專題1基因工程專題復習-文庫吧資料
2024-09-24 20:26本頁面
【正文】 接雙鏈間的 A和 T，使黏性末端處堿基互補配對 D．若要獲得未知序列 d，可到基因文庫中尋找 解析：從圖示看， a中含有胸腺嘧啶，故其基本骨架是磷酸和脫氧核糖交替連接而成； DNA連接酶縫合目的基因和載體質(zhì)粒之間的縫隙，使兩者之間形成磷酸二酯鍵；若要獲 得未知序列的目的基因，可從基因文庫中尋找；若要獲得相同的黏性末端，可以用不同 種的限制性核酸內(nèi)切酶處理，如識別 ↓GATC的限制性核酸內(nèi)切酶和識別 G↓GATCC的限 制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體質(zhì)粒就可以形成相同的黏性末端。若培養(yǎng)轉基因動物，則選用受精卵。 基因工程的目的不同，可選擇的受體細胞不同。 ? 將目的基因?qū)胧荏w細胞的原理 借鑒 細菌或病毒侵染細胞 的途徑 。而且在 DNA連接酶的作用下，載體只能與目的基因的相應末端互補連接成重組質(zhì)粒。同理質(zhì)粒在 DNA連接酶的作用下也會出現(xiàn)前后相連，形成自身連接 。 單切酶法與雙切酶法 單切酶法就是用同一種限制酶切割含目的基因的 DNA片段和載體，形成相同的黏性末端，可用 DNA連接酶連接重組 DNA。 如果目的基因是從基因組文庫中獲取的，因為目的基因本身已含有啟動子、終止子，在構建表達載體時，就不需要在加啟動子、終止子。 質(zhì)粒 目的基因 限制酶處理 一個切口 兩個黏性末端 兩個切口 獲得目的基因 DNA連接酶 表達載體 同一種 二 、 基因表達載體的構建 ——核心 限制酶切割位點的選擇必須保證目的基因，標記基因的完整性，以便于檢測和表達。 c、延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在 Taq酶的作用下， 合成與模板互補的 ________。 從基因文庫中尋找 聚合酶鏈式反應（ PCR）擴增 化學合成法 目的基因的核苷酸序列未知 目的基因的核苷酸序列已知 （一）、獲取目的基因的常用方法有哪些 ? 初始目的基因的來源 1. 從生物中直接獲取 2. 人工合成 注意：要保持基因的完整性 從基因文庫中獲取目的基因 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫 . 基因文庫 基因組文庫 部分基因文庫 （如 :cDNA文庫） 基因文庫 如何從基因文庫中得到所需要的基因？ 依據(jù)：目的基因的有關信息 如：根據(jù) 基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色體上的位置 基因的轉錄產(chǎn)物 mRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì) 等特性。 真核生物基因結構 外顯子 ：真核細胞基因 DNA中的編碼序列，這些序列被轉錄成 RNA并進而翻譯為蛋白質(zhì)。 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) （能編碼蛋白質(zhì)） 啟動子 終止子 （ 2）真核與 原核生物基因結構的比較 外顯子 內(nèi)含子 編碼蛋白質(zhì) （不能編碼蛋白質(zhì)） ① 相同點：都是由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)控作用的非編碼區(qū)。沒有啟動子，基因就不能轉錄。 目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、植物抗病基因（抗病毒、抗細菌 )、 人胰島素基因 等。則用限制酶 B和限制酶 H共同完成切割一個重組質(zhì)粒，預計產(chǎn)生的片段長度（ kbp）可能是（多選） 、 、 、 、 、 、和 E B +E H+ E DNA片段長度 CD 二、基因工程的基本操作程序 基因工程基本操作的四個步驟 目的基因的獲取 基因表達載體的構建 將目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 一 .目的基因的概念 主要是指編碼 蛋白質(zhì) 基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位，其中哪兩種限制酶所切割出來的 DNA片段末端可以互補黏合？其正確的末端互補序列為何？ EcoRI；末端互補序列 — AATT— B. BamHI和 HindⅢ ；末端互補序列 — GATC— C. EcoRI和 HindⅢ ；末端互補序列 — AATT— D. BamHI和 BglII；末端互補序列 — GATC— D 1用限制酶 E將長度為 （千堿基對）的質(zhì)粒的一處切斷；接著用限制酶 E切割某一 DNA分子得長度為 ；再用 DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒，擴增。南京三模 )下列關于染色體和質(zhì)粒的敘述，正確的是 ( ) A．染色體和質(zhì)粒的化學本質(zhì)都是 DNA B．染色體和質(zhì)粒都只存在于原核細胞中 C．染色體和質(zhì)粒都與生物的遺傳有關 D．染色體和質(zhì)粒都可作為基因工程的常用載體 C 限制酶是一種核酸切割酶，可辨識并切割 DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。 ABCD 6．下列有關限制性內(nèi)切酶識別的敘述，不正確的是 : A．從反應類型來看，限制性內(nèi)切酶催化的是一種水解反應 B．限制性內(nèi)切酶的活性受溫度、 pH的影響 C．一種限制性內(nèi)切酶只能識別雙鏈 DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列 D．限制性內(nèi)切酶識別序列越短，則該序列在 DNA中出現(xiàn)的幾率就越小 D 解析：染色體由 DNA和蛋白質(zhì)構成；原核生物沒有染色體；質(zhì)粒可以做為基因工程的 載體，而染色體不行。 ⑤質(zhì)粒能自我復制，既可在自身細胞、受體細胞內(nèi)，也可在體外。一個載體若只有某種限制酶的一個切點，則酶切后既能把環(huán)打開接納外源 DNA片段，又不會丟失自己的片段。 ③作為載體必須具有一個至多個限制酶切點，而且每種酶的切點
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