【正文】 100℃加熱5小時(shí)高溫空白→20ml水浴100℃加熱5小時(shí)光照破壞→20ml光照箱4500LX照射40小時(shí)光照空白→20ml光照箱4500LX照射40小時(shí)酸破壞→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘酸空白→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘堿破壞→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時(shí)堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時(shí)氧化破壞→20ml30%雙氧水3ml，氧化空白→20ml30%雙氧水3ml，取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。（～12，制劑的質(zhì)量控制一第167~178頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片吡啶3磺酸檢查破壞試驗(yàn)結(jié)果名稱吡啶3磺酸總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未 破 壞/合格63379100/高溫破壞合格62286光照破壞合格71121酸 破 壞合格69644堿 破 壞合格73152氧化破壞合格62279計(jì)算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑不干擾本品的測(cè)定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測(cè)定本品有關(guān)物質(zhì)的專屬性良好。雜質(zhì)對(duì)照溶液：取雜質(zhì)Ⅶ工作對(duì)照品適量，精密稱定，作為對(duì)照品溶液。 吡啶3磺酸檢查方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容儀器設(shè)備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測(cè)器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測(cè)器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為261nm；。溶液穩(wěn)定性供試品溶液室溫放置8小時(shí)內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。線性～，相關(guān)系數(shù)R2=1準(zhǔn)確度%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%精密度重復(fù)性試驗(yàn)：測(cè)得吡啶3磺酸含量RSD=%。檢測(cè)限。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。（~102，制劑的質(zhì)量控制一第140~166頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗(yàn)結(jié)果1耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍沃諾拉贊雜質(zhì)Ⅰ雜質(zhì)Ⅱ雜質(zhì)Ⅲ雜質(zhì)Ⅳ雜質(zhì)Ⅴ雜質(zhì)Ⅵ分離度分離度分離度分離度分離度分離度分離度色譜原條件 流速流動(dòng)相比例54465050pH值鹽濃度 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗(yàn)結(jié)果2耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍雜質(zhì)Ⅲ%雜質(zhì)Ⅰ%雜質(zhì)Ⅱ%雜質(zhì)Ⅳ%雜質(zhì)Ⅴ%雜質(zhì)Ⅵ%單雜%總雜%色譜原條件流速流動(dòng)相比例54465050pH值鹽濃度平均值（%）RSD（%）結(jié)論：此方法測(cè)定本品有關(guān)物質(zhì)耐用性良好。精密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流動(dòng)相A稀釋制成至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。取重復(fù)性項(xiàng)下供試品。 耐用性試驗(yàn) 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時(shí)的耐用性情況，通過改變流動(dòng)相比例、流動(dòng)相pH值、流動(dòng)相鹽濃度、流速等色譜因素進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算含雜質(zhì)的量。（～75，制劑的質(zhì)量控制一第129~139頁(yè)）按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中各雜質(zhì)的量。同法配制3份。同法配制3份。同法配制3份。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按外標(biāo)法計(jì)算各已知雜質(zhì)的百分含量。（~64，制劑的質(zhì)量控制一第114~128頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（供試品溶液）名稱/時(shí)間0h3h6h9h12h平均值RSD%未知雜質(zhì)1405937013886399842823985雜質(zhì)Ⅰ10040953298789514104759888沃諾拉贊435466514354604943473026434439244343410143488750雜質(zhì)Ⅱ214442134721812221022392322126未知雜質(zhì)2835182367654934995788634 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（對(duì)照溶液）名稱/時(shí)間0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊223519224561224146224257224210224139 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（雜質(zhì)對(duì)照品溶液）峰面積/時(shí)間0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質(zhì)Ⅰ232331232403232799232538230054232025雜質(zhì)Ⅱ250524250764251106251264250123250756雜質(zhì)Ⅲ154679154344153319153644154283154054雜質(zhì)Ⅳ222815222039224030223597222471222990雜質(zhì)Ⅴ194349190641188570185235180721187903雜質(zhì)Ⅵ244802246539250233246858237531245193結(jié)論：供試品溶液、對(duì)照溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。分別取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對(duì)照品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對(duì)照品溶液。 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液：取本品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相A適量，振搖，使充分溶解，加流動(dòng)相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 取重復(fù)性項(xiàng)下供試品，由不同試驗(yàn)人員分別在不同日期、不同儀器檢查其有關(guān)物質(zhì)。重復(fù)測(cè)定6次，考察精密度。分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。，取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ，雜質(zhì)Ⅲ，雜質(zhì)Ⅳ，雜質(zhì)Ⅴ，雜質(zhì)Ⅵ，混合均勻，作為供試品。將上述100片樣品置于研缽中研細(xì)，混勻，作為供試品粉末。線性關(guān)系試驗(yàn) 同原料藥。檢測(cè)限試驗(yàn) 同原料藥。定量限試驗(yàn) 同原料藥。破壞性試驗(yàn) 破壞試驗(yàn)溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白→20ml無降解處理未破壞+→20ml無降解處理高溫破壞+→20ml水浴100℃加熱13小時(shí)高溫空白→20ml水浴100℃加熱13小時(shí)光照破壞+→20ml光照箱4500LX照射45小時(shí)光照空白→20ml光照箱4500LX照射45小時(shí)酸破壞+→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時(shí)酸空白→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時(shí)堿破壞+→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時(shí)堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時(shí)氧化破壞+→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時(shí)氧化空白→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時(shí)取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。分別取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對(duì)照品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對(duì)照品溶液。梯度表如下：時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%）01000231000452080501000601000 溶液配制 供試品溶液：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相A適量，振搖，使充分溶解，加流動(dòng)相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。各已知雜質(zhì)測(cè)的含量的RSD均小于10%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對(duì)照溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液室溫放置12小時(shí)內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。線性～，相關(guān)系數(shù)R2=雜質(zhì)Ⅰ～，相關(guān)系數(shù)R2=雜質(zhì)Ⅱ～，相關(guān)系數(shù)R2=雜質(zhì)Ⅲ～，相關(guān)系數(shù)R2=雜質(zhì)Ⅳ～，相關(guān)系數(shù)R2=雜質(zhì)Ⅴ～，相關(guān)系數(shù)R2=雜質(zhì)Ⅵ～，相關(guān)系數(shù)R2=準(zhǔn)確度雜質(zhì)Ⅰ%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%雜質(zhì)Ⅱ%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%雜質(zhì)Ⅲ%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%雜質(zhì)Ⅳ%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%雜質(zhì)Ⅴ%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%雜質(zhì)Ⅵ%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%精密度重復(fù)性試驗(yàn)：測(cè)得雜質(zhì)Ⅰ含量RSD=%，雜質(zhì)Ⅱ含量RSD=%，雜質(zhì)Ⅲ含量RSD=%，雜質(zhì)Ⅳ含量RSD=%，測(cè)得雜質(zhì)Ⅴ含量RSD=%，雜質(zhì)Ⅵ含量RSD=%，其他單雜含量RSD=%，其他總雜含量RSD=%。檢測(cè)限；雜質(zhì)Ⅰ；雜質(zhì)Ⅱ；雜質(zhì)Ⅲ；雜質(zhì)Ⅳ；雜質(zhì)Ⅴ；雜質(zhì)Ⅵ的檢測(cè)限為60ng。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。 分析方法的驗(yàn)證 按照《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等以及《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄中有關(guān)的指導(dǎo)原則提供以下方法學(xué)驗(yàn)證資料。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)照品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。如MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，判檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判未檢出大腸埃希菌。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽(yáng)性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。于24h在366nm紫外光下觀察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照。（2）控制菌的檢查法大腸埃希菌：試驗(yàn)組取1：10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10～100cfu/ml試驗(yàn)菌，3537℃培養(yǎng)1824h；，接種至5mlMUG培養(yǎng)管內(nèi)，培養(yǎng)5h與24h時(shí)，置紫外燈366nm處觀察，然后沿培養(yǎng)基管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液。菌液組測(cè)定試驗(yàn)所加入試驗(yàn)菌的菌數(shù)。直接接種法：取1:，分別加入1ml約含50～100cfu/m15株試驗(yàn)菌。：用平皿法，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅺ J）。 微生物限度：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、%氯化鈉溶液。 計(jì)算公式：含量（%）=（W對(duì)分別為對(duì)照品的稱樣量，mg；P對(duì)為對(duì)照品的含量；A樣、A對(duì)分別為供試品、對(duì)照品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對(duì)分別為供試品溶液、對(duì)照品溶液的稀釋體積） 分別測(cè)定每片以標(biāo)示量為100的相對(duì)含量，求其均值和標(biāo)準(zhǔn)差以及標(biāo)示量與均值之差的絕對(duì)值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定；若，且，則應(yīng)另取20支復(fù)試，根據(jù)初、復(fù)試結(jié)果，計(jì)算30支的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和標(biāo)示量與均值之差的絕對(duì)值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定。按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算每片中沃諾拉贊的含量。 對(duì)照品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)照品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊10mg），精密稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm）； 流動(dòng)相：（）甲醇（52:48）； 溶劑：流動(dòng)相； 流速：。 含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅹ E） 高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。具體試驗(yàn)操作：取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄X C第二法），轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液適量濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)照品適量，用溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，精密量取供試品溶