12基因工程的基本操作程序_2-文庫吧資料
2025-01-08 02:48本頁面
【正文】 動(dòng)物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 微生物細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細(xì)胞 ? 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ? 基因槍法 ? 花粉管通道法 （ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ①特點(diǎn)： 易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力 ②原理： Ti質(zhì)粒上的 TDNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的 DNA上。 思考： 標(biāo)記基因有什么作用？ 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? 常用的受體細(xì)胞： 有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。 思考： 終止子的作用是什么？ 終止子是位于基因尾端的一段特殊的 DNA片斷，能終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入 終止子 (抗蟲基因末端 )，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲能力。 起初把蘇云金芽孢桿菌的 抗蟲基因 插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。 用 _____________切斷目 的基因，使其產(chǎn)生 _____ ____________。 ? （ 2） 反轉(zhuǎn)錄法 （ cDNA文庫的構(gòu)建方法 ） （ 3）根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 推測(cè) 推測(cè) 目的基因 化學(xué)合成 上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？ 操作簡(jiǎn)便廣泛使用 工作量大，盲目，分離出來的有時(shí)并非一個(gè)基因 專一性強(qiáng) 操作過程麻煩，mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高 專一性最強(qiáng) 僅限于合成核苷酸對(duì)較少的簡(jiǎn)單基因 二、 PCR的反應(yīng)過程 5/ 3/ 3/ 5/ 5/ 3/ 引物 Ⅰ 5/ 3/ 引物 Ⅱ 變性 95oC 復(fù)性55oC 延伸72oC 5/ 3/ 3/ 5/ 5? 引物 1 5? 引物 2 第二次復(fù)制 第一次復(fù)制 5? 5? 5? 5? 5? 5? 模板 DNA 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 25～ 30 次循環(huán)（復(fù)制）后，模板 DNA的含量可以擴(kuò)大 100萬（ 220）倍以上。 獲取方法： （ 1）從 基因文庫 中獲取目的基因； （ 2）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因； （ 3）通過 DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成 （一）從基因文庫中獲取目的基因 ？ 將含
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1