水，并在其中加入 2~3%鮮牛奶或 ~%脫脂奶粉，以穩(wěn)定病毒活性。 b) 滴鼻點眼免疫 疫苗稀釋要用蒸餾水或生理鹽水，用量與配量相匹配。刺種時，刺針針尖向下，使藥液自然下垂，避開血管，肌肉和骨骼，使刺種針垂直刺入翼膜。 在雞頭上為約 米左右噴霧，噴完后要最大限度地降低通風(fēng)換氣量，以保證氣霧免疫效果，同時也要防止通風(fēng)不良而造成 窒息死亡，一般噴霧后密閉雞舍 10~20分即可。激發(fā)了我們對發(fā)酵罐知識點的回憶。 就這樣我們結(jié)束了為期半天的益康參觀實習(xí)， 七月六號 上午我們?nèi)チ松蜿枛|北制藥廠。 通過實施觀念創(chuàng)新、思維創(chuàng)新、制度創(chuàng)新、技術(shù)創(chuàng)新和管理創(chuàng)新，東北制藥初步形成了獨具特色的企業(yè)創(chuàng)新理論指導(dǎo)體系。經(jīng)專家鑒定：東北制藥的萬噸維生素 C 新工藝和工業(yè)化技術(shù)水平在發(fā)酵法生產(chǎn)維生素 C 領(lǐng) 域處于國際先進(jìn)水平，該工藝使維生素 C 總收率提高了近 25%、制造成本降低了 67%，實現(xiàn)了維生素 C 生產(chǎn)的規(guī)模生產(chǎn)效益。 1. 萊氏法 是維生素 C 生產(chǎn)的經(jīng)典方法，是由 Reichstein 和 Grussner 研究開發(fā)的。 ⑴ 發(fā)酵 ① . 第一步發(fā)酵 黑醋酸菌（ Acetobacter suboxydans）經(jīng)種子擴大培養(yǎng)，接入發(fā)酵罐，種子和發(fā)酵培養(yǎng)基主要包括山梨醇、玉米漿、酵母膏、碳酸鈣等成份， pH ~。 ② . 第二步發(fā)酵 氧化葡萄糖酸桿菌 (Gluconobacter oxydans，小菌 )和巨大芽孢桿菌 (Bacillus megaterium，大菌 )混合培養(yǎng)。 ， L山梨糖生成 2酮基 L古龍酸的轉(zhuǎn)化率可達(dá) 70~85%。 2酮基 L古龍酸在甲醇中用濃硫酸催化酯化 ，攪拌并加熱，使溫度為 66~68℃ ，反應(yīng)4h 左右即為酯化終點， 生成 2酮基 L古龍酸甲酯，加 NaHCO3 轉(zhuǎn)化生成維生素C 鈉鹽，經(jīng)氫型離子交換樹脂酸化得到維生素 C。 生產(chǎn)過程中要注意三廢的處理： ? 母液回收、濃縮、結(jié)晶甩濾，提高收率 ? 廢鹽酸回收后可再用于第一次交換 萊氏法和兩步發(fā)酵法的工藝比較 （ 1）萊氏法工藝 ?葡萄糖、 高壓催化氫化、黑醋菌氧化、丙酮保護(hù)、次氯酸鈉氧化、鹽酸轉(zhuǎn)化、維生素 C ?優(yōu)點 ? 生產(chǎn)工藝成熟、各項技術(shù)指標(biāo)先進(jìn)、生產(chǎn)技術(shù)水平較高、 ? 總收率達(dá) 65%、優(yōu)級品率 100% ?缺點 ? 需要丙酮保護(hù)羥基、反應(yīng)步驟增多，連續(xù)操作有困難 ? 丙酮用量大，苯的毒性大 ? 勞動保護(hù)強度大，并污染環(huán)境 （ 2）兩步發(fā)酵法 ?葡萄糖 高壓催化氫化 兩步微生物氧化 酸（堿）轉(zhuǎn)化 維生素 C ?優(yōu)點 ? 生物氧化具有特異性，省去了保護(hù)和脫保護(hù)兩步 ? 革除了大量有機溶劑 ? 改善了勞動條件和環(huán)境保護(hù)問題 ? 革除了動力攪拌，大大節(jié)約了能源 三、 吳老師給我們普及 VC 知識 維生素 C（ Vitamin C ， Ascorbic Acid）又叫 L抗壞血酸，是一種水溶性維生素。 維生素 C 對人體的作用 ： 近代研究表明 VC 對人體健康至關(guān)重要： 1．膠原蛋白的合成需要維生素 C 參加，所以 VC 缺乏 ，膠原蛋 白不能正常合成，導(dǎo)致細(xì)胞連接障礙。 2．壞血病。這種情況在皮膚表面發(fā)生，則產(chǎn)生淤血、紫癍；在體內(nèi)發(fā)生則引起 疼痛和關(guān)節(jié)漲痛。牙齦是軟組織，當(dāng)缺乏蛋白質(zhì)、鈣、 VC 時易產(chǎn)生牙齦萎縮、出血。可以保護(hù)其它抗氧化劑，如維生素 A、維生素 E、不飽和脂肪酸，防止自由基對人體的傷害。豐富的膠原蛋白有助于防止癌細(xì)胞的擴散； VC 的抗氧化作用可以抵御自由基對細(xì)胞的傷害防止細(xì)胞的變異；阻斷亞硝酸鹽和仲胺形成強致癌物亞硝胺。為此，谷胱甘肽和酶起著重要作用。 酶是生化反應(yīng)的催化劑，有些酶需要有自由的琉基（ SH）才能保持活性。白細(xì)胞含有豐富的 VC，當(dāng)機體感染時白細(xì)胞內(nèi)的VC 急劇減少。人體受到異常的刺激，如劇痛、寒冷、缺氧、精神強刺激，會引發(fā)抵御異常刺激的緊張狀態(tài)。當(dāng)然，如果 VC 片中添加一些對人體有益的成分，也會使其價格比較高。工作人員告訴我們，綠色的標(biāo)志代表水，紅色的標(biāo)志代表酸堿，銀色的標(biāo)志代表蒸汽，黑色的標(biāo)志代表物料。于是，瑞士羅氏公司被迫應(yīng)戰(zhàn)， 1995 年開始第一次降價，以每公斤 12 美元降到每公斤 7 美元。 可以看出， VC 項目特點是直接參與國際競爭，當(dāng)中國的產(chǎn)量只有 2020 噸或 3000 噸時，外國企業(yè)還不害怕，因為那在 5 萬 — 6 萬噸的國際市場中算不了什么。 目前，沈陽東北制藥集團(tuán)的 VC 生產(chǎn)能力約為每年 12 萬噸，是國內(nèi)第一大廠家，在世界排名第三。在 1998 年 1 月， VC車間開始轉(zhuǎn)制，成立了“ VC 公司”，原來的 1300 人全部“下崗”，再由干部進(jìn)行選聘，最后上崗者為 805 人。產(chǎn)量也直線上升，從每月450 噸、 500 噸、 600 噸、 700 噸一直到 1998 年底達(dá)到了 850 噸。 26 第二部分 校內(nèi)實驗室發(fā)酵酸奶： 一、 實驗經(jīng)過： 第一天： 在實驗室聽舒楊老師講解 15L 發(fā)酵罐的原位滅菌和菌體發(fā)酵 實驗，首先我們認(rèn)識了 15L 發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu)，以及各個結(jié)構(gòu)的用途和注意事項，以便我們做實驗時能夠正確的鏈接管路。 圖 6 校正滅菌參數(shù) 圖 7 對組裝好的罐子蒸汽滅菌 圖 8 自控蒸汽發(fā)生器 27 第三天： 將發(fā)酵罐的鐘罩卸下后，在火焰的保護(hù)下打開接種口，倒入大約15 袋的牛奶，然后再倒入大約 10 袋的酸奶，最后加入一定量的白糖，然后旋緊接種蓋，移去火焰圈。 圖 9 設(shè)定發(fā)