第五章酶動力學引論-展示頁
2024-10-23 12:16本頁面
【正文】 水解時間( m i n )DH(%)E/S=12AU/KgE/S=24AU/Kg添加不同量的 Alcalase水解絲素的酶解進程曲線 pH對酶催化反應的影響 ? 影響酶的穩(wěn)定性 ? 影響酶與底物的結合以及酶催化底物轉變成產(chǎn)物 Note p1921 環(huán)境酸堿度影響蛋白質(zhì)的凈電荷 Juang RH (2004) BCbasics + Net Charge of a Protein Buffer pH Isoelectric point, pI 3 4 5 6 7 8 9 10 0 影響酶的 pH穩(wěn)定性 因素 ? 溫度 ? 是否存在輔助因子或其它小分子有關（ Ca+） ? 緩沖劑的種類和濃度 ? 底物存在與否 ? 介質(zhì)的離子強度 ? 介電常數(shù) ? pH對酶的輔助因子或活化劑穩(wěn)定性的影響 溫度 輔助因子 豬胰 ?淀粉酶（含鈣與否）的 pH穩(wěn)定性 酶在 250C不同 pH值保溫20小時，然后在最適 pH和含鈣條件下測定活力 酶的 pH穩(wěn)定性的實驗測定 ? 在不同的試管中加入同一種緩沖液，它們具有相同體積但不同的 pH ? 將試管置于恒溫水浴中平衡 ? 在各個試管中加入相同體積的待測定的酶液 ? 在同一個 pH和溫度下測定酶的殘存活力，這個 pH不一定是酶的最適 pH，但是酶在此 pH下必須是穩(wěn)定的 ? 根據(jù)上述實驗步驟所得數(shù)據(jù)，作酶的百分殘存活力的對數(shù) 保溫時間圖 ? 若僅測定一個保溫時間后的殘存酶活力，可僅作百分殘存活力 pH圖 酶在不同 pH下保溫時的失活速度 pH對酶催化反應速度的影響 ? pH對酶的活性部位中心質(zhì)子移變基團的離子化狀態(tài)的影響 ? pH對底物離子化狀態(tài)和反應的平衡位置 質(zhì)子供體 質(zhì)子受體 p Ka C OOH C OO (Asp)( Glu )N+H3NH21 0 .8SH S8 .3 31 2 .4 86 .0 0NH CN+H2N H2 N H CN HN H2N+HN HH NN參與酶催化的質(zhì)子移變基團 pH對 Chymotrypsin 活性的影響 5 6 7 8 9 10 11 pH 相對活性 Chymotrypsin 活性區(qū)的電子接力 Ser 195 His 57 Asp 102 H–O–CH2 O C–O = Active Ser H–N N C C C H H CH2 Ser 195 His 57 Asp 102 O–CH2 O C–O–H = N N–H C C C H H CH2 Histidine 上的 imidazole 基團 H–N N C C C H H H+ pH 6 pH 7 + H–N N–H C C C H H Inactive + Ser 195 His 57 Asp 102 H–O–CH2 O C–O = H–N N–H C CH C CH2 H Chymotrypsin 切出新的 Ile16 N端 I16 L13 Y146 Asp 194 –CH2COO Ile 16 NH2– Ile 16 + NH3– 5 6 7 8 9 10 11 pH 相對活性 pH 9 pH 10 pKa New NH2terminus Chymotrypsin 要先經(jīng)裂解後才有活性 245 R15I16 Chymotrypsinogen (inactive) pChy
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