【正文】 譜法是互補(bǔ)的，應(yīng)根據(jù)研究對象的實際需要和可能以及按照不同色譜技術(shù)的特點(diǎn)和優(yōu)勢而定，目的是保證方法的重現(xiàn)性和確能反映產(chǎn)品質(zhì)量的主要化學(xué)成分。 復(fù)方應(yīng)以君藥、臣藥中有效成分作為主要研究對象，佐使藥中的成分可采用其它指紋圖譜方法進(jìn)行輔助、補(bǔ)充研究。 當(dāng)研究某個注射劑品種的指紋圖譜時，首先必須調(diào)研相關(guān)的文獻(xiàn)、新藥申報資料（質(zhì)量部分和工藝部分）及其它研究結(jié)果， 盡可能詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含水量成分的種類及其理化性質(zhì)，經(jīng)綜合分析后找出成品中的藥效成妥或有效成分，作為成品或中間體指紋圖譜的研究對象，即分析檢測目標(biāo)。第三章 中藥色譜指紋圖譜研究過程中的關(guān)鍵問題 指紋圖譜技術(shù)在植物藥領(lǐng)域已應(yīng)用十余年，研究方法與研究思路相對成熟，已形成共識，普遍采用HPLC、 TLC、 GC或 NIR（近紅外技術(shù)），對植物藥有效組分進(jìn)行全成分質(zhì)量控制，即指紋圖譜技術(shù)。 建議 ：在指紋圖譜研究過程中，由于并不完全了解樣品中所含組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，尤其是復(fù)方制劑所含組分結(jié)構(gòu)類型不一，最大吸收波長各不相同，很難一次成功地選擇好檢測波長。 根據(jù)具體情況，進(jìn)行選擇。 （ 6） 蒸發(fā)激光光散射檢測器 通用性檢測器。 特點(diǎn)：可進(jìn)行全波長檢測，一次進(jìn)樣可以檢測到樣品中不同波長下的所有組分；光譜分辨率高，可以檢測色譜峰的純度；靈敏度高，線性范圍寬，基線噪聲小。不破壞樣品，缺點(diǎn)是對溫度變化敏感，不能用低梯度洗脫，靈敏度低，不能用于痕量分析。 特點(diǎn)：靈敏度高、線性范圍寬，可做成很小池體積的流通，對流動相的流速和溫度變化不太敏感，易操作，不破壞樣品，波長可以選擇及可用于梯度洗脫。建議 ：選擇 柱溫箱 。 色譜柱 柱溫 不同柱溫下同一成分在的保留時間往往發(fā)生遷移，有時還影響成分之間的分離效果。 自動進(jìn)樣的樣品量可連續(xù)調(diào)節(jié)，適合大量樣品分析，節(jié)省人力。 （ 3） 自動進(jìn)樣器 自動進(jìn)樣器由計算機(jī)自動控制定量閥，按預(yù)先編制的注射樣品操作程序工作。 樣品進(jìn)樣 進(jìn)樣器有以下幾種： （ 1） 停流進(jìn)樣裝置 為防止在帶壓操作下引起流動相泄露，此裝置要求進(jìn)樣前壓降至常壓下再進(jìn)樣，操作繁瑣，已較少使用。優(yōu)點(diǎn)是： ① 僅需要使用一個高壓輸液泵； ② 減小了溶劑可壓縮性的影響，并能完全消除由于溶劑混合引起的熱力學(xué)體積變化帶來的誤差。 由于高壓梯度裝置中，每種溶劑是分別由泵輸送的，進(jìn)入混合器后，溶劑的可壓縮性和溶劑混合時的熱力學(xué)體積的變化，可能影響輸入到色譜柱的流動相的組成，因此高壓梯度洗脫過程中為保證流速穩(wěn)定必須使用恒流泵，否則很難獲得重復(fù)性結(jié)果。 梯度洗脫 梯度洗脫是流動相中含有兩種或兩種以上的不同極性的溶劑，在洗脫過程中連續(xù)或間斷改變流動相的組成，以調(diào)節(jié)它的極性，使每個流出的組分獲得最理想的分離效果，并使樣品中的所有組分可在最短的分析時間內(nèi)，以適用的分離度獲得圓滿的選擇性分離。在線式脫氣法的脫氣效果明顯優(yōu)于離線式脫氣法，并適用于多元溶劑體系。離線式脫氣 ：吹氦脫氣法、加熱回流法、抽真空脫氣法、超聲波脫氣法等。 溶解在流動相中的氧氣會造成熒光猝滅，影響熒光檢測器的檢測；可導(dǎo)致樣品中的某些級組分被子氧化或使柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。 流動相的脫氣 流動相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如 O2），防止在洗脫過程中，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。 在制造和使用高效液相色譜儀時，應(yīng)使柱外效應(yīng)減至最小 ,以獲得理想的分析結(jié)果。 高效液相色譜儀2 氣相色譜儀 指紋圖譜研究對高效液相色譜儀的要求 柱外效應(yīng) 應(yīng)特別注意 “柱外效應(yīng) ”對分析結(jié)果的影響。 指紋圖譜研究常用的儀器與設(shè)備 薄層掃描儀 （ 1） 薄層掃描流程點(diǎn)樣 洗脫展開 掃描檢測 數(shù)據(jù)處理 （ 2） 薄層掃描儀主要部件 典型的薄層掃描儀主要由機(jī)械掃描裝置和數(shù)據(jù)處理兩部分組成，新型的薄層掃描儀配有自動點(diǎn)樣器等。這些方法可在指紋圖譜中的部分色譜峰在無標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗證的情況下，起到定性鑒別的作用。適用于中藥中帶電荷的化合物（蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮、生物堿）、有機(jī)酸、單糖及一些中性分子的分離分析，可作為中藥指紋圖譜研究的補(bǔ)充。為中藥指紋圖譜研究的主要方法之一。 在中藥質(zhì)量控制中主要用于揮發(fā)油、極性較小的成分或衍生化后的可揮發(fā)性成分（如脂肪酸的酯）。 中藥樣品中含有的成分絕大多數(shù)可在高效液相色譜儀上進(jìn)行分析檢測，方法成熟，中藥指紋圖譜研究應(yīng)優(yōu)先考慮高效液相色譜法。 可作為中藥指紋圖譜研究的借鑒與補(bǔ)充。 優(yōu)點(diǎn)：操作簡單、分析速度快、一次分析樣品數(shù)量多。 （ 4） 薄層色譜法 薄層色譜法為傳統(tǒng)的定性、定量分析方法，廣泛應(yīng)用于道地藥材的定性鑒定。 數(shù)據(jù)處理需掌握一定的化學(xué)計量學(xué)知識。運(yùn)用該模型即可對未知樣本（如：新近購進(jìn)的原藥材或新生產(chǎn)的成品等）進(jìn)行辨別分析（給出結(jié)果：合格與否、含量多少等）。 （ 2） 紫外可見分光光度法和紅外光譜法 這兩種方法能夠給出藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)信息，但所給出的信息是所有化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)信息的加和，不具備指紋特征，但可作為中藥指紋圖譜研究的輔助方法。但該兩種方法所使用的儀器在國內(nèi)尚未普及，不適應(yīng)該方法的應(yīng)用與推廣。 色譜法包括：薄層色譜法（ TLC）、液相色譜法（ LC）、氣相色譜法（ GC）、高效毛細(xì)管電泳法（ CE）； 光譜法包括：紫外光譜法（ UV）、紅外光譜法（ IR）、近紅外光譜法（ NIR）； X射線衍射法、核磁共振法（ NMR）等。第二章 中藥指紋圖譜研究方法學(xué) 常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù) 研究對象的不同，指紋圖譜研究的方法與技術(shù)也不同，并都隨著現(xiàn)代科技技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展。 歐共體：在草藥質(zhì)量指南中稱，單靠測定某有效成分考察質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，因為草藥及其制劑是以整體為活性物質(zhì)。 實現(xiàn)中藥指紋圖譜的三原則，保證其標(biāo)準(zhǔn)化，做到統(tǒng)一規(guī)范，這樣才可以使中藥指紋圖譜得以推廣應(yīng)用。重現(xiàn)性 ： “重現(xiàn)性 “是指所建立的指紋圖譜，在規(guī)定的方法與條件下，不同的操作者和不同的實驗室應(yīng)能作出相同的指紋圖譜，其誤差應(yīng)在允許的范例內(nèi)，這樣才可以保證指紋圖譜的使用具有通用性和實用