【正文】 客觀評價(jià)，并公布標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。 國外植物藥指紋圖譜的應(yīng)用 美國 FDA：允許草藥保健品申報(bào)資料可以提供色譜指紋圖； WHO ： 1996年草藥評價(jià)指導(dǎo)原則中規(guī)定，如果草藥的活性成分不明，可以提供色譜指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一致。在歐共體藥品申請注冊表格中植物藥制品的 “藥物專家報(bào)告 “要求通過已知的具有治療作用的活性物質(zhì)對原料、中間體及成品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化控制。 中藥指紋圖譜研究所采用的方法大致分為：色譜法、光譜法及其它。 （ 1） X射線衍射法及核磁共振法 這兩種方法能給出藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)信息，部分信息也可能與特定化學(xué)成分直接關(guān)聯(lián)。在中藥指紋圖譜研究過程中不建議采用X射線衍射法及核磁共振法。 （ 3） 近紅外光譜法 此方法與紅外光譜法原理相同，但檢測時(shí)采用近紅外波長，所給出的信息是所有化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息的加和，通過一系列樣本的檢測（必須預(yù)先知道樣品中相關(guān)成分的含量或樣本的定性歸屬），運(yùn)用化學(xué)計(jì)量學(xué)手段，建立了樣本與信息之間的數(shù)學(xué)模型。 優(yōu)點(diǎn)：檢測速度快（通常為 1 min）、操作簡單、適宜過程控制等。 近紅外技術(shù)在農(nóng)藥、化工、農(nóng)業(yè)等相關(guān)領(lǐng)域已廣泛應(yīng)用，方法的成熟度較高，在中藥質(zhì)量控制方面有較好的應(yīng)用前景，可大力推廣近紅外技術(shù)在原材料質(zhì)量控制中的應(yīng)用。 2023版《中國藥典》，采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，列于【鑒別】項(xiàng)下；采用薄層掃描法進(jìn)行含量測定，列于【含量測定】項(xiàng)下。 缺點(diǎn)：重現(xiàn)性、精密度差。 （ 5） 液相色譜法 最常用的指紋圖譜研究方法，其中高效液相色譜法（HPLC）具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。 （ 6） 氣相色譜法 氣相色譜法主要用于分析氣體、揮發(fā)性和半揮發(fā)性液體以及能夠產(chǎn)生足夠蒸氣壓的固體，或者沸點(diǎn)在 500℃ 以下，相對分子質(zhì)量 400以下的物質(zhì)。 特點(diǎn)：靈敏度高、分離度好、分析速度快，定量分析的精密度優(yōu)于 1% ，但分析范圍只局限于低沸點(diǎn)成分是其主要不足。 （ 7） 高效毛細(xì)管電泳法 高效毛細(xì)管電泳法是以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動(dòng)力的新型分離分析技術(shù)。 （ 8） 其它 高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用（ HPLCMS）、氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用（ GCMS）、毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用（ CEMS）等。最 常用為： TLC、 HPLC、 GC。 （ 3） 主要廠家及儀器型號 日本島津 CS系列；美國 Schoeffel SD3000等。 由于樣品分子在液體流動(dòng)相的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小 4~5個(gè)數(shù)量級，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢 1~2個(gè)數(shù)量級，因此，樣品注入色譜柱后，在柱子以外任何死空間（如進(jìn)樣器、柱接連接管和檢測器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留都會顯著引起色譜峰的擴(kuò)散，而使柱效降低，所以柱外死體積的影響量不能忽略。 建議 ：色譜柱及檢測器前 死體積應(yīng)最小 。若在低死體積檢測池中存在氣泡，會增加基線噪聲，嚴(yán)重時(shí)會造成分析靈敏度下降而無法進(jìn)行分析。 常用的脫氣方法有 離線式脫氣 和 在線式脫氣 。離線式脫氣會因流動(dòng)相存放時(shí)間的延長以致有空氣重新溶解在流動(dòng)相中；在線式脫氣 技術(shù)是把真空脫氣裝置串接到貯液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，實(shí)現(xiàn)流動(dòng)相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)脫氣。建議 ：選擇 在線脫氣 。分為高壓梯度和低壓梯度兩種方式進(jìn)行操作。 低壓梯度是在常壓下將多元溶劑輸至混合器中。建議 ：選擇 低壓梯度 。 （ 2） 六通閥進(jìn)樣裝置 該方法重現(xiàn)性較好，較常用。取樣、進(jìn)樣、復(fù)位、樣品管路清洗和樣品盤的轉(zhuǎn)動(dòng)，全部按預(yù)定程序自動(dòng)進(jìn)行，一次可進(jìn)行幾十個(gè)或上百個(gè)樣品的分析。 （ 4） 建議 ：中藥指紋圖譜研究過程中，由于對樣品的進(jìn)樣量精確度要求不高，因此對進(jìn)樣器的選擇可結(jié)合研究者的實(shí)際情況，建議選擇 六通閥手動(dòng)進(jìn)樣裝置 。 由于中藥樣品成分的復(fù)雜性，尤其是中藥指紋圖譜技術(shù)要求色譜峰的相對保留時(shí)間、峰面積比值的相對恒定，對柱溫的要求應(yīng)嚴(yán)格控制，以保證分析方法的重現(xiàn)性。 檢測器 （ 1） 紫外線檢測器 應(yīng)用最廣，要求分析樣品必須在紫外線區(qū)有吸收。 （ 2） 示差折光檢測器 示差折光檢測器是通用型檢測器，對在可見光或紫外線區(qū)無吸收的樣品一般選用。 （ 3） 熒光檢測器 （ 4） 電化學(xué)檢測器 （ 5） 二極管陣列檢測器 光束通過流通池、分光系統(tǒng)后，使所有波長在二級管陣列檢測器同時(shí)檢測器，可得三維的時(shí)間 色譜信號 吸收光譜圖。 可得到所有組分的全波長掃描圖，可用于定性分析，通過對三維色譜圖的分析，可以優(yōu)化檢測波長?？梢詸z測揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，可作于無生色團(tuán)物質(zhì)的檢測，如碳水化合物（多糖）、類脂類（磷脂）、皂苷、不進(jìn)行衍生化的脂肪酸和氨基酸，以及結(jié)構(gòu)不明又無標(biāo)準(zhǔn)樣品的未知物。據(jù)統(tǒng)計(jì)， 95% 的中藥組分在可見光或紫外線區(qū)有吸收，可首選配置可編波長紫外線檢測器（ VWD ）。因此 最好選用二極管陣列檢測器。 方案設(shè)計(jì)與思路 研究對象的確定 植物藥或中藥的成分可分為：蛋白質(zhì)、脂類、糖及衍生物、有機(jī)酸、酚類、鞣質(zhì)、醌類、內(nèi)酯、香豆精、黃酮類、皂苷類、生物堿類、甾體類、萜類、揮發(fā)油等。如：黃芪含黃酮、皂苷及多糖；黃芪多糖注射液是以黃芪中的多糖為原料，因此對黃芪多糖注射液進(jìn)行指紋圖譜研究時(shí)應(yīng)以多糖作為研究對象；研究其中間體時(shí)也應(yīng)以多糖為研究對象；研究原藥材的指紋圖譜時(shí)應(yīng)把黃酮、皂苷及多糖作為研究對象。 研究方法的選擇 主要采用色譜法。 一個(gè)中藥制劑指紋圖譜應(yīng)可以同時(shí)采用兩種或更多種方法進(jìn)行研究。通常揮發(fā)油類采用GC。 研究內(nèi)容 根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》（暫行）的規(guī)定，主要研究內(nèi)容有原藥材、中間體、注射劑的指紋圖譜，涉及樣品名稱、來源、制備、測定方法、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)等研究項(xiàng)。我國藥材品種多、產(chǎn)地廣、分散度大，造成了中藥材基源復(fù)雜，形成許多同名異物的品種，這些品種在傳統(tǒng)中醫(yī)臨床中并未加以細(xì)分，其中多數(shù)已收入《中華人民共和國藥典》。 近年由于藥材量需求增大，藥材資源破壞嚴(yán)重，藥材內(nèi)在質(zhì)量下降，炮制加工的粗放造成有效成分的流失，人為因素造成了藥材質(zhì)量不穩(wěn)定，不利于色譜指紋圖譜的研究與應(yīng)用。 已生產(chǎn)的注射劑，因生產(chǎn)中藥材來源基本確定，在補(bǔ)充其指紋圖譜時(shí)，原藥材樣品的收集應(yīng)遵循以下原則：① 藥材盡可能固定產(chǎn)地