【正文】 文（設(shè)計） 23 圖 315 不同提取 進(jìn)樣方式對草果 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 提取 進(jìn)樣方式分別為超聲提取直接進(jìn)樣、超聲提取頂空進(jìn)樣 、干粉頂空進(jìn)樣 圖 316 不同提取 進(jìn)樣方式對草果 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間 、信號三維圖譜 由 圖 315 可以 看出， 在 同樣的 實(shí)驗(yàn) 、儀器條件下， 草果 干粉頂空進(jìn)樣提取的 揮發(fā)性 成分 最 多， 說明 對于揮發(fā)性成分 提取 而言，頂空提取比超聲提取消耗少，提取 效率高。 圖 311 不同振 蕩溫度 對 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 振 蕩溫度分別為 80℃、 100℃、 120℃、 150℃ 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 21 圖 312 不同振 蕩溫度 對 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間 、信號三維圖譜 圖 313 不同振 蕩 時間對 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 振 蕩 時間 分別為 10min、 15min、 20min 3 結(jié)果與討論 22 圖 314 不同振 蕩 時間對 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間、 信號 三維 圖譜 由 圖 31 313 和 31 314 可以 看出 ， 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分的HS 振 蕩溫度為 150℃ ， 振 蕩時間為 10min 時 ， GCMS 圖譜 出峰較多 、 重疊 峰 少、雜 峰少、峰形對 稱 、 分離效果 好 、節(jié)省 時間 ，因此 以下 干粉 頂空進(jìn)樣 實(shí)驗(yàn) 采用此HS 條件 為草果揮發(fā)性成分 測定 、 GCMS 指紋圖譜建立的 最佳 條件。 3 結(jié)果與討論 18 圖 37 不同振 蕩溫度 對 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 振 蕩溫度分別為 120℃、 130℃、 140℃、 150℃ 圖 38 不同振 蕩溫度 對 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間、 信號三維圖譜 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 19 圖 39 不同振 蕩 時間對 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS圖譜 注 ：從 下往上 振 蕩 時間 分別為 10min、 15min、 20min、 25min 圖 310 不同振 蕩 時間對 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間 、信號三維圖譜 3 結(jié)果與討論 20 由 圖 3 39 和 3 310 可以 看出 ， 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分的HS 振 蕩溫度為 140℃ ， 振 蕩時間為 20min 時 ， GCMS 圖譜 出峰較多 、 重疊 峰 少、雜 峰少、峰形對 稱 、 分離效果 好 、節(jié)省 時間 ，因此 以下 干粉 頂空進(jìn)樣 實(shí)驗(yàn) 采用此HS 條件 為草果揮發(fā)性成分 測定 、 GCMS 指紋圖譜建立的 最佳 條件。 草 果超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 振 蕩箱溫度 和振 蕩時間的選擇 準(zhǔn)確稱取金平 縣草果 樣品 于 50mL 具塞 三角燒瓶中 ， 加入 正己烷 溶劑 ，超聲處理 30min， 超聲功率： 200W， 過濾，加 的 正己烷洗滌殘渣， 過濾 ， 合并濾液 ， 取適量體積的溶液加入 頂空 進(jìn)樣瓶 。 由 圖 3 36 可以看出，在 色譜柱 Rtx5MS、 DB170、 HPFFAP 中，色譜柱 HPFFAP 出峰 最多 ， 所以 色譜柱為 HPFFAP 時草果提取 的揮發(fā)性成分 最 多 。柱 流量為 時 GC 運(yùn)行時間很短，出峰很快 ， 但是 有 重疊峰 ； 當(dāng) 柱 流量為 時 重疊峰最少， GC 運(yùn)行 時間居中 ；當(dāng) 柱流量 為 時重疊 峰也少，但是 GC運(yùn)行 時間 最 長 ， 在實(shí)驗(yàn)過程中耗費(fèi)時間。所以 分流比為 20:1 時草果提取 的揮發(fā)性成分多，而且準(zhǔn)確。將待測樣品于GCMS 進(jìn)行檢測，檢測條件見 ，分別 改變 GC 條件的分流比、 柱流量、色譜柱，討論 分流比、 柱流量、色譜柱 對 草果揮發(fā)性成分提取的影響，分流比分別設(shè)置為 不分流 、 10: 20: 50： 1， 柱 流量分別設(shè)置為 、 、 ，色 譜柱 分別為 Rtx5MS、 HPFFAP、 DB1701， 不同 分流比 、 柱流量、色譜柱的 GCMS 圖譜分別 見 圖 3 3 35， 時間、信號三維圖譜 分別 見圖 3 3 36， 3 結(jié)果與討論 14 圖 31 不同 分流比 對 草果 超聲提取 直接進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 分流比 分別為不分流 、 10: 20: 50:1 圖 32 不同 分流比 對 草果 超聲提取 直接進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間 、信號三維圖譜 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 15 圖 33 不同柱 流量 對 草果 超聲提取 直接進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 柱 流量分別為 、 、 圖 34 不同柱 流量 對 草果 超聲提取 直接進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響的時間 、信號三維圖譜 3 結(jié)果與討論 16 圖 35 不同色譜柱對 草果 超聲提取 直接進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 色譜柱 分別為 Rtx5MS、 DB170 HPFFAP 圖 36 不同色譜柱對 草果 超聲提取 直接進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時間 、信號三維圖譜 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 17 由 圖 3 32 可以看出，當(dāng) 分流 比為 20:1 時出 峰較多、重疊 峰 少、 雜 峰少、峰形對 稱 、 分離效果 好。 數(shù)據(jù)處理 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) 2020A 版、 Microsoft Office 20 中文版、 SPSS 中文版進(jìn)行 數(shù)據(jù) 處理。 樣品的制備 準(zhǔn)確稱取三份 的 草果干粉樣品 ， 其中兩份 分別置 于 50mL 的 具塞三角燒瓶中 ， 加入 正己烷 溶劑 ，超聲處理 30min， 超聲功率： 200W， 過濾 ，加 的 正己烷洗滌殘渣， 過濾 ，合并濾液 ， 取適量體積的溶液分別加入直接進(jìn)樣瓶和頂空進(jìn)樣瓶 ； 另 一份 草果干粉樣品直接加入頂空進(jìn)樣瓶，待測。 ，吳江梅塞爾工業(yè)氣體有限公司 ） 氣相毛細(xì)管色譜柱 HPFFAP（ 30m ） 程序升溫 初始 溫度 80℃ ，保持 3min， 以 6℃ /min 速度升至 180℃ ，保持 2min 總運(yùn)行時間 MS 條件 離子源溫度 200℃ 接口溫度 220℃ 檢測器電壓 溶劑延遲時間 2min m/z 351000 直接 進(jìn)樣 條件 Cycle（ 循環(huán)） GCInj Syringe（ 針體積 ） 10uL Sample Volume（進(jìn)樣 體積 ） Air Volume（ 空氣體積） 0nL Pre cln slv1（ 進(jìn)樣前清洗 溶劑 1） 2 2 實(shí)驗(yàn)部分 10 續(xù)表 23 直接 進(jìn)樣 條件 Pre cln slv2（ 進(jìn)樣前 清洗 溶劑 2） 2 Pre cln spl（ 進(jìn)樣前清洗 樣品） 2 Fill Volume（ 排氣體積） Fill Speed（ 針桿速度） 5uL/s Fill Stokes（ 拉桿次數(shù)） 5 Pullup Del（ 補(bǔ)償時間） 300ms Inject to（進(jìn)樣 口 ） GCInj1（ 進(jìn)樣口 1） Inject Speed（ 進(jìn)樣速度） 50uL/s Pre Inj Del（ 進(jìn)樣前補(bǔ)償時間） 500ms Pst Inj Del（ 進(jìn)樣后補(bǔ)償時間） 500ms Pst Cln Slv1（ 進(jìn)樣后清洗 溶劑 1） 3 Pst Cln Slv2（ 進(jìn)樣后清洗 溶劑 2） 0 靜態(tài)頂空（ HS）條件 Cycle（ 循環(huán)） HSInj Syringe（ 進(jìn)樣針體積） Sample Volume（進(jìn)樣體積） 250uL Incubat Temp（振蕩箱溫度） 140℃（液體 ） 、 150℃（ 干粉） Incubat time（振蕩時間） 20min（液體 ） 、 10min（ 干粉） Agi Speed（振蕩速度） 250rpm Agi on Time（振 蕩開啟 時 間） 5s Agi off Time（ 振蕩停止時間 ） 2s Syringe Temp（進(jìn)樣 針溫度 ） ℃ Fill Speed（針 桿速度 ） 200ul/s Pullup Del（ 補(bǔ)償時間 ） 1s Inject to（ 進(jìn)樣口 ） GC Inj1（ 進(jìn)樣口 1） Inject Speed（進(jìn)樣速度） 500ul/s Syr Flushing（氣體吹針時間） 120s GCRuntime（氣相運(yùn)行時間） 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 11 實(shí)驗(yàn)步驟 樣品的預(yù)處理 將草果 不同部位（殼、仁 、果 、莖、葉、芽）、不同產(chǎn)地 （紅河、 楚雄、 麗江 、大理、文山、玉溪）、不同炮制方法 （凈制 、炒制、鹽制、姜 制 、醋制） 的草果 于萬能中藥粉碎機(jī) 中粉碎 ， 過 100 目 中藥篩，并儲存在密封袋中，貼上標(biāo)簽。 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 7 2 實(shí)驗(yàn)部分 材料、試劑及儀器 主要材料 草果 的不同部位（殼、仁 、果 、莖、葉、芽） 來自 紅河州金平縣，不同產(chǎn)地的草果分別 來自 紅河、楚雄、麗江、大理、玉溪、文山， 紅河 的草果來自金平縣草果種植戶 。目前，國外開展的植物制劑指紋圖譜研究 , 主要還是針對單味藥材提取物而言，在植物制劑的整體性作用和藥效相關(guān)性方面研究很少 。 WTO 在中草藥指南中同樣對植物制品和最終產(chǎn)品如果有效成分不能鑒別，可提供特征成分或混合成分的指紋圖譜鑒別以保證產(chǎn)品質(zhì)理的一致性。國外有關(guān)指紋圖譜的報道無一例外地將指紋圖譜作為鑒別項(xiàng)，評價草藥的真實(shí)性以及產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，韓國、日本、德國等，都比較重視對植物藥的開發(fā)和利用德國用指紋圖譜技術(shù)控制銀杏制劑的質(zhì)量，在國際上具有很強(qiáng)的競爭力。我國對中藥指紋圖譜的研究目前主要為使用各處方法建立中藥材及制劑的指紋圖譜以及對相應(yīng)信息進(jìn)行數(shù)字化處理，使其能評價和控制中藥材及制劑的質(zhì)量。由于中藥注射液的特殊性，我國決定先采用中藥指紋圖譜控制中藥中注射劑的質(zhì)量。國內(nèi)眾多的研究人員正在嘗試運(yùn)用各種方法構(gòu)建中藥指紋圖譜應(yīng)用 于中藥材和中成藥的質(zhì)量控制，以尋求一種可行的中藥指紋圖譜控制質(zhì)量的法定標(biāo)準(zhǔn)。 在 HSGCMS 優(yōu)化 條件下， 通過 質(zhì)譜（ MS）對草果不同部位（ 果 、殼、仁、莖、葉、芽） 揮發(fā)性 成分進(jìn)行測定 ，采用峰面積歸一法計算各組分的相對含量，同時建立草果不同部位（果、殼、仁、莖 、葉、芽）、不同產(chǎn)地 （紅河 、楚雄、麗江、大理、玉溪、文山）、不同炮制方法（ 炒制 、鹽制、 姜制 、凈制、醋制）的 揮發(fā)性 GCMS 指紋圖譜 ，采用“ 中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) 2020A 版 ”軟件對指紋圖譜進(jìn)行相似度計算，采用 SPSS 軟件對指紋圖譜進(jìn)行聚類分析、主成分分析 的 文章未見報道。 論文研究的現(xiàn)狀 草果 的 研究 進(jìn)展 目前，研究者 對草果的研究主要集中在 基源植物、栽培技術(shù)研究、生藥材鑒定（性狀鑒定、顯微鑒定、中藥化學(xué)鑒定、 GCMS 指紋圖譜鑒別、氣相定量測定 ） 、中藥化學(xué)成分、炮制的研究、藥理作用 (鎮(zhèn)痛、抗胃潰瘍、抗乙肝病毒 )、臨床用藥（