【正文】 ：原生質(zhì)體融合 +組織培養(yǎng) 植物體細胞雜交 知 識 網(wǎng) 絡(luò) “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 一 植物組織培養(yǎng)及細胞全能性 (1)操作流程 (2)培養(yǎng)條件：營養(yǎng)物質(zhì) (水、無機鹽、蔗糖、氨 基酸和有機酸等 )、激素 (如細胞分裂素、生長素 等 )及其他條件 (無菌、適宜的溫度和 pH等 )。 ③植物細胞還可用基因槍法和花粉管通道法。 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 (3)將目的基因?qū)胧荏w細胞 細胞 類型 常用 方法 受體 細胞 轉(zhuǎn)化過程 植物 細胞 農(nóng)桿菌 轉(zhuǎn)化法 體細胞 將目的基因插入 Ti質(zhì)粒的 TDNA上 → 轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌 → 導(dǎo)入植物細胞 → 整合 到受體細胞的 DNA上 動物 細胞 顯微注 射技術(shù) 受精卵 將含有目的基因的表達載體提純 → 取卵 → 獲得受精卵 → 顯微注射 → 早 期胚胎培養(yǎng) → 胚胎移植 → 發(fā)育成為 具有新性狀的動物 微生 物細 胞 Ca2+處 理增大 細胞壁 通透性 原核 細胞 或酵 母菌 用 Ca2+處理細胞 → 感受態(tài)細胞 → 重組 表達載體 DNA分子與感受態(tài)細胞混合 → 感受態(tài)細胞吸收 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 ① 基因工程唯一不涉及到堿基互補 配對的操作 步驟。終止子 (DNA片段 )≠ 終止密碼子 (RNA)。 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 注意： ① 與載體相比較 ,增加的啟動子 、 目的基因和 終止子三個基因片段 ,其功能各不相同。 引物：一小段單鏈 DNA或 RNA，一般 20～ 30個堿基，能與 DNA母鏈的一段堿基序列互補配對。 ? 第三步，以單鏈 DNA為模板，在 DNA聚合酶的作用下合成另一條互補的 DNA鏈，形成雙鏈 DNA分子。 化學合成法 :蛋白質(zhì) 氨基酸序列 RNA 堿基序列 DNA堿基序列 用 4種脫氧核 苷酸人工合成目的基因 反轉(zhuǎn)錄法 :分離出供體細胞 mRNA 單鏈 DNA 合成目的基因（具體過程如下） 分析 推測 推測 逆轉(zhuǎn)錄酶 DNA聚合酶 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 cDNA 合 成 過 程 ? 第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以 RNA為模板合成一條與 RNA互補的DNA單鏈，形成 RNADNA雜交分子。 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 例題： DNA連接酶作用的敘述，正確的是（ ） DNA片段末端，形成磷酸 二酯鍵 DNA片段的骨架連接起來，重新 形成磷酸二酯鍵 DNA鏈上堿基之間的氫鍵 DNA片段互補的黏性末端之間連接 起來，而不能將雙鏈 DNA片段平末端之間進行 連接 B “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 （四）基因工程的基本操作程序 :抗蟲棉的培育過程 可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的 DNA上 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 （四）基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的獲取 (2)基因表達載體的構(gòu)建 ——最核心步驟 (3)將目的基因?qū)胧荏w細胞 (4)目的基因的檢測與鑒定 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 ① 從基因文庫 (基因組文庫或 cDNA文庫 )中獲取 文庫類型 cDNA文庫 基因組文庫 文庫大小 小 大 基因中啟動子 無 有 基因中內(nèi)含子 無 有 基因多少 某種生物的部分基因 某種生物的全部基因 物種之間的 基因交流 可以 部分基因可以 說明 基因文庫的組建過程就包含基因工程的基本操作步驟 。有的一個細菌中有一個，有的一個細菌中有多個。 質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體。 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 質(zhì)粒： 質(zhì)粒是染色體外能夠進行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器和細菌細胞中核區(qū)外的 DNA分子。 ④ 能夠自主復(fù)制并穩(wěn)定地保存。 將目的基因?qū)胧荏w細胞。 ③ 在 DNA連接酶的作用下 ， 上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來 ？ 為什么 ？ “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 DNA連接酶與 DNA聚合酶的比較 DNA 連接酶 DNA 聚合酶 作用實質(zhì) 都是催化兩個脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵 是否需模板 不需要 需要 連接 DNA鏈 雙鏈 單鏈 作用過程 在兩個 DNA片段 之 間形成磷酸二酯鍵 將單個核苷酸加到已存在的核酸片段的 3′ 端的羥基上 ,形成磷酸二酯鍵 作用結(jié)果 將兩個 DNA片段連接成重組 DNA分子 合成新的 DNA分子 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 ——“分子運輸車” (1)類型 (2)功能： (3)應(yīng)具備條件 最常用載體 :質(zhì)粒 其他載體 :λ 噬菌體的衍生物、動植物病毒等 提醒 ①質(zhì)粒本質(zhì)是 DNA,不是細胞器 。 能 。 “名師公益課堂 ” 《 主講標題 XXXXXX》 高中 XXXX學科 [例 ] 限制性內(nèi)切酶 Ⅰ 的識別序列和切點是 —G↓GATCC —， 限制性內(nèi)切酶 Ⅱ 的識別序列和切點是 —↓GATC —。 在質(zhì)粒上有酶 Ⅰ 的一個切點 ， 在目的基因的兩側(cè)各有 1個酶 Ⅱ 的切點 。 — G ↓ G A T C C — — C CT A G ↑ G — 用酶Ⅰ切割 — G G A TC C — — C CT A G G — ① 請畫出質(zhì)粒被限制酶 Ⅰ 切割后所形成的黏性末端 。 coli DNA連接酶 T4 DNA連接酶 來源 大腸桿菌 T4噬菌體 功能 連接黏性末端