【正文】 定。發(fā)酵罐及其閥門應(yīng)采用蒸汽徹底滅菌。1．藥品生產(chǎn)檢查淮南國承認(rèn)公約（PIC）1992年頒布的《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范指南》“廠房和設(shè)備”中要求：生物制品生產(chǎn)管路系統(tǒng)、閥門和通風(fēng)口過濾器的設(shè)計(jì)都應(yīng)便于清潔和滅菌。三、設(shè)備[檢查要點(diǎn)]設(shè)備的設(shè)計(jì)、選型和安裝應(yīng)有利于避免交叉污染、避免差錯(cuò)并便于清潔及日常維護(hù)。再如日本、歐盟等國家和地區(qū)，到目前為止，對生產(chǎn)用胚數(shù)量巨大的流行性感冒疫苗和水痘疫苗也沒有完全采用SPF雞胚。由于到目前為止，能繁殖和供應(yīng)清潔級以上小鼠、大白鼠和豚鼠的，國內(nèi)只有中檢所等少數(shù)幾家單位。上述四個(gè)等級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評定標(biāo)準(zhǔn)，以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施要求，國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理部門均已制定有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。（4）無菌動(dòng)物（四級動(dòng)物）：無可檢定的一切微生物體，無菌動(dòng)物必須在規(guī)定潔凈級別的隔離系統(tǒng)內(nèi)繁殖飼養(yǎng)。（2）清潔級動(dòng)物（二級動(dòng)物）；除應(yīng)排除人畜共患病及動(dòng)物烈性傳染病原體外，還應(yīng)排除影響動(dòng)物健康的動(dòng)物傳染病及對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響大的疾病原體；清潔級動(dòng)物須在有相應(yīng)潔凈級別的亞屏障系統(tǒng)內(nèi)繁殖飼養(yǎng)。解釋說明1． 生物制品生產(chǎn)及檢定所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按其所攜帶的微生物可分為四個(gè)不同等級。因此，GMP認(rèn)證檢查時(shí)，應(yīng)要求被檢查單位提供省級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理部門核發(fā)的“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物登記合格證書”和“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件可許證書”。*3003 生物制品所使用動(dòng)物的飼養(yǎng)管理要求，是否符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理規(guī)定。因此，3002項(xiàng)宜改為“用于生物制品生產(chǎn)的動(dòng)物的繁殖飼養(yǎng)區(qū)、質(zhì)量檢定動(dòng)物室是否與制品生產(chǎn)區(qū)各自分開”。如現(xiàn)行的人用狂犬病疫苗、腎綜合征出血熱滅活疫苗，乙型腦炎減毒活疫苗，乙型腦炎滅活疫苗、森林腦炎滅活疫苗、猴腎脊髓灰質(zhì)炎活疫苗等，都是將疫苗生產(chǎn)用病毒株接種感染地鼠腎細(xì)胞或沙鼠腎細(xì)胞或猴腎細(xì)胞。*3302 用于生物制品生產(chǎn)的動(dòng)物室、質(zhì)量檢定動(dòng)物室是否與制品生產(chǎn)區(qū)各自分開。4． 微生物限度檢查時(shí)，其被檢測樣品是非無菌制劑，檢測標(biāo)準(zhǔn)允許有限量的真菌或非致病的雜菌存在，因此，微生物限度檢查與生物制品無菌試驗(yàn)的目的和要求是截然不同的，可在100，000級潔凈室中的100級潔凈工作臺進(jìn)行。2． 對用于生產(chǎn)的主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞、培養(yǎng)液以及臨床治療用細(xì)胞進(jìn)行支原體檢查時(shí)（包括培養(yǎng)法或DNA染色法）應(yīng)在專用100級的潔凈操作室或萬級潔凈室中的100級潔凈工作臺進(jìn)行。1． 生物制品無菌試驗(yàn)應(yīng)在專用100級潔凈室或萬級潔凈室中的100級潔凈工作臺進(jìn)行。生物檢定：采用微生物、細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物來檢定或判定制品效價(jià)及安全性的方法稱為生物檢定法。[解釋說明]生物制品不得含有雜菌（有專門規(guī)定者除外），滅活疫苗不得含有活的該菌或活的該病毒。WHO于1994年頒布的《生物制品生產(chǎn)企業(yè)GMP檢查指南》對生物制品生產(chǎn)廠房的設(shè)計(jì)亦要求能進(jìn)行薰蒸消毒。其他用于加工處理活生物體的玻璃器皿和不銹鋼用具等亦應(yīng)在操作區(qū)內(nèi)先經(jīng)過高壓消毒或化學(xué)消毒后才能清洗。因?yàn)榻?jīng)常要進(jìn)行清潔消毒，地面、物體和天棚等應(yīng)采用能耐受消毒劑或熏蒸消毒的材料。*2221 用于加工處理活生物體的生物制品生產(chǎn)操作區(qū)和設(shè)備是否便于清潔和去除污染，能耐受熏蒸消毒。2． 該生物安全防護(hù)操作區(qū)，應(yīng)設(shè)有高壓蒸汽菌鍋或化學(xué)消毒裝置來對廢棄物進(jìn)行消毒處理。來自危險(xiǎn)度二類以上病原體，是指按《中國醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理辦法》所規(guī)定的第一類和第二類所列的細(xì)菌或病毒。*2220 來自危險(xiǎn)度為二類以上病原體的空氣是否通過除菌過濾器排放，濾器的性能是否定期檢查。詳見2204項(xiàng)第3款的要求。為了適應(yīng)滅活疫苗的生產(chǎn)工藝流程的連續(xù)性，在設(shè)計(jì)和建造滅活疫苗生產(chǎn)車間時(shí)，必須將該滅活疫苗生產(chǎn)車間，分隔成有菌（毒）操作區(qū)與無菌（毒）操作區(qū)兩個(gè)獨(dú)立的部分，有各自獨(dú)立的空氣凈化系統(tǒng)。在第二階段，細(xì)菌原液或病毒原液收獲后，加入一定量甲醛或其他適宜滅火劑，在規(guī)定溫度和規(guī)定時(shí)間內(nèi)將活的細(xì)菌或活得病毒全部殺死，這時(shí)活菌體或活病毒體即變成無活菌或無活病毒了，又稱之謂“死菌”或“死毒”。*2219 有菌（毒）操作區(qū)與無菌（毒）操作區(qū)是否有各自獨(dú)立的空氣凈化系統(tǒng)，來自病原體操作區(qū)的空氣是否循環(huán)使用。2．對操作上述第一類或第二類有致病作用的活細(xì)菌或活病毒，須在專門區(qū)域 內(nèi)進(jìn)行，該操作區(qū)與相鄰區(qū)域要保持相對負(fù)壓。*2218 操作有致病作用的微生物是否在專門的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，是否保持相對負(fù)壓。各種滅活疫苗、類毒素（脫毒處理后的毒素）及細(xì)胞提取物，均不含有致病性活細(xì)菌或活病毒所具有的致病因子，因此，只要對這些制品制備過程中進(jìn)行有效滅活或消毒，即可以與其他無菌制品交替使用公用的灌裝間、灌裝設(shè)施和凍干設(shè)施。*2217 各種滅活疫苗（包括重組DNA產(chǎn)品）、類毒素及細(xì)胞提取物，在其滅活或消毒后可以與其他無菌制品交替使用同一灌裝間和灌裝、凍干設(shè)施。因此，可以允許一些產(chǎn)品在同一發(fā)酵車間內(nèi)生產(chǎn)或者同時(shí)在同一發(fā)酵車間的不同密封系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行生產(chǎn)。*2216 使用密封系統(tǒng)生物發(fā)酵罐生產(chǎn)生物制品可以在同一區(qū)域同時(shí)生產(chǎn)（如單克隆抗體和重組DNA制品）1．我國現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和國際上通行的《藥品生產(chǎn)檢查互相承認(rèn)公約（PIC）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范指南》、歐共體《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》等均明確規(guī)定：使用生物發(fā)酵罐密封系統(tǒng)的一些制品可以在同一區(qū)域或者同時(shí)生產(chǎn)，如單克隆抗體和重組DNA產(chǎn)品。（3）新建、改建或者擴(kuò)建的血液制品生產(chǎn)單位，須經(jīng)國務(wù)院衛(wèi)生行政主管部門進(jìn)行立項(xiàng)審查，依照《藥品管理法》規(guī)定審核批準(zhǔn)；（4）血液制品生產(chǎn)單位必須達(dá)到國家《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)審查合格，方可從事血液制品生產(chǎn)。3． 為加強(qiáng)血液制品管理，預(yù)防和控制經(jīng)血液途徑傳播的疾病，1996年12月30日國務(wù)院頒布的《血液制品管理?xiàng)l例》規(guī)定。2． 人血漿蛋白和動(dòng)物蛋白屬于不用種屬免疫原，如果動(dòng)物蛋白混入人血漿制品，會(huì)造成嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。上述以人血、人血漿為原材料制備的血液制品、細(xì)胞因子都是采用大批量混合人血漿、血液組成成分來制備，而人血液可能被各種病原體所污染，特別是被經(jīng)血液傳播的相關(guān)病毒污染。1． 由于人血漿有潛在的病毒污染危害，所以不能與其他生物制品共用相同的生產(chǎn)設(shè)備。*2215 以人血、人血漿或動(dòng)物臟器、組織為原料生產(chǎn)的制品是否使用專用設(shè)備，是否與其他生物制品的生產(chǎn)嚴(yán)格分開。（5）生產(chǎn)用菌、毒種種子批和細(xì)胞種子庫，至少制備雙份，分別貯存于兩個(gè)適宜貯存條件的專門地方，以防止因低溫冰箱停電或液氮罐內(nèi)液氮干涸造成生產(chǎn)用菌毒種和細(xì)胞等變異和死亡。（3）各種病毒所適應(yīng)不同細(xì)胞的原始細(xì)胞庫、主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫一般保存于液氮罐內(nèi)。l 主細(xì)胞庫（Master Cell Bank）：由原始細(xì)胞庫的細(xì)胞制備而成，分裝于容器內(nèi)，組成均一。（2）細(xì)胞庫系統(tǒng)亦分為三級。一般凍干的細(xì)菌種子批在2~8攝氏度保存，有些細(xì)菌的菌種如鉤端螺旋體部分血清型菌種，真空冷凍干燥不能存活，仍需在相應(yīng)斜面或半固體中保存。一定數(shù)量的源自主種子批的細(xì)菌菌株、病毒株，每批制備應(yīng)達(dá)到一定數(shù)量、組成均一，并經(jīng)全面檢定合格。每次生產(chǎn)時(shí)從主種子批中取出1支或數(shù)支用于制備生產(chǎn)疫苗用功能工作種子批。l 原始種子批（Primary Seed Lot）：一定數(shù)目已驗(yàn)明其來源、歷史和生物特性的細(xì)菌菌株或病毒株，并經(jīng)臨床研究證明其安全性和免疫原性良好的細(xì)菌菌株或病毒株，該原始種子應(yīng)確保組成單一，并經(jīng)充分簽定。3．儲(chǔ)存設(shè)施和方法應(yīng)符合要求。非指定的其他人，未經(jīng)企業(yè)主管領(lǐng)導(dǎo)特別批準(zhǔn) 一律不得進(jìn)入該庫重地。因?yàn)榫痉N和細(xì)胞的標(biāo)簽或標(biāo)牌字跡不清往往導(dǎo)致發(fā)生菌毒種或細(xì)胞差錯(cuò)，造成不可彌補(bǔ)的責(zé)任事故。1．生物制品生產(chǎn)企業(yè)必須指派專人對其保存的生產(chǎn)用菌毒種和細(xì)胞的容器貼上或固定上該菌毒種和細(xì)胞的標(biāo)示明確的標(biāo)簽或標(biāo)牌。陽性對照血清有感染性，為確保HIV試劑生產(chǎn)人員和檢測人員的安全和防止污染環(huán)境，陽性樣品處理應(yīng)在萬級潔凈區(qū)，并保持相對負(fù)壓。（2）目前用于艾滋病檢測主要診斷試劑為人免疫缺陷病毒抗體診斷酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒，該試劑盒由用人免疫缺陷病毒I型和II型（HIV1和HIV2）抗原（合成肽或基因重組蛋白）包被的微孔板和酶標(biāo)記抗人IgG及其他試劑組合而成，應(yīng)用間接法原理（ELISA法）來檢測人血清或血漿中的HIV1和HIV2抗體，這種HIV的ELISA試劑盒式用于初篩檢測用，如要對艾滋病確定診斷還要用艾滋病確診試劑。（1）人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）, 又稱艾滋病病毒，有I型和II型兩個(gè)亞型（HIV1和HIV2），是20世紀(jì)70年代末到80年代初，法國和美國學(xué)者發(fā)現(xiàn)的危害全人類生病健康的極其嚴(yán)重的傳染病病原體。*2213 生產(chǎn)人免疫缺陷病毒（HIV）等檢測試劑，在使用陽性樣品時(shí)，是否有符合相應(yīng)規(guī)定的防護(hù)措施和設(shè)施。（2）PCR技術(shù)對目的靶DNA識別的檢測靈敏度雖然極高，可以在分子水平上對極微量檢測對象靶DNA進(jìn)行識別和檢測，但是對參與聚合酶鏈反應(yīng)各種試劑純度要求極高，試劑初度不高，尤其含有有機(jī)物等雜質(zhì)，常易導(dǎo)致假陽性結(jié)果；另外，采用PCR技術(shù)對被檢測物進(jìn)行檢測時(shí)，需要使目的靶DNA拷貝數(shù)大大增加，大量靶DNA可以通過氣溶膠微細(xì)顆粒彌散在檢測實(shí)驗(yàn)室大氣中，造成交叉污染，導(dǎo)致假陽性檢測結(jié)果。引物可以識別靶DNA，以單鏈DNA為模板合成一條新的DNA鏈，使目的靶DNA的拷貝數(shù)大大增加，從而使病毒或微生物DNA分子較易檢測出來，這種核酸檢測技術(shù)稱之謂聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。1．為避免靶DNA擴(kuò)增時(shí)形成的氣溶膠所造成的交叉污染，聚合酶鏈反應(yīng)試劑（PCR）生產(chǎn)車間應(yīng)遠(yuǎn)離PCR檢查實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)在PCR試劑生產(chǎn)車間外的建筑物內(nèi)設(shè)置PCR檢查或檢測實(shí)驗(yàn)室。4．生物制品生產(chǎn)過程中生產(chǎn)的污物和廢棄物，特別是帶有活生物體的污染物，如不能原位消毒處理，需運(yùn)送到別處消毒時(shí)，須放置在密閉容器內(nèi)，用專用運(yùn)輸工具走污物通道，以避免污染擴(kuò)散和交叉污染。需要消毒的地方，應(yīng)選擇多種消毒方法交替進(jìn)行以避免生產(chǎn)耐藥菌株。生產(chǎn)設(shè)備的配置和維修應(yīng)在重新裝配好后再進(jìn)行消毒滅菌，以防止在設(shè)備重新裝配過程中發(fā)生污染。1． 所有用于生產(chǎn)的設(shè)備，包括蒸汽滅菌柜、干烤箱、空氣過濾系統(tǒng)、水處理系統(tǒng)、除菌過濾及超濾設(shè)備、洗瓶及灌封系統(tǒng)、凍干機(jī)等均應(yīng)定期進(jìn)行維修、保養(yǎng)和驗(yàn)證。5． 高壓蒸汽消毒滅菌和間歇滅菌法均進(jìn)行驗(yàn)證。因此，芽胞菌類制品生產(chǎn)最好安排在一定時(shí)間內(nèi)集中生產(chǎn)。2． 芽胞菌生產(chǎn)車間只能專用，其他制品不能也不允許利用芽胞菌生產(chǎn)車間來進(jìn)行生產(chǎn)。*2210 設(shè)備專用于生產(chǎn)孢子形成體，當(dāng)加工處理一種制品時(shí)是否集中生產(chǎn)，某一設(shè)施或一套設(shè)施中分期輪換芽胞菌制品時(shí)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)是否只生產(chǎn)一種制品。1．本《檢查指南》2205項(xiàng)中已陳述：炭疽桿菌、肉毒梭狀芽胞桿菌和破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌等在一定條件能形成芽胞，芽胞對外界環(huán)境抵抗力極強(qiáng)，用一般常規(guī)清潔消毒方法不能將其殺滅，因此，生產(chǎn)炭疽、肉毒及破傷風(fēng)芽胞菌制品必須在其專用生產(chǎn)廠房內(nèi)進(jìn)行。4． 卡介苗、結(jié)核菌素的生產(chǎn)設(shè)備要專用。2． 卡介苗生產(chǎn)廠房必須與結(jié)核菌類制品生產(chǎn)車間嚴(yán)格分開。 Guerin, BCG）是采用減毒的卡介菌制備的減毒活疫苗，是給廣大嬰幼兒皮內(nèi)注射接種的4種EPI制品之一，以預(yù)防結(jié)核菌感染。只有這樣，才能確保這些強(qiáng)毒細(xì)菌和病毒活生物體，只局限于規(guī)定的隔離或封閉系統(tǒng)內(nèi)，不致擴(kuò)散或逃逸出來。*2207 生物制品生產(chǎn)過程中使用某些特定活生物體階段的設(shè)備是否專用是否在隔離或封閉系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行。2．生物制品生產(chǎn)過程中涉及高危致病因子的操作，其空氣凈化系統(tǒng)、人流、物流應(yīng)全部分開。*2206各類生物制品生產(chǎn)過程中涉及高危致病因子的操作，其空氣凈化系統(tǒng)等設(shè)施是否符合特殊要求。（5）芽胞菌制品生產(chǎn)操作中需重復(fù)使用的物料和用具必須與其他制品生產(chǎn)所用的物料分開。（3）芽胞菌操作區(qū)須有獨(dú)立空氣凈化系統(tǒng)，不得采用部分回風(fēng)循環(huán)空氣凈化系統(tǒng)。（1）生產(chǎn)炭疽桿菌、破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌等芽胞菌的建筑物須與其他生物制品生產(chǎn)廠房分開。高壓蒸汽滅菌和焚燒是殺死細(xì)菌芽胞的最有效手段。芽胞菌在對其不利生存條件下形成芽胞，而使芽胞菌生存下來的這種固有特性是其他細(xì)菌所沒有的。（如肉毒酸菌、破傷風(fēng)梭菌等厭芽胞菌），在對其生長繁殖不利條件下，諸如營養(yǎng)物質(zhì)缺乏，特別是氮源或碳源營養(yǎng)物質(zhì)都缺乏，代謝產(chǎn)物逐漸增加，譯碼繁殖體的基因組受到抑制，而譯碼芽胞有關(guān)成分的基因組則被激活，致使原來的桿菌或梭狀菌體變成圓形或卵圓形小體，稱為芽胞。1．有些細(xì)菌在一定條件下變成圓形或卵圓形的小體，稱之為芽胞。（12）生物制品生產(chǎn)過程忠的生物安全防護(hù)應(yīng)按照“微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則”辦理。（10）操作區(qū)的排風(fēng)必須經(jīng)過高效過濾和經(jīng)驗(yàn)證的滅活方法進(jìn)行處理，如火焰滅活或消毒劑滅活，以不低于12m/s的速度直接向空氣中排放。（8）為確保操作區(qū)的氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域，不應(yīng)采用上送上排的通風(fēng)設(shè)計(jì)。（6）相對實(shí)驗(yàn)操作間外部，操作間內(nèi)部保持負(fù)壓，相對壓強(qiáng)以30Pa~40Pa為宜，緩沖間相對壓強(qiáng)以15Pa~20Pa為宜。（4）操作區(qū)應(yīng)設(shè)有高壓滅菌鍋或化學(xué)清潔裝置等對廢棄物進(jìn)行原位清毒處理。（2）進(jìn)入生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室，必須通過緩沖通道，通道設(shè)兩道連鎖門，在緩沖間進(jìn)行更衣。為確?！皬?qiáng)毒微生物”操作區(qū)操作的活生物體不向外擴(kuò)散逃逸，在建造“強(qiáng)毒微生物”操作間或生產(chǎn)制備間時(shí)，必須設(shè)置氣閘和緩沖區(qū)，與其相鄰區(qū)域保持相對負(fù)壓，并建立處理突發(fā)事故的相應(yīng)規(guī)程和有效措施。（6）不允許進(jìn)行兩個(gè)菌株完整基因組的重組試驗(yàn)。（4）四類：生物制品、菌苗、疫苗生產(chǎn)用各種減毒、弱毒菌種及不屬于上述一、二、三類的各種低致病性的微生物菌種。（3）三類：僅具一般性危險(xiǎn)，能引起實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會(huì)較少，一般的俄微生物實(shí)驗(yàn)室采用一般實(shí)驗(yàn)技術(shù)能控制感染或有對之有效的免疫預(yù)防方法的菌種。（2）二類：實(shí)驗(yàn)室感染的機(jī)會(huì)較多，感染后癥狀較重及危及生命，發(fā)病后不易治療及對人群危害較大的傳染病毒種。（1）一類：實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會(huì)多，感染后發(fā)病的可能性大，癥狀重并能危及生命，缺乏有效的預(yù)防方法，傳染性強(qiáng)，對人群危害性大的烈性傳染病，包括國內(nèi)未發(fā)現(xiàn)或雖已發(fā)現(xiàn)，但無有效防治方法的烈性傳染病。菌種分類是根據(jù)其危害性決定（包括實(shí)驗(yàn)室感染和感染后發(fā)病的可能性、癥狀輕重及愈后情況、有無