【正文】 得到 2酮基 L古龍酸。 發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液經(jīng)低溫滅菌，移入第二步發(fā)酵罐作原料。 二、 聽(tīng) 工作人員 給我們講解東藥 VC 的生產(chǎn)流程 ： 生產(chǎn)維生素 C 的 生產(chǎn)方法 有萊氏法、兩 步 發(fā)酵法、新兩 步 發(fā)酵法等。 東北制藥具備強(qiáng)大的生產(chǎn)能力，企業(yè)技術(shù)裝備先進(jìn)，主導(dǎo)產(chǎn)品的各項(xiàng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)均處于國(guó)際、國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平。 由于 我們是 7 月份參觀(guān)的益康，這個(gè)時(shí)期正是他們停產(chǎn)的時(shí)期，所以很多車(chē) 16 間我們都沒(méi)有參觀(guān)到。如果滴眼時(shí)雞剛好閉眼、滴鼻時(shí)雞打噴嚏或鼻孔產(chǎn)生氣泡現(xiàn)象，必須重復(fù)接種。 12 ⒈ 雞胚培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 蛋庫(kù)（ SPF 蛋） 脫外包 接毒 雞胚前孵化 蛋表面消毒 后孵化 冷蛋（ 4℃ ） 收獲病毒 配苗 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 分裝 入庫(kù) 15℃ 滅菌 凍干保護(hù)劑 標(biāo)簽 滅菌 粗洗 清洗 膠塞 鋁蓋 配制 配制 滅菌 照蛋 中間品檢驗(yàn) 病毒液暫存 15℃ 化苗 照蛋 滅菌 西林瓶 精洗 精洗 成品檢驗(yàn) 粗洗 凍干干燥 半壓塞 13 ⒉ 細(xì)胞培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 蛋庫(kù)（ SPF 蛋） 脫外包 接毒 雞胚孵化 蛋表面消毒 轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng) 177。 SPF 蛋： SPF 為 specific pathogen free 的縮寫(xiě)意思為無(wú)特定病原體， SPF 雞蛋既是由無(wú)特定病原體雞下的，無(wú)特定病原體雞蛋。用傳代細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)注意不要用種瘤細(xì)胞。 工序二 ： 營(yíng)養(yǎng)液配制 分細(xì)胞培養(yǎng)用生長(zhǎng)液（含 5%~10%血清）和病毒培殖用的維持液（ 2%~5%血清），不同細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)液不同，但內(nèi)均含多種 氨基酸 、 維生素 和一些有機(jī)物、無(wú)機(jī)物，并有商品粉劑出售 。受精卵從孵育至培養(yǎng)全過(guò)程應(yīng)保持無(wú)菌，接種日齡視病毒而定。 3．品種、年令和體重合乎要求。 Ⅲ級(jí)及Ⅱ級(jí) 動(dòng)物的要求較高也較貴，只宜用于特殊目的和要求的實(shí)驗(yàn)。鼠應(yīng)排除肺炎病毒，沙門(mén)氏菌和鏈球菌，地鼠不應(yīng)有蟯蟲(chóng)。故一般大多先培育出無(wú)菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物后，再把其轉(zhuǎn)移到有封閉系統(tǒng)（ Barrier System）的設(shè)施中飼育繁殖。此種動(dòng)物原是無(wú)菌動(dòng)物，系人為的將指定微生物叢投給其體內(nèi)，例如使大腸桿菌定居在無(wú)菌小鼠體內(nèi)，在進(jìn)行微生物檢查時(shí)，僅能檢出大腸桿菌。 目前 ,通過(guò)微生物學(xué)的監(jiān)察手段 ,按對(duì)微生物控制的凈化程度 ,把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物區(qū)分為無(wú)菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物和特殊病原體動(dòng)物和清潔動(dòng)物四類(lèi)。簡(jiǎn)要的說(shuō)， GMP 要求食品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備良好的生產(chǎn)設(shè)備，合理的生產(chǎn)過(guò)程，完善的質(zhì)量管理和嚴(yán)格的檢測(cè)系統(tǒng)，確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量（包括食品安全衛(wèi)生）符合法規(guī)要求 。其中，禽類(lèi)活疫苗生產(chǎn)完全實(shí)現(xiàn) SPF 化。如百日咳、乙型腦炎、流行感冒等疫苗皆是。按照那里工作人員的安排，我們先參觀(guān)了他們的微機(jī)控制室（圖 1），在那里我們都特別認(rèn)真地聽(tīng)著益康工作人員給我們介紹他們公司 的現(xiàn)狀 、一些疫苗的生產(chǎn)流程、 實(shí)驗(yàn)室的潔凈程度 以及不同工作車(chē)間都是做什么的等。 公司擁有 12 萬(wàn)平方米的生物工業(yè)園區(qū)，園區(qū)內(nèi)建有 13000 余平方米的 GMP 生產(chǎn)車(chē)間 3 座，還有現(xiàn)代化的 SPF 雞舍 1 座及其他科研、檢驗(yàn)等設(shè)施。 實(shí)習(xí)目的： 1. 了解 遼寧 益康生物制品有限公司的 GMP 生產(chǎn)車(chē)間 。 加深我們對(duì)所學(xué)知識(shí)的理解和消化 ， 同時(shí)也學(xué)習(xí)到 兩所 工廠(chǎng)的許多技術(shù)細(xì)節(jié) ， 掌握了生產(chǎn)的基本工藝原理 和流程。 2020年 “遼益牌 ”獲得 “遼寧省著名商標(biāo) ”。 二、 實(shí)習(xí)內(nèi)容： 早上 9 點(diǎn)左右，我們到達(dá)朝陽(yáng)益康生物制品有限公司。 ii. 滅活菌疫苗 ：殺死病原體，只留下能夠產(chǎn)生免疫力的毒素作為疫苗。 2) 遼寧益康生物制品有限公司 生產(chǎn)的主要產(chǎn)品 ： 該公司生產(chǎn)的主要產(chǎn)品有：禽流感滅活疫苗、政府采購(gòu)豬瘟活疫苗、禽類(lèi)凍干活疫苗、豬類(lèi)凍干活疫苗、禽類(lèi)滅活疫苗、豬類(lèi)滅活疫苗等，如山羊痘活疫苗、高效型豬瘟活疫苗，狂犬病活疫苗、豬瘟活疫苗，山羊痘活疫苗，小鵝瘟活疫苗，雞傳染性喉氣管炎活疫、雞痘活疫苗（鵪鶉化弱毒株）、雞馬立克氏病 火雞皰疹病毒活疫苗，雞傳染性支氣管炎活疫苗（ W93 株），雞新城疫滅活疫苗、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（ La Sota 株 + H）、鴨瘟活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力活疫苗、豬多殺性巴氏桿菌病活疫苗 (679230 株 ) ，豬丹毒活疫苗（ GC42株）、仔豬水腫病滅活疫苗等。它是一套適用于制藥、食品等行業(yè)的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，要求企業(yè)從原料、人員、設(shè)施設(shè)備、生產(chǎn)過(guò)程、包裝運(yùn)輸、質(zhì)量控制等方面按國(guó)家有關(guān)法規(guī)達(dá)到衛(wèi)生質(zhì)量要求，形成一套可操作的作業(yè)規(guī)范幫助企業(yè)改善企業(yè)衛(wèi)生環(huán)境，及時(shí)發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)過(guò)程中存在的問(wèn)題，加以改善。 圖 2 GMP 生產(chǎn)車(chē)間 4) 病毒性疫苗制造技術(shù) 的各工序要求 ： a) 病毒的組織苗制造 工序一 ： 動(dòng)物選擇 1． 清潔級(jí)（ Ⅱ 級(jí)）以上的等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或無(wú)規(guī)定人畜共患病原體的動(dòng)物。 ②．悉生動(dòng)物（ Cnotobiotes animals）是指機(jī)體內(nèi)帶著已知微生物（動(dòng)物或植物）的動(dòng) 物。由于用疫苗和藥物進(jìn)行預(yù)防及治療，或用淘汰帶菌動(dòng)物來(lái)作出 SPF 動(dòng)物的方法并不實(shí)用（既浪費(fèi)時(shí)間，又難保確實(shí)除去病原）。墊料和食物不經(jīng)高壓消毒，飲水為自來(lái)水，不喂青飼料。 Ⅳ級(jí)：即無(wú)菌（ Germ free,GE）動(dòng)物，在全封閉無(wú)菌條件下飼養(yǎng)的純系動(dòng)物，動(dòng)物體內(nèi)外不帶有任何微生物和寄生蟲(chóng)（包括絕大部分病毒）。 2．易感性高。 b) 病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 工序一 ： 雞胚選擇 受精卵必須來(lái)自 SPF 雞群，最低也應(yīng)來(lái)源于未用抗生素藥物的非免疫雞。領(lǐng)取的種毒應(yīng)按規(guī)定在細(xì)胞繼代適應(yīng)后作毒種，并應(yīng)按規(guī)定控制在一定代數(shù)之內(nèi)。微載體培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)我國(guó)仍處于試驗(yàn)之中。首先來(lái)了解下前兩種疫苗的起始原料 SPF 蛋。 根據(jù)益康工作人員的介紹，我們知道他們廠(chǎng)所用的 SPF 蛋都是他們廠(chǎng)自己生產(chǎn)的，因?yàn)樗麄冇凶约旱?SPF 養(yǎng)雞舍，這樣對(duì)他們來(lái)說(shuō)是很好的，因?yàn)樽约簭S(chǎng)子生產(chǎn)的蛋用著比較放心，而且最重要的是避免了雞蛋在運(yùn)輸途中的變 質(zhì)以及破損等事情的發(fā)生，增加了產(chǎn)品的質(zhì)量也減少了經(jīng)濟(jì)損失。滴鼻點(diǎn)眼時(shí)將疫苗準(zhǔn)確地滴在眼內(nèi)或鼻內(nèi)，等疫苗確實(shí)進(jìn)入鼻、眼內(nèi)才把雞放回地面，以免疫苗被雞甩出 ，造成免疫不確實(shí)。 e) 注射免疫 注射前要將注射器具徹底消毒，疫苗現(xiàn)配現(xiàn)用，疫苗用滅菌生理鹽水或涼開(kāi)水稀釋?zhuān)荒苡脽崴蚝鹊淖詠?lái)水作稀釋液，滅活疫苗要搖勻后才能使用；注射劑量要準(zhǔn)確，不能任意加大或減少疫苗用量；注射時(shí)操作要規(guī)范，頸部皮下注射應(yīng)提起皮膚掌握好角度，針頭刺入皮膚與肌肉之間，避免刺傷頸骨或穿針；肌肉注射應(yīng)根據(jù)雞齡大少確定實(shí)施部位，一般胸部龍骨肌肉最厚處注射， 避免破血管或內(nèi)臟器官，造成骨骼損傷及死亡，腿部注射應(yīng)在腿外側(cè)無(wú)血管處，進(jìn)針時(shí)順腿骨方向刺入，避免刺傷血管神經(jīng)。 實(shí)習(xí)地點(diǎn)㈡ ： 東北制藥廠(chǎng) VC 總公司 一、 吳春江老師 向我們 介紹 東北制藥廠(chǎng) ： 東北制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司創(chuàng)建于 1936 年，是中國(guó)化學(xué)制 藥工業(yè)的搖籃，是我國(guó)最大的以化學(xué)合成為主、兼有生物發(fā)酵和制劑產(chǎn)品的綜合性制藥工業(yè)企業(yè)之一，也是中國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)品重要的生產(chǎn)和出口基地。 截至目前，東北制藥先后有大批科研成果多次榮獲國(guó)家發(fā)明獎(jiǎng)、國(guó)家科技進(jìn)步獎(jiǎng)，其主導(dǎo)產(chǎn)品 —— 磷霉素鈉先后獲得國(guó)家科技成果獎(jiǎng)、遼寧省科技進(jìn)步獎(jiǎng)；其研制的國(guó)家一類(lèi)新藥“整腸生”是國(guó)際首創(chuàng)的活菌制劑，先后榮獲國(guó)家發(fā)明獎(jiǎng)、全軍科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)、遼寧省名牌產(chǎn)品等 27 項(xiàng)大獎(jiǎng)。醇濃度控制在 24~27%，培養(yǎng)溫度 29~30 ℃， 發(fā)酵罐容積 145 噸，料液 110 噸，發(fā)酵時(shí)間 20 個(gè)小時(shí)。 19 此步驟的生產(chǎn)流程可簡(jiǎn)單寫(xiě)為： D 葡萄糖 ? ?? H2 D 山梨醇???? ?? 黑醋桿菌發(fā)酵 L山梨糖 ??? ?? 大菌、小菌 2酮 L古龍酸鈉 ⑵ 提取 （ 2酮基 L古龍酸的分離提純 ） 經(jīng)二步發(fā)酵法兩次發(fā)酵以后，發(fā)酵液中僅含 8%左右的 2酮基 L古龍酸，且殘留菌絲體、蛋白質(zhì)和懸浮的固體顆粒等雜質(zhì)，常采用加熱沉淀法、化學(xué)凝聚法、超濾法分離提純。食物中的維生素 C 被人體小腸上段吸收。血管壁的強(qiáng)度和 VC 有很大關(guān)系。 4．預(yù)防動(dòng)脈硬化。曾有人對(duì)因癌癥死亡病人解剖發(fā)現(xiàn)病人體內(nèi)的 VC 含量幾乎為零。VC 能夠使雙硫鍵（ SS）還原為 SH，從而提高相關(guān)酶的活性，發(fā)揮抗氧化的作用。該狀態(tài)伴有一系列身體，包括交感神經(jīng)興奮、腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì)激素分泌增多。 24 圖 5 提取車(chē)間 五、 實(shí)習(xí)心得（將東北制藥集團(tuán)的發(fā)展與個(gè)人發(fā)展相結(jié)合）： 在聽(tīng)完吳老師給我們介紹東藥的發(fā)展歷程和參觀(guān)他們的生產(chǎn)車(chē)間后，我的感觸特別的深，并且了解到東藥不是一直都是那么順利的，它也有遇到挫折的時(shí)候，根據(jù)吳老師的講解和回去查閱資料，了解到由于 VC 項(xiàng)目的特點(diǎn)是參與國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)，確定項(xiàng)目時(shí) VC 產(chǎn)品價(jià)格高，約每公斤 110 元，廠(chǎng)家可以得到 50%的利潤(rùn)，所以，中國(guó)各地紛紛上馬 VC 項(xiàng)目，生產(chǎn)廠(chǎng)家從 10 家增長(zhǎng)到 29 家，生產(chǎn)能力從1990 年的 4300 噸增長(zhǎng)到 1996 年的 2 萬(wàn)噸，從而打破了原來(lái)的生產(chǎn)格局。但是，當(dāng)中國(guó)出口量達(dá) 1 萬(wàn)噸時(shí)，國(guó)際名牌企業(yè)也坐不住了。此外，再加上原材料能源的節(jié)約等，成本直線(xiàn)下降，達(dá)到每公斤 41 元甚至 39 元。 第二天： 在大家的討論和老師的指導(dǎo)下 將 15L 發(fā)酵罐組裝起來(lái) 、調(diào)節(jié)該儀器使其呈滅菌時(shí)的參數(shù)（圖 6）。 掌握小型發(fā)酵罐原位滅菌及發(fā)酵的操作過(guò)程 。用玻璃制成 的的大型發(fā)酵罐如氣升式發(fā)酵罐或泡罩罐的流量顯示裝置可以采用在空氣壓力下水蒸 29 氣滅菌幾個(gè)小時(shí)的方法進(jìn)行。原位滅菌的蒸汽可來(lái)自蒸汽或由電加熱器產(chǎn)生。但并不是任何情況下均可采用實(shí)罐滅菌，有時(shí)采用發(fā)酵罐和培養(yǎng)基分開(kāi)滅菌更合適。 （ 1）高壓蒸汽滅菌器滅菌 高壓蒸汽滅菌器的加熱方式通常會(huì)影響達(dá)到滅菌溫度的時(shí)間，在選擇高壓蒸汽滅菌器時(shí)應(yīng)注意到這一點(diǎn)。在同一個(gè)高壓蒸汽滅菌器中，將 10L 培養(yǎng)基分別裝在玻璃容器和聚丙烯容器中， 5L 培養(yǎng)基裝在玻璃容器中進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，容器中間部位的溫度達(dá)到 121℃時(shí)分別用了 80min， 160min，和 50min。在 配培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)該將這個(gè)體積變化考慮進(jìn)行，以防止滅菌后的稀釋或濃縮：按照產(chǎn)生體積變化的正負(fù)，相應(yīng)地將滅菌前培養(yǎng)基體積配多或配少。如果是進(jìn)行實(shí)消，則培養(yǎng)基應(yīng)該在此時(shí)加入。例外的是用于排氣的任何管路都必須開(kāi)口，如空氣出口管。許多高壓蒸汽滅菌器中都配有真空釋放閥，以便在真空中形成時(shí)迅速通入空氣。由于穩(wěn)定劑可以增加食品的粘稠性，固又稱(chēng)為曾調(diào)劑。 鮮奶暫存→鮮奶凈乳（凈乳機(jī)）→鮮奶冷卻→鮮奶暫儲(chǔ)→原輔料混配（高速攪 拌缸）→料液預(yù)熱（板式殺菌機(jī)）→料液均質(zhì)（高壓均質(zhì)機(jī)）→巴氏殺菌（管事殺菌機(jī)）→料液保溫殺菌（保溫殺菌管）→料液冷卻（板式熱交換器）→菌種投入（酸奶發(fā)酵罐）→保溫培養(yǎng)（酸奶發(fā)酵罐）→發(fā)酵終止（酸奶發(fā)酵罐）→半成品冷卻→暫存→無(wú)菌混料（半成品儲(chǔ)罐）→產(chǎn)品包裝（果料）→成品冷儲(chǔ)（淺冷庫(kù)房） 凝固型酸奶生產(chǎn)的前期工藝與攪拌型酸奶相同，在接種菌種并攪拌 10 分鐘后進(jìn)行灌裝。 ⑹ 蓋緊其他灌溉接口。 ⑸ 打開(kāi)任意一個(gè)放汽閥。為了安全，不要把發(fā)生器調(diào)整至 以上的壓力工作。 3. 啟動(dòng)攪拌馬達(dá)，調(diào)轉(zhuǎn)速 300r/min。 ⒑ 將 進(jìn)氣過(guò)濾器 K7 口與控制箱左側(cè)空氣出口連通，開(kāi)彈簧夾，對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行通氣，調(diào)整空氣流量 35L/min. ⒒ 關(guān) 閥 V3，消毒結(jié)束。 2. 補(bǔ)料操作 ⑴ 硅膠管安裝：將滅菌消毒的補(bǔ)料瓶及輸液管放置于擱架上，開(kāi)蠕動(dòng)泵透明的防護(hù)蓋，掰開(kāi)蠕動(dòng)泵進(jìn)出口處的白色管夾，將硅膠管（進(jìn)料瓶端）嵌入入口處的管夾，并使之夾緊，用手轉(zhuǎn)動(dòng)蠕動(dòng)泵泵頭， 同時(shí)將硅膠管沿蠕動(dòng)泵凹槽安裝直至蠕動(dòng)泵出口處，然后開(kāi)蠕動(dòng)泵手動(dòng)開(kāi)關(guān)約 10 秒鐘左右，再夾緊蠕動(dòng)泵出口處管夾，關(guān)閉手動(dòng)開(kāi)關(guān)。 ⑷ 取樣完畢后將 J J2 夾緊。 ① 發(fā)酵過(guò)程中的數(shù)據(jù)如上圖 9 所示，即：溫度： ℃ ； pH： ；轉(zhuǎn)速：83rpm 。 ② 在發(fā)酵結(jié)束后， 用 pH 試紙檢測(cè)取樣的 6 個(gè)試管中的樣品的 pH 值： 38 圖 13 發(fā)酵結(jié)果 發(fā)酵是從早上 9 點(diǎn)一直到下午的 3 點(diǎn)，在這 6 個(gè)小時(shí)中，每小時(shí)取樣一次，編號(hào) 16，從圖的左邊到右邊分別是 6 號(hào)，可以看出 pH 試紙的顏色逐漸變黃，范圍從 左右?？谖短鹚峥煽?，有香味。膳食纖維類(lèi)增稠劑包括海藻膠、果膠、植物種子膠、纖維素