【正文】 結(jié)果重現(xiàn)性好，就需要選用一定活性的氧化鋁。④計(jì)算并比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。②經(jīng)氨氣熏后再觀察。計(jì)算并比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點(diǎn)之間剪開(kāi)，分別顯色。HOOOH OH 蕓香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖槲皮素 R=H五、實(shí)驗(yàn)步驟（一）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定點(diǎn)樣：取新華一號(hào)色譜濾紙，規(guī)格20cm20cm，在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點(diǎn)上下列樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）糖樣品溶液（2）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（3）標(biāo)準(zhǔn)鼠李糖溶液（4）蕓香苷樣品甲醇溶液（5）蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（6）槲皮素樣品甲醇溶液（7）槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液展開(kāi)劑：正丁醇醋酸水（4：1：5）上層上行展開(kāi)。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，黃色針狀結(jié)晶，℃（分解）。蕓香苷（rutoside），分子式C27H30O16，淡黃色針狀結(jié)晶，~178℃。三、儀器設(shè)備烘箱，水浴鍋，鐵架臺(tái)，燒杯，三角燒瓶，濾紙，試管，層析槽，毛細(xì)管等。二、實(shí)驗(yàn)原理由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制。（2）了解由蕓香苷水解制取槲皮素的方法?？己朔謱?shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)、實(shí)驗(yàn)過(guò)程操作、實(shí)驗(yàn)報(bào)告等三個(gè)方面，其成績(jī)計(jì)算為預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)占20%（包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程）、實(shí)驗(yàn)過(guò)程操作占40%（包括數(shù)據(jù)記錄、解決問(wèn)題的能力）、實(shí)驗(yàn)報(bào)告占40%（包括實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果）。試討論苷類成分的檢識(shí)程序。（六）實(shí)驗(yàn)流程 槐花米50g2g蕓香苷粗品 甲醇重結(jié)晶 2%硫酸，放冷抽濾 精制蕓香苷濾液（糖類）沉淀（苷元）95%乙醇重結(jié)晶鑒定反應(yīng) 槲皮素精制品六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求應(yīng)包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問(wèn)題的能力、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果及建議等。比較蕓香苷和槲皮素的不同。鋯檸檬酸反應(yīng)：取樣品1mg，加乙醇2ml，在水浴上加熱溶解，再加2%二氯氧鋯甲醇溶液3~4滴，凡有3羥基或5羥基的黃酮即呈鮮黃色。如用鋅粉代替鎂粉，則蕓香苷（3羥基與糖結(jié)合成苷）仍有作用，而槲皮素（黃酮醇類）不呈還原顯色反應(yīng)。鹽酸鎂粉反應(yīng)：取蕓香苷1mg，加乙醇2ml，在水浴上加熱溶解，加鎂粉約50mg，滴加數(shù)滴濃鹽酸，溶液由黃色漸變紅色者表示有黃酮類化合物。充分加熱作用后濾去沉淀，濾液滴加濃鹽酸酸化，在水浴上加熱水解，水解液以10% NaOH中和，再進(jìn)行斐林氏試驗(yàn)，此時(shí)顯陽(yáng)性反應(yīng)者表示樣品為糖苷化合物。觀察兩層溶液的界面變化，出現(xiàn)紫色環(huán)者為陽(yáng)性，表示樣品分子中含有糖的結(jié)構(gòu)（糖和苷類均呈陽(yáng)性反應(yīng)），比較蕓香苷和槲皮素的不同。Molish反應(yīng)：取試樣1mg置小試管中，加α萘酚試劑1~2滴，搖勻。溶解的溶液應(yīng)呈黃色。④計(jì)算并比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。②經(jīng)氨氣熏后再觀察。計(jì)算并比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點(diǎn)之間剪開(kāi)，分別顯色。（四）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定點(diǎn)樣：取新華一號(hào)色譜濾紙，規(guī)格20cm20cm，在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點(diǎn)上下列樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）糖樣品溶液（2）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（3）標(biāo)準(zhǔn)鼠李糖溶液（4）蕓香苷樣品甲醇溶液（5）蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（6）槲皮素樣品甲醇溶液（7）槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液展開(kāi)劑：正丁醇醋酸水（4：1：5）上層上行展開(kāi)。必要時(shí)結(jié)晶再用甲醇重結(jié)晶一次。（三）蕓香苷、槲皮素重結(jié)晶稱取蕓香苷粗品2克，加甲醇50ml，加熱溶解，趁熱過(guò)濾，濾液濃縮一半，6 放置析晶，過(guò)濾。HOOOH OH 蕓香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖 槲皮素 R=H五、實(shí)驗(yàn)步驟（一）蕓香苷的提?。ㄋ崛》ǎ┓Q取槐花米50克，置1000ml燒杯中，加沸水800ml，加熱保持微沸1小時(shí)趁熱用棉花過(guò)濾，濾渣再加600ml水煮沸1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并2次濾液放置過(guò)夜，析出大量淡黃色沉淀，抽濾，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空氣中干燥即得粗蕓香苷，稱重計(jì)算得率。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，黃色針狀結(jié)晶，℃（分解）。蕓香苷（rutoside），分子式C27H30O16，淡黃色針狀結(jié)晶，~178℃。三、儀器設(shè)備單口圓底燒瓶，冷凝管，鐵架臺(tái)，燒杯，電爐，烘箱，水浴鍋，三角燒瓶，濾紙，微量抽濾器，布氏漏斗，試管，層析槽，石棉網(wǎng)，毛細(xì)管等。（4）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識(shí)方法。（2）掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。考核分實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)、實(shí)驗(yàn)過(guò)程操作、實(shí)驗(yàn)報(bào)告等三個(gè)方面，成績(jī)計(jì)算為預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)占20%（包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程）、實(shí)驗(yàn)過(guò)程操作占40%（包括數(shù)據(jù)記錄、解決問(wèn)題的能力）、實(shí)驗(yàn)報(bào)告占40%（包括實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果）。七、思考題粉防己堿和防己諾林堿在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有何異同點(diǎn)？實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)怎樣利用它們的共性及個(gè)性進(jìn)行提取分離？請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)方案。薄層色譜吸附劑：中性氧化鋁（Ⅲ級(jí)）干法制版 樣品：（1）粉防己堿（2）防己諾林堿（3）總提取物（均以氯仿溶解）展開(kāi)劑：氯仿—丙酮—苯（3：1：4）顯色劑：噴以改良碘化鉍鉀試劑（干法鋪板顯色時(shí)，要在溶劑未干前噴顯色劑，否則氧化鋁粉末易飛散，使薄層破壞）。（4）雷氏銨鹽試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液（PH4~5）1ml，加雷氏銨鹽試劑數(shù)滴，生成黃紅色沉淀者為陽(yáng)性反應(yīng)，表示有生物堿存在。（2）碘化鉍鉀試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液1ml，加碘化鉍鉀試劑（Dragendorff氏試劑）1~2滴，出現(xiàn)棕黃至棕紅色沉淀者為陽(yáng)性反應(yīng)，表示有生物堿存在。苯不溶物待揮發(fā)去殘留的苯后，也用丙酮重結(jié)晶，可得粒狀結(jié)晶，為防己諾林堿。粉防己堿和防己諾林堿的分離苯冷浸法：取上述結(jié)晶狀混合物堿稱重，置于50ml三角瓶中，加5倍量的苯冷浸，時(shí)時(shí)振搖，冷浸半小時(shí)后，過(guò)濾分開(kāi)苯溶液和苯不溶物。母液再濃縮重復(fù)收集，尚可得結(jié)晶。叔胺生物堿的純化在盛有非酚性生物堿的圓底燒瓶中，加丙酮加熱溶解，過(guò)濾，用熱丙酮洗滌濾紙，濾液、洗液合并，回收丙酮至適量，放冷，加塞靜置待結(jié)晶析出。2%氫氧化鈉提取液合并后取出少量，加鹽酸酸化后進(jìn)行生物堿反應(yīng)。分取氯仿層，加無(wú)水碳酸鉀脫水干燥，過(guò)濾，濾液常壓下回收氯仿。后者取出少量，加鹽酸酸化至PH4~5，滴加雷氏銨鹽飽和水溶液，觀察有無(wú)沉淀出現(xiàn)。分取氯仿層，氨堿性水溶液再以新鮮氯仿萃取數(shù)次，每次用氯仿100ml，直至氯仿抽提液的生物堿反應(yīng)微弱時(shí)止（檢查時(shí)取少量氯仿抽提液置表面皿上，待溶劑揮干，殘留物中加稀鹽酸數(shù)滴使溶解，再加生物堿沉淀試劑試之），合并氯仿液。（二）生物堿的分離親脂性生物堿和親水性生物堿的分離糖漿狀總提取物移至大三角燒瓶中，逐漸加入1%鹽酸稀釋，充分?jǐn)嚢枋股飰A溶解，不溶物呈樹(shù)脂狀析出，直至加酸水溶液不再發(fā)生混濁為止（約需300ml），靜置，傾出上清液，瓶底的樹(shù)脂狀雜質(zhì)以1%鹽酸少量分次洗滌，直至洗液對(duì)生物堿沉淀試劑反應(yīng)微弱時(shí)為止。水浴加熱回流1小時(shí)（加熱期間振搖數(shù)次），濾出提取液，藥渣再加95%乙醇以浸沒(méi)為度（約需300ml），如上法再熱提一次，濾出提取液，最后將瓶?jī)?nèi)藥渣倒在布氏漏斗上抽濾壓干，藥渣棄去。溶解度與粉防己堿相似，但因較粉防己堿多一個(gè)酚羥基，故極性較粉防己堿稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己堿，可利用此性質(zhì)相互分離。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水和石油醚。~%，主要為粉防己堿和防己諾林堿。三、儀器設(shè)備（單口，雙口）圓底燒瓶，冷凝管，鐵架臺(tái)，分液漏斗，三角燒瓶，濾紙，微量抽濾器，布氏漏斗，層析槽，毛細(xì)管等。二、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿游離時(shí)難溶于水，易溶于氯仿，成鹽后易溶于水，難溶于氯仿的性質(zhì)提取得到總生物堿。（3）熟悉粉防己堿和防己諾林堿的檢識(shí)方法。十三、許可年審或年檢：無(wú)十四、受理咨詢與投訴機(jī)構(gòu)：咨詢：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局投訴：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局駐局監(jiān)察局、政策法規(guī)司執(zhí)法監(jiān)督處第三篇：中藥化學(xué)和天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講稿講解防己中生物堿的提取、分離與鑒定[適用對(duì)象]——藥學(xué)、藥劑、環(huán)境、中藥、中藥國(guó)際交流、中藥 知識(shí)產(chǎn)權(quán)、中藥制藥工程、中藥資源專業(yè) [實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)]——24一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)生物堿類成分的一般提取分離法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：（1）掌握生物堿的溶劑提取法和粉防己堿與防己諾林堿的分離方法。十一、實(shí)施機(jī)關(guān)：實(shí)施機(jī)關(guān)：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局受理地點(diǎn)：各省級(jí)食品藥品監(jiān)督管理部門十二、許可證件有效期與延續(xù)：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局核發(fā)的藥品批準(zhǔn)文號(hào)的有效期為5年。（注：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局在完成技術(shù)審評(píng)后20日內(nèi)完成審批；20日內(nèi)不能完成審批的，經(jīng)主管局領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)，可以延長(zhǎng)10日）。復(fù)審需要進(jìn)行技術(shù)審查的，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局應(yīng)當(dāng)組織有關(guān)專業(yè)技術(shù)人員按照原申請(qǐng)時(shí)限進(jìn)行。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局接到復(fù)審申請(qǐng)后，應(yīng)當(dāng)在50日內(nèi)作出復(fù)審決定，并通知申請(qǐng)人。（六）復(fù)審：申請(qǐng)人對(duì)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局作出的決定有異議的，在申請(qǐng)行政復(fù)議或者提起行政訴訟前，可以在收到?jīng)Q定之日起10日內(nèi)填寫《藥品補(bǔ)充申請(qǐng)表》，向國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局提出復(fù)審申請(qǐng)并說(shuō)明復(fù)審理由。認(rèn)為不符合規(guī)定的，發(fā)給《審批意見(jiàn)通知件》，并說(shuō)明理由。（四）行政許可決定：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局在完成技術(shù)審評(píng)后20日內(nèi)完成審批；20日內(nèi)不能完成審批的，經(jīng)主管局領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)，可以延長(zhǎng)10日；時(shí)限延長(zhǎng)超過(guò)10日的，須報(bào)國(guó)務(wù)院批準(zhǔn)。技術(shù)審評(píng)完成后，對(duì)于不符合國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心技術(shù)審評(píng)要求的，發(fā)給補(bǔ)充資料通知，申請(qǐng)人在4個(gè)月內(nèi)補(bǔ)充資料，藥品審評(píng)中心在不超過(guò)40或25日內(nèi)完成補(bǔ)充資料的審查。特殊藥品和疫苗類制品的樣品檢驗(yàn)和藥品標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核可以在90日內(nèi)完成。按照《藥品注冊(cè)管理辦法》第三十二條規(guī)定，必須在指定的藥品檢驗(yàn)所進(jìn)行的臨床試驗(yàn)用樣品檢驗(yàn)，按照前兩款時(shí)限的要求執(zhí)行。藥品檢驗(yàn)所在接到注冊(cè)檢驗(yàn)通知和樣品后，應(yīng)當(dāng)在30日內(nèi)完成檢驗(yàn)，出具藥品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告。（二）省局審查：省級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局自申請(qǐng)受理之日起5日內(nèi)組織對(duì)生產(chǎn)情況和條件進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)核查；抽取連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批號(hào)的樣品，并向藥品檢驗(yàn)所發(fā)出注冊(cè)檢驗(yàn)通知；并在30日內(nèi)完成現(xiàn)場(chǎng)核查、抽取樣品、通知藥品檢驗(yàn)所進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)、將審查意見(jiàn)和核查報(bào)告連同申請(qǐng)人的申報(bào)資料一并報(bào)送國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局等工作，同時(shí)將審查意見(jiàn)通知申請(qǐng)人。九、許可程序（一）受理：申請(qǐng)人向省局受理部門提出申請(qǐng)，按照本《須知》第六條所列目錄提交申請(qǐng)材料，工作人員按照“《藥品注冊(cè)管理辦法》附件一：中藥、天然藥物注冊(cè)分類及申報(bào)資料要求”對(duì)申請(qǐng)材料進(jìn)行形式審查。八、申辦流程示意圖：注1：特殊藥品的注冊(cè)檢驗(yàn)60日完成；特殊藥品檢驗(yàn)樣品、復(fù)核標(biāo)準(zhǔn)90日完成。⑧中藥未公開(kāi)處方的合法來(lái)源對(duì)未公開(kāi)處方的中藥改劑型的，申請(qǐng)人應(yīng)注明其完整處方來(lái)源，并提供相應(yīng)證明。注：直接從國(guó)外進(jìn)口原料藥