【正文】 到受體細胞染色體的 DNA上 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 （四）基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的獲取 (2)基因表達載體的構(gòu)建 ——最核心步驟 (3)將目的基因?qū)胧荏w細胞 (4)目的基因的檢測與鑒定 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 ① 從基因文庫 (基因組文庫或 cDNA文庫 )中獲取 文庫類型 cDNA文庫 基因組文庫 文庫大小 小 大 基因中啟動子 無 有 基因中內(nèi)含子 無 有 基因多少 某種生物的部分基因 某種生物的全部基因 物種之間的 基因交流 可以 部分基因可以 說明 基因文庫的組建過程就包含基因工程的基本操作步驟 。 質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體。 ④ 能夠自主復(fù)制并穩(wěn)定地保存。 ③ 在 DNA連接酶的作用下 ， 上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來 ？ 為什么 ？ “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 DNA連接酶與 DNA聚合酶的比較 DNA 連接酶 DNA 聚合酶 作用實質(zhì) 都是催化兩個脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵 是否需模板 不需要 需要 連接 DNA鏈 雙鏈 單鏈 作用過程 在兩個 DNA片段 之 間形成磷酸二酯鍵 將單個核苷酸加到已存在的核酸片段的 3′ 端的羥基上 ,形成磷酸二酯鍵 作用結(jié)果 將兩個 DNA片段連接成重組 DNA分子 合成新的 DNA分子 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 ——“分子運輸車” (1)類型 (2)功能： (3)應(yīng)具備條件 最常用載體 :質(zhì)粒 其他載體 :λ 噬菌體的衍生物、動植物病毒等 提醒 ①質(zhì)粒本質(zhì)是 DNA,不是細胞器 。 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 [例 ] 限制性內(nèi)切酶 Ⅰ 的識別序列和切點是 —G↓GATCC —， 限制性內(nèi)切酶 Ⅱ 的識別序列和切點是 —↓GATC —。 — G ↓ G A T C C — — C CT A G ↑ G — 用酶Ⅰ切割 — G G A TC C — — C CT A G G — ① 請畫出質(zhì)粒被限制酶 Ⅰ 切割后所形成的黏性末端 。 ④ 不同 DNA分子用同一種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末 端都相同 ,同一個 DNA分子用不同的限制酶產(chǎn)生的 黏性末端一般不相同。 ? 如果把兩種來源不同的 DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生相同的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合起來，就似乎可以合成重組的DNA分子了。該技術(shù)是在生物體外，通過對DNA分子進行人工 “ 剪切 ” 和 “ 拼接 ” ，對生物的基因進行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細胞內(nèi)進行無性繁殖，使重組基因在受體細胞內(nèi)表達，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物?！懊麕煿嬲n堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 “專題 1基因工程 ” 和 “ 專題 2細胞工程 ” 高中生物選修三復(fù)習(xí) “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 內(nèi) 容 綱 要 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 專題 1 基 因 工 程 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 、動物、醫(yī)療領(lǐng)域的具體應(yīng)用及取 得的豐碩成果 學(xué) 習(xí) 目 標(biāo) “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 本 章 知 識 網(wǎng) 絡(luò) 基因工程 理論基礎(chǔ)和概念 基 本 工 具 基因的剪刀 ——限制性核酸內(nèi)切酶 基因的針線 ——DNA連接酶 基因的運載工具 ——運載體 基 本 操 作 程 序 基因工程的應(yīng)用（略） 蛋白質(zhì)工程（略 ) “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 ： ： （ 1） _______是生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)。 ： 限制性核酸內(nèi)切酶、 __________和 _____載體的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用 DNA DNA雙螺旋 遺傳信息 DNA連接酶 質(zhì)粒 （一） 基因工程的理論基礎(chǔ)和技術(shù) “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 基因工程又叫基因拼接技術(shù)或 DNA重組技術(shù)。 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 ? 要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？ 要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端。 ③ 將一個基因從 DNA分子上切割下來 ,需要 2個限制 酶 ,同時產(chǎn)生 4個黏性末端。 在質(zhì)粒上有酶 Ⅰ 的一個切點 ， 在目的基因的兩側(cè)各有 1個酶 Ⅱ 的切點 。 —↓G A TC — …… —↓G A T C — — C T A G ↑ — …… — CT A G ↑ — 用酶 Ⅱ 切割 目的基因 — GA TC — …… — G A T C — — C T A G — …… — CT A G — 目的基因 ② 請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶 Ⅱ 切割后所形成的黏性末端 。 上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同 ， 所以能連接起來 。 ① 能在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制； ② 有一個至多個限制酶的切割位點 ,以便于與外源 基因連接； ③ 有特殊的遺傳標(biāo)記基因 ,供重組 DNA的檢測和鑒定?，F(xiàn)在習(xí)慣上用來專指細菌、酵母菌和放線菌等生物中核以外的 DNA分子。 “名師公益課堂 ” 《 主講標(biāo)題 XXXXXX》 高中 XXXX學(xué)科 大腸桿菌質(zhì)粒的分子結(jié)構(gòu)示意圖： DNA 大腸桿菌細胞 質(zhì)粒 目的基因插入位點 復(fù)制原點 氨芐青霉素抗性基因 “標(biāo)記基因” 質(zhì)粒一般有幾個到幾