第五章酶動(dòng)力學(xué)引論(完整版)
【正文】 添加不同量的 Alcalase水解絲素的酶解進(jìn)程曲線 pH對(duì)酶催化反應(yīng)的影響 ? 影響酶的穩(wěn)定性 ? 影響酶與底物的結(jié)合以及酶催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物 Note p1921 環(huán)境酸堿度影響蛋白質(zhì)的凈電荷 Juang RH (2004) BCbasics + Net Charge of a Protein Buffer pH Isoelectric point, pI 3 4 5 6 7 8 9 10 0 影響酶的 pH穩(wěn)定性 因素 ? 溫度 ? 是否存在輔助因子或其它小分子有關(guān)（ Ca+） ? 緩沖劑的種類(lèi)和濃度 ? 底物存在與否 ? 介質(zhì)的離子強(qiáng)度 ? 介電常數(shù) ? pH對(duì)酶的輔助因子或活化劑穩(wěn)定性的影響 溫度 輔助因子 豬胰 ?淀粉酶（含鈣與否）的 pH穩(wěn)定性 酶在 250C不同 pH值保溫20小時(shí)，然后在最適 pH和含鈣條件下測(cè)定活力 酶的 pH穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)測(cè)定 ? 在不同的試管中加入同一種緩沖液，它們具有相同體積但不同的 pH ? 將試管置于恒溫水浴中平衡 ? 在各個(gè)試管中加入相同體積的待測(cè)定的酶液 ? 在同一個(gè) pH和溫度下測(cè)定酶的殘存活力，這個(gè) pH不一定是酶的最適 pH，但是酶在此 pH下必須是穩(wěn)定的 ? 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)步驟所得數(shù)據(jù)，作酶的百分殘存活力的對(duì)數(shù) 保溫時(shí)間圖 ? 若僅測(cè)定一個(gè)保溫時(shí)間后的殘存酶活力，可僅作百分殘存活力 pH圖 酶在不同 pH下保溫時(shí)的失活速度 pH對(duì)酶催化反應(yīng)速度的影響 ? pH對(duì)酶的活性部位中心質(zhì)子移變基團(tuán)的離子化狀態(tài)的影響 ? pH對(duì)底物離子化狀態(tài)和反應(yīng)的平衡位置 質(zhì)子供體 質(zhì)子受體 p Ka C OOH C OO (Asp)( Glu )N+H3NH21 0 .8SH S8 .3 31 2 .4 86 .0 0NH CN+H2N H2 N H CN HN H2N+HN HH NN參與酶催化的質(zhì)子移變基團(tuán) pH對(duì) Chymotrypsin 活性的影響 5 6 7 8 9 10 11 pH 相對(duì)活性 Chymotrypsin 活性區(qū)的電子接力 Ser 195 His 57 Asp 102 H–O–CH2 O C–O = Active Ser H–N N C C C H H CH2 Ser 195 His 57 Asp 102 O–CH2 O C–O–H = N N–H C C C H H CH2 Histidine 上的 imidazole 基團(tuán) H–N N C C C H H H+ pH 6 pH 7 + H–N N–H C C C H H Inactive + Ser 195 His 57 Asp 102 H–O–CH2 O C–O = H–N N–H C CH C CH2 H Chymotrypsin 切出新的 Ile16 N端 I16 L13 Y146 Asp 194 –CH2COO Ile 16 NH2– Ile 16 + NH3– 5 6 7 8 9 10 11 pH 相對(duì)活性 pH 9 pH 10 pKa New NH2terminus Chymotrypsin 要先經(jīng)裂解後才有活性 245 R15I16 Chymotrypsinogen (inactive) pChymotrypsin (active) S14R15 T147N148 Trypsi
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