第五章酶動力學(xué)引論-文庫吧資料
2024-10-19 12:16本頁面
【正文】 同的時間間隔，依次取出一定量的酶液置于冰浴中保存，或直接加入到含有底物的反應(yīng)混合物中 ? 在相同的 pH和溫度下（酶在此條件下是穩(wěn)定的）測定殘存酶活力 （只能測定酶的不可逆變性；未考慮底物可能對酶穩(wěn)定性的影響） 溫度對反應(yīng)速度的影響 ? 定量表示 Q10=(速度） t+10/(速度 )t ? 大多數(shù)酶催化反應(yīng) Q10的范圍為 2－ 3 Arrhenius 方程式 Enzyme Optimum temperature (oC) Trypsin 37 Pectinase 5055 Alcalase 5560 蛋白 最適溫度（ ℃ ） 大豆蛋白 55 絲素 ？ Alcalase： 55~60℃ 舉例 絲素濃度 S為 8%， E/S=12AU/Kg， pH 9 051015200 100 200 300 水解時間( m i n )DH(%)65℃60℃55℃50℃45℃ Alcalase在不同溫度下水解絲素的進(jìn)程曲線 最適溫度的確定 Enzyme experiment of catalase Enzyme Inhibition Reversible Inhibition Competitive inhibition Nonpetitive inhibition Irreversible Inhibition O (CH3)2CH–O– P –O–CH(CH3)2 F = Chymotrypsin Ser195 被 DIFP 抑制 Diisopropylfluorophosphate (DIFP) O…H CH2 Ser 195 O (CH3)2CH–O– P –O–CH(CH3)2 = O CH2 Ser 195 X 添加底物可抵抗酶競爭性抑制劑 Reaction time 酶活被抑制程度 (%) 100 50 0 不加 底物 添加基質(zhì) S + DIFP + DIFP amp。 Km在實(shí)際應(yīng)用中的作用 ? 鑒定酶 ? 判斷酶的最適底物 ? 計算一定反應(yīng)速度下的底物濃度 ? 了解酶的底物在體內(nèi)具有的濃度水平 ? 判斷反應(yīng)方向或趨勢 ? 判斷抑制類型 是否復(fù)合 MM方程 Note part210 某酶促反應(yīng)遵從 MichaelisMenten動力學(xué)，酶的 Km為 104mol/L，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?，其反應(yīng)速度為 128?mol毫升 1分鐘 1，若底物濃度為 104mol/L后，其反應(yīng)速度為多少？ 如果一酶促反應(yīng) [S]=m， 則 V值等于多少 Vmax? 米氏方程的求法 LineweaverBurk plot An EadieHofstee plot v=Km(v/[S])+Vmax Random substrate binding （隨機(jī)機(jī)制） Ordered substrate binding （有序機(jī)制） 雙底物反應(yīng)的反應(yīng)機(jī)理 N 12 The pingpong mechanism eg. chymotrypsin Enzyme kiics experiment 酶濃度反應(yīng)初速度條件： 無干擾因素存在 ， [S]Km 應(yīng)用：酶活力測定（在一定時間內(nèi)產(chǎn)物的數(shù)量與酶濃度呈正比） S： 8%， pH9， T=60℃ 051015200 50 100 150 200 250 300
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